左氧氟沙星人工抗原的制备及其抗体鉴定

用N-羟基琥珀酰亚胺法把左氧氟沙星与载体蛋白牛血清白蛋白偶联制备免疫抗原,用氯甲酸异丁酯法将左氧氟沙星与鸡卵清蛋白偶联,制备包被检测抗原,采用紫外扫描法对合成的抗原进行鉴定.用免疫抗原免疫大白兔获得抗左氧氟沙星多克隆抗体血清,经间接ELISA试验检测特异性抗体效价,测得效价达1:212以上.通过紫外扫描及间接ELISA试验,结果表明,制备的抗原和抗体获得成功.     

细胞周期蛋白质依赖性激酶CDK2多克隆抗体的制备和鉴定

我们采用PCR技术合成编码CDK2肽段的基因，将其置于谷胱甘肽转移酶（GST）编码基因的下游，在IPTG诱导下，于E．coli中诱导表达了GST-CDK2肽融合蛋白质，以此融合蛋白质作为免疫原免疫家兔制备抗CDK2的多克隆抗体，经Western Blot检测证明：该抗体能够特异地识别CDK2蛋白质，可作为CDK2的特异性检测抗体，用于研究细胞周期和细胞凋亡进程中CDK2的作用．     

RH株弓形虫抗原及高效价多克隆抗体的制备

通过制备和分析弓形虫抗原蛋白，并以此抗原制备高效价的兔抗弓形虫多克隆抗体，为弓形虫的免疫检测和诊断提供有效的方法和途径，同时也为基因工程产物的鉴定提供方便有效的检测手段．速殖子主要来源于感染后72～74h获得的腹水，通过常规方法制备和提纯弓形虫可溶性抗原，采用SDS-AGE方法分析抗原蛋白的分子量．以抗原和福氏佐剂制备成完全和不完全福氏佐剂通过脊柱两旁皮下多点免疫的途径免疫新西兰大白兔，制备兔抗弓形体多克隆抗体，间接ELISA法检测血清中抗体的效价．经过观察所获得的虫体阶段主要处在宿主细胞巨噬细胞内而尚未逸出阶段，通过对结果的分析，所制备的弓形体抗原的分子量主要集中在17～156ku之间，与文献报道有差异，兔抗弓形体抗体效价在60000以上．该研究结果将为弓形体的蛋白质研究，免疫诊断、预防及有效治疗奠定基础．     

重金属铅多克隆抗体的制备及纯化

制备重金属铅完全抗原,进而制备和纯化重金属铅的多克隆抗体。使用双功能螯合剂p-SCN-Bn-DTPA、Pb2+标准溶液和牛血清白蛋白(BSA)制备重金属铅的完全抗原Pb-DTPA-BSA;运用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)方法判断完全抗原Pb-DTPA-BSA是否合成成功,并应用紫外分光光度计测定免疫抗原Pb-DTPA-BSA的浓度;取0.5 mg免疫抗原Pb-DTPA-BSA加入弗氏佐剂乳化后免疫家兔,制备抗重金属铅多克隆抗体,并运用凝胶柱层析法纯化抗重金属铅多克隆抗体,SDS-PAGE方法判定抗重金属铅多克隆抗体的纯化结果。SDS-PAGE结果显示成功制备重金属铅的完全抗原Pb-DTPA-BSA,其浓度为3.4mg/mL;应用免疫抗原Pb-DTPA-BSA免疫家兔,成功制备抗重金属铅多克隆抗体;应用凝胶柱层析法纯化获得高纯度抗重金属铅多克隆抗体。成功制备重金属铅的完全抗原PbDTPA-BSA,并成功制备和纯化抗重金属铅的多克隆抗体。     

兔抗PEB1多克隆抗体的制备及鉴定

摘要：【目的】利用纯化的空肠弯曲菌表面蛋白PEB1,制备其多克隆抗体。【方法】用PEB1蛋白作为抗原免疫兔,分离血清得到兔抗PEB1多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价,并用Western-Blotting验证。【结果】PEB1蛋白免疫兔后,得到了兔抗PEB1多克隆抗体,间接ELASA法检测表明兔抗PEB 1血清效价达到1：10 000,Western印记检测表明,该抗体能与PEB1蛋白发生特异性结合,其特异性与敏感性均较好。【结论】获得了高效价的PEB1多克隆抗体。     

四环素人工抗原的合成与鉴定

采用碳二亚胺法将四环素半抗原与载体蛋白BSA连接制备人工免疫抗原,并用同样方法将四环素与载体蛋白OVA连接制备人工包被抗原.经紫外扫描分析和动物免疫试验证实人工抗原合成成功,为检测试剂盒的研制奠定了基础.     

