苦瓜过氧化物酶的提取分离及性质测定

从苦瓜(Momordica charantia L.)中分离和纯化过氧化物酶(POD),分别测定其最适pH值、最适温度、热稳定性、底物浓度对酶活性的影响。结果表明:苦瓜过氧化物酶以邻苯二胺为底物时λmax=425nm,Km=4.6×10-3,Vmax=0.137unit/s,最适pH值为4.6,最适温度是50℃。在温度为50℃时过氧化物酶的酶活力最大,酶活性较高。在温度为60℃以上时过氧化物酶的失活率升高,在温度为70℃以上时过氧化物酶基本失活。抗坏血酸和半胱胺酸对过氧化物酶有明显的抑制作用,其失活率分别达到94%和92%;Al3 的抑制作用稍弱,过氧化物酶的失活率为69%;EDTA的抑制效果最不明显,过氧化物酶的失活率仅为13%。     

朊圆酵母Y0401尿酸酶的基本特性研究

研究了尿酸酶分离纯化条件和pH、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对尿酸酶酶促反应速度的影响.研究结果表明,用Triton X-100及巯基乙醇处理细胞悬液(pH 8.5),再用超声波处理破碎细胞效果最佳.硫酸铵沉淀尿酸酶的最佳浓度为75%.用Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析两步纯化步骤可获得理想纯度的酶制剂.在一定的条件下,尿酸酶的最适pH和酸碱稳定pH范围分别为8.5和5.0～12.最适温度为37℃;热稳定性较好,在50℃处理30 min时活性保持90%,在60℃处理30min时活性仍保持80%.在最适条件下,该酶催化尿酸的米氏常数(Km)为3.34×10-5mol/L.一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响也进行了研究.     

菊芋多酚氧化酶的酶学性质

为了解菊芋提取物氧化变色的机理,用分光光度法分别研究了以邻苯二酚为底物的酶促褐变反应动力学和pH值、温度、底物浓度、酶浓度对该反应的影响,以及不同底物对多酚氧化酶活性的影响,揭示了菊芋多酚氧化酶(PPO)的基本酶学性质.结果表明:菊芋PPO催化邻苯二酚氧化反应的最适pH值为4.8,最适温度为35℃;菊芋PPO的热稳定性差,85℃以上加热处理5min就可使其大部分失活;菊芋PPO酶促褐变反应动力学符合米氏方程所描述的规律,相应的动力学参数Km=0.013 mol/L,Vmax=7.5 mmol/s.菊芋PPO的活性随酶浓度的增加而增大,酶的添加量超过0.8mL后,增速逐步减小;菊芋多酚氧化酶对邻位多酚的氧化具有专一性.     

鲜切茄子酶促褐变的过氧化物酶的特性研究

鲜切茄子在切片、贮藏和货架销售过程中易发生酶促褐变,从而降低其品质。文章对鲜切茄子褐变的过氧化物酶的酶学特性进行了深入研究。结果表明:茄子皮的过氧化物酶活性略高于茄子肉,过氧化物酶的最适pH为6左右,在pH6～8范围内较稳定;该酶的最适反应温度为40℃左右,对热稳定性较差,90℃加热4 min,过氧化物酶完全失去活性。考察了抗坏血酸、L-半胱氨酸、亚硫酸氢钠对茄子过氧化物酶的抑制作用,其抑制效果依次是抗坏血酸>L-半胱氨酸>亚硫酸氢钠。     

云芝漆酶理化性质及动力学研究

主要研究pH值、金属离子、温度对云芝漆酶活性和稳定性的影响,以及该酶底物浓度效应和Km值测定.实验结果表明:Cu2+、Co2+对漆酶有激活作用,而Ag+则有抑制作用;该酶最适pH为4.8,在pH4~4.8表现出较强的稳定性;最适反应温度为40℃,低于50℃时有较好的热稳定性;Km值为4.2×10-3mol/L.     

凝血酶活力影响因素的初步研究

为探讨凝血酶的最佳作用条件,提高其止血效果,以标准凝血酶为原料,在不同温度、pH值、Ca2 浓度、底物浓度和酶浓度下研究其酶活性的变化.结果显示:凝血酶的最佳作用温度为37℃,最适pH值为7到9,最适Ca2 浓度为0.01mol/L,纤维蛋白原浓度为0.1%,凝血酶浓度为1u/mL.     

萝卜过氧化物酶的稳定性研究

本文研究了在不同pH、温度条件下,从萝卜中提取的过氧化物酶的稳定性.结果表明,萝卜过氧化物酶具有较好的热稳定性和较好的pH值稳定性,其作用最适pH值为4.8,最适温度为60℃.     

