胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgG抗体的研究

目的探索并建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgG抗体的方法.方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记鼠抗人IgG单克隆抗体,制成免疫层析测试条.血清中甲、戊型肝炎的特异性IgG抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg,HEAg)、抗体(羊抗鼠lgG)结合形成肉眼可见的红色线条.结果自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份,各单项指标抗-HAV IgG,抗-HEV IgG两法总符合率分别为98.9%,98.9%,检测灵敏度可达1μg/L.结论用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性IgG抗体的GICA试条的制备条件已基本建立,其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备,有广泛的应用价值.     

胆酸钠多克隆抗体的制备及其快速检测方法研究

目的:探索用胶体金免疫层析法快速检测胆酸钠含量。方法:用碳二亚胺法合成的免疫抗原胆酸钠-BSA,免疫新西兰白兔,制备抗胆酸钠多克隆抗体。用酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定特异性抗体效价。制备胆酸钠—OVA抗原—胶体金复合物,组装检测试纸。结果:胆酸钠抗体的效价为1∶80 000,建立的胶体金快速测定法对胆酸钠的检测限为12μg/mL。结论:试纸条法是快速检测胆汁酸含量的有效方式,在临床检测方面具有广阔的运用前景。     

牛奶中三聚氰胺残留胶体金免疫层析快速检测方法研究

为建立牛奶中三聚氰胺免疫层析快速检测方法,采用胶体金偶联特异性三聚氰胺抗体,优化试纸条T线抗原包被量、金标抗体用量、二抗稀释倍数等条件,构建三聚氰胺免疫层析试纸条.结果表明,T线抗原包被量为0. 25μg/mL,金标抗体用量为9. 0μL/条,二抗稀释倍数为1:100时效果最佳;最优条件下该试纸条的最低检出限为0. 25μg/mL,结果可在5 min内进行判读,且牛奶样品不需任何处理可直接进行测定.本研究建立的免疫检测方法适用于牛奶中三聚氰胺的检测.     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒lgM抗体的研究

目的建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgM抗体的方法.方法采用胶体金标记鼠抗人IgM单克隆抗体,制成免疫层析测试条.血清中甲、戊型肝炎的特异性抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAag,HEAg)、抗体(羊抗鼠IgM)结合形成肉眼可见的红色线条.结果自制的GICA测试条与EIA对比检测血清标本188份,各单项指标抗-HAVIgM,抗-HEVIgM两法总符合率依次为97.9%,98.4%,检测灵敏度可达2μg/L.结论用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性抗体的GICA测试条的制备条件已基本建立,其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备.     

鸡传染性支气管炎病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制

[目的]建立一种快速、灵敏的胶体金免疫层析法(Colloidal-gold immunochromatography assay),用以检测禽类早期感染鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)和监测IBV疫苗接种免疫水平.[方法]将重组IBV核衣壳(Nucleocapsid,N)蛋白包被在在试纸条检测线,羊抗兔IgG包被在试纸条控制线,用胶体金-兔抗鸡IgG偶联物作为示踪剂,检测血清中IBV抗体.[结果]制备所得的胶体金免疫层析试纸条与IBV抗体阳性血清反应呈阳性,与鸡新城疫病毒抗体阳性血清、鸡传染性法氏囊病毒抗体阳性血清、鸡毒霉形体抗体阳性血清和SPF标准鸡血清未发生交叉反应;当IBV抗体阳性血清以1:35比例稀释后,依然可以用该试纸条检出;该试纸条在60 d的保存期内重复性良好;以从不同养殖场采集到的鸡血清样本作为测试对象,比较该试纸条和进口 ELISA试剂盒的检测结果,两者符合率为97.44％.[结论]成功制备了检测耗时短、检测限低、特异性强、稳定性好的IBV抗体检测胶体金免疫层析试纸条,为鸡传染性支气管炎的早期诊断以及免疫监测提供了简便高效的技术方法.     

脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体胶体金检测试纸条的研制

目的:为研制快速检测脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体的胶体金试纸条.方法:以辛酸-硫酸铵沉淀法纯化脊髓灰质炎病毒Ⅰ型单克隆抗体,用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,胶体金标记单抗,再结合脊灰病毒抗原形成复合物,固定于金标垫上,将鼠抗人IgG和羊抗鼠IgG分别包被于试纸条的T (检测线)处和C (质控线)处,应用该试纸条进行性能检测.结果:以已知的脊灰病毒Ⅰ型阳性血清作为检测样品,试纸条检测的灵敏度为1:80;特异性试验证明该试纸条与甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、麻疹病毒抗体阳性血清没有交叉反应;检测结果与脊灰病毒Ⅰ型疫苗抗体检测试剂盒(ELISA)试验的符合率为86.7%.结论:该试纸条检测脊灰病毒Ⅰ型的抗体水平具有较好的特异性与灵敏性,适用于大规模临床血清抗体水平检测,具有良好的应用前景.     

基于适配体的胶体金色谱层析试纸条快速检测肌酸激酶同工酶

研究基于适配体的胶体金色谱层析试纸条快速检测肌酸激酶同工酶,用于揭示长期飞行下航天员潜在的心肌和肌肉损伤.利用SELEX方法筛选得到的肌酸激酶同工酶适配体,并优选出与肌酸激酶同工酶有较强亲和能力的核酸适配体应用于胶体金免疫层析试纸条,通过优化胶体金颗粒大小、缓冲液浓度等条件,成功建立了一种基于适配体的胶体金试纸法用于CK-MB的快速检测.实验结果表明,通过基于磁珠的核酸适配体筛选方法筛选出的与肌酸激酶同工酶有亲和力的核酸适配体,能够用于构建适配体-适配体夹心胶体金免疫层析试纸条并成功应用于82 nM以上的肌酸激酶同工酶的快速、可视化检测,同时,该免疫层析试纸条具有良好的特异性和稳定性,可用于未来空间医学即时检测.     

大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析快速检测法的建立

建立一种大肠杆菌O157∶H7的胶体金免疫层析快速筛查方法.利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测大肠杆菌O157∶H7,对该法进行敏感性、特异性和食品样品的适用性分析.该法能在10 min内完成检测;该试纸条仅与O157∶H7阳性样品发生特异性反应;大肠杆菌O157∶H7的最低检出浓度为1×105 cfu/mL.新建立的大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析试验简便、快速,特异性和灵敏度较好,适用于现场样品的快速筛查.     

胶体金免疫试纸法快速测定雌三醇

雌三醇(E3)在临床诊断、日用化工和畜牧业等领域具有广泛应用,同时它也是一种环境污染物,对E3的检测具有科学和应用意义.本研究采用竞争性免疫层析技术,以E3单克隆抗体-纳米胶体金复合物作为金标抗体,以E3偶联抗原为检测线(T线)、以羊抗鼠抗抗体为控制线(C线),通过条件的优化,制备出检测E3的胶体金试纸条.当试纸条C线和T线同时显色时,结果为阴性;当试纸条仅C线显色时,结果为阳性.所得检测试纸条测加标水样的最低检测限为100μg/L,测加标奶样的最低检测限为100μg/L,反应时间为10min,与雌酮、雌二醇、己烷雌酚等环境雌激素无交叉反应,具有良好的选择性.     

心肌肌钙蛋白I胶体金免疫层析快速检测法的建立

为建立一种快速、简单实用的检测心肌肌钙蛋白I的胶体金免疫层析法(GICA),用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,用鼠源抗cTnI单克隆抗体进行胶体金标记,采用胶体金免疫层析技术及双抗体夹心法原理检测心肌肌钙蛋白I,并对该方法进行敏感性、特异性和稳定性分析.结果:该方法能在10 min内完成检测;该试纸条仅与心肌肌钙蛋白I阳性样品发生特异性反应;检测心肌肌钙蛋白I的最低检出质量浓度为1.0 ng/mL;与化学发光免疫分析法(CLIA)对比检测63份临床标本,阳性符合率97.0%,阴性符合率100%,总符合率98%,试纸条性能稳定.     