兔抗Myosin Ⅹ多克隆抗体的制备及初步应用

为制备兔抗肌球蛋白Ⅹ(myosinⅩ,MyoⅩ)多克隆抗体,合成了含有MyoⅩN端1 000～1 021个氨基酸的多肽,将纯化后的多肽与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpethemocyanin,KLH)进行交联;通过背部皮下免疫新西兰大白兔获得免疫血清,并通过ELISA、免疫印迹、免疫荧光等分析对免疫血清进行了初步的验证.结果表明:经过4次免疫后可获得免疫血清,ELISA检测表明抗体终效价达到1∶51 200,抗原吸附实验进一步证明了此多克隆抗体的特异性.利用获得的多克隆抗体检测了多种组织中MyoⅩ的表达,发现兔抗MyoⅩ多克隆抗体可特异性识别多种组织中的MyoⅩ.免疫荧光染色表明该抗体可以显示MyoⅩ在COS-7细胞、NLT细胞和神经元中的分布.     

胆酸钠多克隆抗体的制备及其快速检测方法研究

目的:探索用胶体金免疫层析法快速检测胆酸钠含量。方法:用碳二亚胺法合成的免疫抗原胆酸钠-BSA,免疫新西兰白兔,制备抗胆酸钠多克隆抗体。用酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定特异性抗体效价。制备胆酸钠—OVA抗原—胶体金复合物,组装检测试纸。结果:胆酸钠抗体的效价为1∶80 000,建立的胶体金快速测定法对胆酸钠的检测限为12μg/mL。结论:试纸条法是快速检测胆汁酸含量的有效方式,在临床检测方面具有广阔的运用前景。     

核糖体蛋白RPL15多克隆抗体的制备与细胞内定位

为了解核糖体大亚基蛋白RPL15在细胞中的定位和功能,设计并合成了RPL15蛋白的多肽,作用于抗原免疫兔子,使其产生特异性多克隆抗体,利用蛋白免疫印迹和免疫荧光方法检测RPL15抗体的特异性.结果证实本研究成功制备并纯化了RPL15的多克隆抗体,且该抗体可以特异性识别RPL15蛋白.免疫荧光实验表明RPL15定位于细胞质和细胞核中,主要定位于核仁并呈点状分布,且与UBF、FBL和C23存在部分共定位.     

氟苯尼考人工抗原的制备与鉴定

将氟苯尼考（FFC）进行化学修饰引入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的氟苯尼考半琥珀酸醋（FFC—HS）．采用混合酸酐（MA）法将FFC—HS与牛血清白蛋白（BSA）偶联合成人工抗原BSA—FFC—HS．通过紫外（UV）、凝胶电泳（SDS—PAGE）进行鉴定,证明BSA—FFC—HS偶联成功,得到了结合比较好的人工抗原,为进一步制备抗FFC抗体提供了良好的免疫原．     

环丙沙星人工完全抗原的制备与鉴定

分别采用碳二亚胺法和氯甲酸异丁酯法制备环丙沙星的牛血清白蛋白与卵清白蛋白载体的人工完全抗原CPFX-BSA和CPFX-OVA.人工完全抗原经SDS-PAGE凝胶电泳初步鉴定后,考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量分别为1.24和0.58 mg.mL-1,将偶联抗原稀释至一定浓度,紫外分光光度法测其波形,根据偶联前后波形及吸收峰的变化鉴定偶联物分子量大于载体蛋白,证实CPFX与BSA和OVA偶联成功,根据游离半抗原、载体蛋白和完全抗原偶联物各自的紫外吸光度、摩尔吸光系数,初步定量计算出偶联结合比分别为7.2∶1和6.4∶1.质谱法测定CPFX-BSA和CPFX-OVA分子量分别为6.895×104和4.586×104,推算偶联比分别为5.6∶1和4.2∶1,进一步证实了偶联比和人工抗原制备成功.制备的人工完全抗原CPFX-BSA和CPFX-OVA可分别作为免疫抗原和包被抗原,为环丙沙星单克隆抗体的制备以及环丙沙星快速检测试剂盒的研制奠定基础.     

传染性非典型肺炎病毒核蛋白的表达与活性检测

用PCR方法，人工合成传染性非典型肺炎病毒(SARS-CoV)核蛋白(N)全编码基因，并构建原核表达载体．在大肠杆菌中进行表达．结果重组N蛋白表达产量占菌体总蛋白的40％以上，主要以可溶形式存在．用SARS患者急性期血清进行蛋白印迹检测，表明可溶形式和包含体形式均有明显活性．包含体形式的重组蛋白经纯化后纯度可达90％以上，活性与纯化前相当，可作为SARS抗体诊断试剂盒的抗原原料．     

基于银钯铂复合纳米材料标记的癌胚抗原免疫传感器的研制

合成了中空囊状银钯铂复合纳米材料,并以此为标记物,研制了一种标记型癌胚抗原(CEA, Carcinoembryonic Antigen)免疫传感器用于CEA的快速检测.首先利用Au-SH键将CEA抗体(anti-CEA)固定在金电极表面,与CEA抗原免疫结合后,再与银钯铂复合纳米材料标记过的anti-CEA结合,制成夹心型的免疫传感器.考察了免疫传感器的电化学特性,同时研究了培育时间和抗体固定浓度等实验条件对传感器性能的影响.该传感器在CEA抗原质量浓度为0.1～40 ng/mL的范围内有良好的线性关系,检测下限为0.03 ng/mL.实验结果表明: 该免疫传感器操作简便、灵敏度高、选择性好,具有良好的重现性和稳定性.     