芽孢杆菌嗜热蛋白酶的性质研究

对芽孢杆菌嗜热蛋白酶的性质进行了研究.该酶的分子量为32kD,最适作用pH为9 0,最适作用温度为85℃,具有良好的pH稳定性(在60℃时,pH稳定范围为6 0～11 0;在80℃时,pH稳定范围为6 0～10 0)和热稳定性(90℃时酶活的半衰期为20min).钙离子和有机溶剂能提高该酶的热稳定性,而EDTA和PMSF则能抑制该酶活性.     

牛凝乳酶基因在毕赤酵母中的表达

构建3株表达凝乳酶的重组毕赤酵母,通过甲醇诱导收集BMMY液体培养基上清后,通过Arima K方法分别对其进行酶活测试并进行酶学性质分析.结果表明,GS115/pPIC9K-chy1菌株诱导7d后,其酶活达到1.905SU/mL重组凝乳酶的最适反应温度为45℃;最适反应pH为6;在pH 4~7之间凝乳活性相对稳定;在50℃以下可以保持酶活,在55℃处理50min后,丧失60%的活性.     

修饰性载体固定化漆酶

采用壳聚糖铜固定化和交联酶聚集体的方法固定化漆酶.探索了固定化前后漆酶的最适温度、pH,热稳定性和金属离子对其活性的影响,交联漆酶聚集体制备的条件.结果为:游离漆酶的最适温度是20℃,最适pH是4.6;壳聚糖铜固定化漆酶的最适温度是25℃,最适pH是4.0;交联漆酶聚集体的最适温度是15℃,最适pH是3.6.固定化后漆酶的热稳定性提高,不同金属离子影响固定化漆酶的活性,其中K+的激活作用尤为明显.制备交联漆酶聚集体最适戊二醛浓度为1%,最适交联时间是2 h.     

光质和光照时间对银杏叶片黄酮、内酯含量的影响

通过大田和盆栽试验研究了光质及光照时间对银杏叶黄酮和内酯含量的影响。结果表明:长波段的光(如红光)不利于黄酮和内酯类物质的积累而有利于植株的生长;短波段的光不利于生长但有利于黄酮和内酯类物质的积累。光质也影响银杏叶光合速率、PAL活性和相对生长量的大小。光照时间对银杏叶黄酮和内酯类物质含量、PAL活性无显著影响,但对植株的光合速率和相对生长量有显著的影响。     

银杏叶片三个不同发育阶段光合特性对CO_2浓度升高响应的比较研究

利用LI-6400便携式光合测定系统(L i-cor,USA),研究了银杏幼叶、全展嫩叶和成熟叶三个不同发育阶段Pn对短期CO2浓度升高的响应,并运用photosynthesis assistant software计算了它们的CCP、CE、Vcm ax、Jm ax。结果表明:CO2浓度升高过程中,银杏叶片三个发育阶段的Pn-CO2响应均为二次曲线,同一条件下,叶片光合作用的响应程度为成熟叶>全展嫩叶>幼叶,银杏成熟叶的CCP最低,CE、Jm ax和Am ax最高,作为幼叶与成熟叶过渡阶段的全展嫩叶其光合特性与幼叶更为接近。     

银杏叶总黄酮的微波提取及纯化工艺研究

通过正交设计确定银杏叶总黄酮用微波提取的最佳工艺,对溶剂浓度、料液比、提取时间和提取次数4个因素进行考察,确定其对银杏叶总黄酮提取率的影响,最佳提取条件为乙醇浓度60%、料液比1∶70、提取2次、提取时间3min,银杏叶总黄酮得率为2.061%。银杏叶总黄酮进一步采用大孔树脂分离纯化,以黄酮含量为指标确定其最佳工艺参数,选定D101型大孔树脂,以80%乙醇、2倍柱体积/h的流速洗脱、收集乙醇洗脱液至3倍柱体积,为最佳工艺。经D101型大孔树脂纯化后,提取物中黄酮含量由17.08%提高到44.17%。     

Super-distant molecular hybridization of plant seeds by ion beam-mediated gene cluster

The N beam-mediated distant molecular hybridization between Ginkgo biloba I and watermelon was studied. The results showed that the ester gene of Ginkgo biloba L was successfully expressed in two varieties of watermelon. 3-16 and SR2-14-2, in both of which the ester quantities were measured as 17.0756 μg/g and 45.9998 μg/g respectively. Meanwhile, superoxide dismutase (SOD) activity in leaves of the watennelon expressing ester gene was increased twofold as compared to that of the control, showing that ion beam could mediate distant and/or super-distant donor gene expression in the cells of a receptor. Furthermore, the molecular nechanism of distant hybridization was analyzed.     

