九孔鲍接种灭活病毒的免疫效果分析

通过注射灭活病毒,研究接种免疫对九孔鲍（Haliotis diversicolor supertexta）非特异性免疫机能和免疫保护效果的影响．试验结果表明：九孔鲍接种灭活病毒7d后,体液抗菌活力、溶菌活力和酚氧化酶活性都有显著提高（P〈0．01）;35d后体液抗菌活力和酚氧化酶活性回落至本底水平,与对照组差异不明显（P〉0．05）,溶菌活力则仍然高于对照组水平（P〈0．01）．注射灭活病毒A的免疫效果好于灭活病毒B,九孔鲍接受灭活病毒后引起的免疫应答强度、产生的非特异性抗感染免疫能力和特异性抗感染免疫保护效果都是前者高于后者,且免疫35d后九孔鲍获得的抗特异性病毒感染免疫保护率,灭活病毒A为30％、灭活病毒B为20％．     

不同地理种群杂色鲍的同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳技术，对采白海南三亚、香港和福建平潭3个野生杂色鲍种群，以及1个种源来自台湾的九孔鲍养殖群体共4个群体的6种同工酶系统进行分析，共检测到10个基因位点，其中2个为多态位点(多态位点比例为20％)，每个位点平均等位基因数为1．2；4个群体都不同程度地表现出纯合子过剩、杂合子不足，遗传变异量偏低．群体间遗传相似系数与遗传距离以及UPGMA聚类分析的结果表明：4个群体之间的遗传差异不大，遗传距离均小于0．01．属于种群差异水平．九孔鲍和杂色鲍的遗传差异达不到亚种水平．     

皱纹盘鲍与九孔鲍杂交的研究

采用皱纹盘鲍与九孔鲍进行杂交,并与两亲本自交进行育苗比较.结果表明:自交组的受精率、孵化率以及存活率显著高于杂交组(P0.05);皱纹盘鲍(♀)×九孔鲍(♂)和皱纹盘鲍(♂)×九孔鲍(♀)杂交的受精率分别为0.9%和3.2%,受精率存在显著差异(P0.05),而孵化率分别为12.4%和13.1%,二者差异不显著(P0.05),二者之间幼体存活率的差异也不显著(P0.05);自交组和杂交组之间的鲍生长速度存在明显的差异(P0.05),杂交组合的生长速度明显比自交组合的要快;但杂交组中稚鲍的存活率和自交组之间差异不显著(P0.05).     

人工诱导盘鲍异源雌核发育多倍体的初步研究

通过预实验,观察和了解在24.8℃下九孔鲍精子与盘鲍卵子授精,及其受精卵第一极体和第二极体出现的时间.采用不同浓度的乙烯脲失活九孔鲍精子的遗传物质,确定其最佳处理浓度和处理时间.遗传物质失活的九孔鲍精子和盘鲍卵子授精,用CB进行不同持续处理时间抑制受精卵第一极体和第二极体出现的方法诱导多倍体.实验结果表明,在水温24.8℃下,作为失活九孔鲍精子遗传物质的乙烯脲,当其质量分数为0.5‰和处理时间为10 min是比较适宜的;用遗传物质失活的九孔鲍精子与盘鲍卵子授精,在授精后10 min,用浓度为1.0 mg.dm-3的CB持续处理受精卵24 min,表观三倍体率达65%以上,表观四倍体率达5%左右.稚鲍的倍性检查中,雌核发育多倍体占总多倍体数的80%,杂交多倍体占20%.盘鲍异源雌核发育的三倍体率达到93%,四倍体率为3%左右.     

1999年春季东山九孔鲍暴发性病害研究

对 １９９９ 年春季福建省东山县九孔鲍的暴发性流行病进行调研和检测,对细菌性病原进行分离纯化、回归感染确定致病原、对致病菌进行形态（包括电镜和光镜观察）和生理生化鉴定;对病毒性病原进行电镜负染和超薄切片观察、以及病理变化分析．结果表明引起此次东山养殖九孔鲍暴发性流行病的主要致病原是 ３ 种球状病毒（５０ ｎｍ 、１１０ ｎｍ 、１５０ ｎｍ ）、溶藻弧菌和副溶血弧菌．还探讨了这些病菌和病毒的致病性,并以 ４９ 种药敏纸试验寻求防治的有效药物．     

细胞松弛素B诱导鲍异源三倍体

用细胞松弛素B(CB)处理受精卵(九孔鲍♀×盘鲍♂),抑制第二极体释放,诱导异源三倍体.在水温24℃下,分别进行了不同起始处理时间(受精后5~25 min)、不同药物处理浓度(0.2~1.0 mg/L)和不同持续处理时间(5~15 min)的实验.结果表明:受精后10~15 min开始处理的效果较好,平均担轮幼虫成活率为52.07%,平均三倍体率为55.81%;最佳药物处理质量浓度为0.4 mg/L,最佳持续处理时间为10 min,担轮幼虫率为21.43%,异源三倍体率为50.96%;药物空白对照组1(九孔鲍♀×九孔鲍♂)担轮幼虫率为85.38%,二倍体率为95.42%;药物空白对照组2(九孔鲍♀×盘鲍♂)担轮幼虫率为54.37%,二倍体率为75.87%.综合考虑,鲍异源三倍体的适宜诱导条件为:在受精后13 min,即当40%~50%受精卵排出第一极体时,用0.4 mg/L的CB处理10 min.     