Somatic mutation and the maturation of immune response to 2-phenyl oxazolone

Studies on the development of the immune response suggest that the repertoire of expressed antibody specificities is strongly influenced by antigen (reviewed in ref. 1). One way in which this influence is manifested is by a progressive increase in the affinity of antibody for antigen with time after immunization. This phenomenon, termed the 'maturation' of the immune response, must be due to a change in the structure of the antibody being synthesized. However, the precise nature of the changes involved and the genetic mechanisms used to produce them have not been clearly defined. We have now investigated the maturation of the immune response to the hapten 2-phenyloxazolone by mRNA sequencing of specific hybridomas. We conclude that somatic mutation of germ-line encoded genes plays a major role in the generation of antibodies with increased affinity for oxazolone with time after immunization.     

Expression of E1 gene of a hepatitis C virus inE. coli and protein purification

The cDNA containing full encoding region of E1 antigen of HCV was cloned into an expression plasmid pRSETHisB. The recombinant plasmid pRSETE1 was introduced into the BL21 (DE3) strain ofE. coli. The engineering bacteria harbouring the pRSETE1 was cultivated in 2YT medium at 37°C. When the Expression of E1 protein was induced by 1 mmol IPTG, the bacteria was killed and the number of living cell was droped down from 10⁷ to 10³ cell/mL one hour post induction. Suggest that E1 protein is poisoned toE. coli. However, the 26kD polypeptide of E1 fussion protein still synthesized in appropriate condition. The expression level was about 10% of total protein 4 h after inducing. The E1 protin was purified by Ni²⁺-NTA-Agarose column chromatography to homogeneous. The purified E1 protein was sensitive and specific in reaction with anti-HCV antibody in sera. Supported by the Science Committec of Hubei Province Ye Linbai: born in Feb. 1948. Professor     

盘基网柄菌allC的克隆、表达和多克隆抗体的制备

运用RT-PCR技术从盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)总mRNA中克隆到了尿囊酸酶基因(allC),该基因编码区开放读框长1 100bp,编码的蛋白约42kD.由于是在野生型和突变型细胞中差异表达的片段,表明该基因在盘基网柄菌多细胞发育中起到重要作用,因此将allC克隆入融合表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达带有6个组氨酸标签的尿囊酸酶(ALC)融合蛋白,经镍柱亲和层析,获得了电泳纯蛋白.用纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.ELISA测得制备的抗ALC蛋白的多克隆抗体的效价可达1∶64 000,Western Blotting检测证明该抗体有较强的针对ALC蛋白的专一性.这些数据表明重组质粒表达的ALC融合蛋白具有良好的抗原性,制备ALC的多克隆抗体有良好特异性和效价,能够满足针对ALC免疫印迹和细胞内定位检测等实验要求,为深入研究ALC蛋白在盘基网柄菌多细胞发育的功能作用提供了有力工具.     

整合素连接激酶相关磷酸酶（ILKAP）抗体的制备及其特异性分析

以整合素连接激酶相关磷酸酶（ILKAP）全蛋白为抗原, 采用腿部肌肉注射和耳缘静脉注射相结合的方法对新西兰大白兔进行免疫, 共免疫6次, 最
终获得ILKAP抗血清. 采用Protein A agrose柱纯化抗体, 获得ILKAP的多克隆抗体. 免疫印迹分析表明, 所获得的ILKAP多克隆抗体具有较高的特异性, 间接ELISA方法测定ILKAP多克隆抗体的滴度为1 ∶1 600. 免疫荧光分析表明, 所获得的ILKAP多克隆抗体在细胞水平应用效果较好.     

双抗原夹心ELISA检测抗鳗弧菌抗体效价的研究

建立检测抗鳗孤菌抗体效价的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性。采用高碘酸盐法对鳗孤菌抗原进行辣根过氧化物酶标记,并通过血清抗体效价比较双抗原夹心ELISA与微量凝集法的优越性。结果显示：标记蛋白含量为2．5mg的抗原所需HRP的最适量为0．20rag。以超声破碎后鳗弧菌离心上清为最适标记抗原,其工作浓度为12．25mg／L．并且双抗原夹心ELISA操作简易具有较高的敏感性和特异性。