后交联均孔树脂的筛分性能及其对银杏叶黄酮的纯化

在D avankov后交联方法的基础上,改变后交联剂的分子结构,使后交联反应过程中发生再次交联,合成了一类孔径小而均匀的新型孔结构吸附树脂。该树脂比表面积大、吸附容量大,具备小尺寸精确筛分的能力,可将模拟样品中分子尺寸不同的苯酚与槲皮素分离,苯酚去除率达到97.6%,而槲皮素基本不损失。将其用于银杏叶提取物的纯化,去除其中小分子杂质,可使得银杏黄酮的纯度由25.2%提高到50.8%。     

银杏叶中银杏内酯提取工艺研究

以银杏内酯(白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C)的提取率为指标,确定银杏叶乙醇提取的最佳提取工艺。采用正交试验设计的方法,系统考察提取时间、料液比、乙醇体积分数和提取次数4个因素对银杏叶提取工艺的影响。以异丙醇为流动相,优化高效液相色谱法(HPLC ELSD)测定银杏内酯的含量,并计算提取率。实验得出最佳提取工艺条件为提取时间1.5 h、料液比1：20、乙醇体积分数50%、提取次数3次。本工艺可以提高银杏内酯的提取率,节约试验成本,适用于工业化生产。     

银杏的优质高产栽培技术

随着人类对银杏的认识,研究的深入,天然银杏资源愈来愈不能满足人类的需要,人工栽培受到了普遍的关注,为进一步发展银杏资源,提高银杏品质和产量,全面系统地介绍了银杏优质高产栽培,并向银杏栽培推广嫁接、人工授粉等先进的现代科学技术、同时对各地银杏栽培技术,先进经验进行了全面地总结,提出当前发展银杏资源尚待解决的问题。     

谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)海藻糖合成酶的定点突变及其酶学性质研究

以已知晶体结构的Pseudomonas mesoacidophila MX-45菌株海藻酮糖合成酶（MutB）的晶体结构为模板,在SWISS-MODEL模建立谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）海藻糖合成酶的立体结构,并对初始结构作能量优化,通过氨基酸序列比对,选择TreS-glu保守区内的氨基酸R245、D247、E289、F244和保守区外的氨基酸A288进行定点突变,并对突变酶F244C、F244L、F244W、F244Y、A288G、R245X、E289X、D247N、D247E进行纯化和酶学性质研究,比较突变子对酶活性和热稳定性的影响。结果表明,R245、E289突变为其它的19个氨基酸后酶活力全部丧失,D247E和D247N也丧失酶活,F244C、F244L、F244W、F244Y和A288G的比活力分别降低到TreS-glu的38%、24%、62%、64%和35%,A288突变成T288后没有酶活。与TreS-glu相比,F244C、F244W、A288G的Km值基本不变,F244L、F244Y对底物麦芽糖的亲和力降低,F244Y的最适反应温度和TreS-glu相同,均为27℃,而F244C、F244L、F244W和A288G的最适温度提高到32℃。与TreS-glu相比,突变酶的最适反应pH值均有所下降,其中F244C、F244Y和A288G的为7.5,比TreS-glu的8.0均下降了约0.5个单位,而F244L和F244W的为6.5,比TreS-glu的8.0均下降了近1.5个单位。与TreS-glu相比,突变酶的热稳定性均有不同程度提高,其中F244Y、F244W和A288G的Tm值比TreS-glu的提高约1℃,F244L提高约2℃,F244C提高了近4℃。     

金属离子对盆栽银杏叶PAL酶活及黄酮含量的影响

对6年生盆栽银杏苗分别喷施4种金属盐诱导其叶片苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,紫外分光光度计测定银杏叶2002年的黄酮含量和PAL活性年周期变化,以及不同处理下银杏叶PAL活性.结果表明:4种金属盐处理对银杏叶中PAL活性及黄酮含量有显著的影响,从9月19日开始,分别用0.1%、0.3%的Fe-SO4、0.1%、0.2%、0.3%的ZnSO4,0.1%、0.3%、0.5%的MnSO4和0.1%、0.4%的CuSO4处理,不仅可提高叶黄酮含量,而且还延长了最佳采叶期,其中提高黄酮含量最佳处理组合为0.1?SO4 0.2% ZnSO4 0.3%MnSO4 0.4%CuSO4,该处理下,叶片黄酮含量高达1.619 4%.     

缺氧胁迫小细胞团法选育高产黄酮苷悬浮细胞系

以银杏优良品种的种苗诱导愈伤组织,考察了B5,sH,MS,White4种培养基对银杏愈伤组织生长性状和黄酮苷合成能力的影响,采用缺氧胁迫小细胞团法从愈伤组织中筛选高产黄酮苷的细胞系,并对细胞系在悬浮培养时的条件进行了优化.结果表明TZG-1培养周期18d,生长指数为4.12,黄酮苷含量为1.25％,比愈伤组织提高了257.1％;Ms培养基有利于形成质地松软的愈伤组织,当培养基中NH4+与NO3-的浓度比为20.3/39.4或10.3/29.1,蔗糖质量浓度为30g/L或40g/L,pH值为5.6～6.0时,有利于细胞生长和黄酮苷合成.