氯霉素残留胶体金免疫层析快速检测法的研制

建立一种快速、简易的检测样品中氯霉素残留含量的胶体金免疫层析法.将抗氯霉素单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的氯霉素抗原包被在硝酸-醋酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线),其与待测样品中氯霉素竞争结合胶体金标记的氯霉素单克隆抗体,并能以颜色直观显示检测的结果.用GICA与ELISA试剂盒对比检测了...     

胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析方法,建立对人绒毛膜促性腺激素的快速定量检测方法．该检测方法可以在15min内完成对HCG的定量检测,灵敏度可达25mIU／mL,线性范围25～10000mIU／mL．与人促黄体生成素（hLH）、人促甲状腺激素（hTSH）、人卵泡刺激素均无交叉反应,所建立的检测人绒毛膜促性腺激素的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的人绒毛膜促性腺激素,在异位妊娠的早期诊断及过程监控中具有较为广阔的应用前景．     

Synthesis and size control of gold nanoparticles in regular system of amphiphilic molecules

Two synthetic techniques for colloidal gold particles was improved by using SDS. And colloidal Au particles of mean diameters between 5 and 14 nm are synthesized, that exhibit improved monodispersity relative to previously published methods. According to the particular molecular structure of surfactants and different electrons distribution arising from colloidal small sizes and high surface/ volume ratios, it is found that there are a complex between SDS and Au³⁺ (and Au atoms ) during synthesizing colloidal gold nanoparticles and as a stablizer for Au particles, SDS can prevent their further growth. So the colloidal gold particles is monodispersize and more steady. But other surfactants don't affect the process of synthesizing gold nanoparticles because of their structures and properties different from SDS. Gold nanoparticles have considerable bioaffinity and can be applied to study the adsorption of proteins or polypeptides.     

辣椒、花椒中罗丹明B免疫层析分析

为建立以胶体金标记抗体为基础的罗丹明B(RB)快速检测技术,利用戊二醛法将RB的衍生物罗丹明123(R123)与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)分别合成完全抗原(R123-BSA)和包被抗原(R123-OVA),对雌性大耳白兔皮下注射R123-BSA获得多克隆抗体.胶体金作为示踪标记物标记到硝酸纤维素膜(NC膜)上,涂覆R123-OVA作为检测线,用羊抗兔IgG作为质控线,通过优化实验条件,开发了渗滤式胶体金免疫快速检测试纸条,研制出RB标准品浓度比色卡.以比色卡作为判定依据,以辣椒、花椒为研究对象,消除基质影响,进行试纸条检测.结果表明:RB线性为0.01~20 ng/mL,其最低检出限为0.5 ng/mL,试纸条显色结果明显.该试纸条实验成功,无需特殊设备即可实现现场快速检测,适用于快速定性检测香料中RB.     

单分散PS微球的制备及其胶体晶体的组装

无皂乳液聚合法制备了不同尺寸单分散的PS微球,采用离心法和垂直沉降法将之组装成具有光子带隙的人工欧泊.采用扫描电子显微镜(SEM)和可见-紫外光度计对PS胶体晶体的形貌、结构和光学性能进行了观察测试.结果表明厚度较大的PS胶体晶体可以通过离心法组装制得,当转速为1 000 r/min、干燥温度为40℃时可以组装得到高质量的PS胶体晶体,而垂直沉降法则较适合组装薄型的胶体晶体.从样品的光学特性讨论了适合组装的乳液固含量,改变组装胶体晶体的PS微球粒径可以得到不同的光带隙波长.     

白芷细胞外CaM结合位点的扫描电镜定位研究

利用胶体金标记的具有生物活性的钙调素（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ,ＣａＭ）,对白芷愈伤组织培养细胞胞外钙调素结合位点进行了扫描电镜定位,发现白芷愈伤组织培养细胞表面有不同密度的金颗粒,证明其细胞表面存在着ＣａＭ结合位点．     

快速检测腹泻患儿粪便中的轮状病毒抗原分析

目的:探讨粪便中轮状病毒对临床诊断的价值。方法:用单克隆抗体即金标免疫层析法,检测分析腹泻患儿粪便中的轮状病毒抗原。结果:表明检测粪便中轮状病毒是诊断轮状病毒肠炎敏感的方法。结论:粪便中轮状病毒抗原的检测,对临床诊断轮状病毒肠炎提供了依据。