九孢鲍暴发性流行病的病原及病理

1999年2－5月,山东县养殖九孔鲍暴发了大规模流行病,不少养殖场全场覆没,病鲍表现为分泌粘液增多、肝脏红肿、中部僵硬和反应迟钝,应用磷钨酸负染、超薄切片的电镜和现场检测等方法,对病鲍的病原及肝肠组织的病理情况进行观测,结果表明引发这次养殖暴发严重病害的主要病原是致病力很强的病毒和弧菌,电观察到病毒发生在细胞质中的一种称为“封入体”的泡状结构,证实了病原的入侵造成九孢鲍肝及肠等组织、细胞产生病变,描述了细胞和病毒混合感染导致九孔鲍细胞的病理变化。     

九孔鲍血细胞的研究

采用May Grunwald-Giemsa染色法研究九孔鲍(Haliotis diversicolor supertexa)血细胞的显微结构,根据细胞大小和核质比将九孔鲍血细胞分为3类:大细胞、中等细胞和小细胞.血细胞密度为(8.32±4.76)×106/mL,大细胞、中等细胞和小细胞分别占血细胞总数的3.6%、91.7%和4.7%.透射电镜下血细胞可分为两类:颗粒细胞对应于光镜下的大细胞和中等细胞;无颗粒细胞对应于光镜下的小细胞.用细胞化学的方法证明九孔鲍血细胞中含有多糖、酸性磷酸酶、非特异性酯酶和过氧化物酶,它们的阳性率分别为57.3%、95.2%、86.3%、6.7%;但是根据血细胞的这几种成分不能区分血细胞的类型.     

闽南养殖九孔鲍暴发性流行病的病原研究

从1999年春季东山县九孔鲍暴发流行病的病鲍内脏提取病原粗提液,经电镜观察和回归感染实验,证实其病原主要是病毒合并细菌感染,细菌为两种弧菌,病毒为球形,其发生基质为细胞质中一种双层膜的泡状结构,观察到病原入侵后引起鲍的组织细胞产生严重的病理变化,探讨病原的入侵途径,提出预防该流行病的一些措施.     

九孔鲍免疫防御中Ig样、补体样、CRP样物质的应答

对九孔鲍拮抗副溶血弧菌感染过程中血淋巴免疫球蛋白样物质、补体（C3、C4）样物质、C反应蛋白样物质的变化进行检测,结果表明,在拮抗副溶血弧菌感染的免疫应答中,九孔鲍血淋巴液中免疫球蛋白样物质IgG-like、IgA-like、IgM-like,补体样物质C3-like、C4-like,C反应蛋白样物质CRP-like等呈现急剧增加,尔后逐渐减少,有时甚至大量被消耗的变化特点,其变化与机体抗感染免疫应答过程及免疫原剂量存在一定的相关性.血淋巴中三类免疫球蛋白样物质和二类补体样物质含量峰值一般出现在注射感染后6-24 h,48 h后下降,有时甚至降低至本底水平,C反应蛋白样物质质量浓度在感染后12-96 h内都较高,168 h后接近本底水平.副溶血弧菌感染剂量对上述物质的表达速度和水平皆有正面影响.     

九孔鲍肠道及水体中产几丁质酶菌群的测定

通过特定的TCBS(Thiosufate-Citrate-Bile Salts-Sucrose)和筛选培养基,对九孔鲍肠道及其养殖水体中菌群的产几丁质酶能力进行了研究．结果表明,在鲍鱼肠道及其养殖水体中均存在有能分泌几丁质酶的微生物．在鲍鱼肠道中,共分离到12株菌株,占总细菌的34．3％,它们分别属于Vibrio fluvialis和Vibrio minicus;在鲍鱼养殖水体中则分离到4株菌株,占总细菌的11．8％,属于Vibrio fluvialis．比较鲍鱼肠道和养殖水体中产几丁质酶菌株的比例及其能力的大小,可以发现前者的比例高于后者,由此表明了鲍鱼肠道对菌株的选择性．     

鲍体表黏液的几种免疫酶比活力的比较

为探索鲍体表黏液的免疫机制,利用生化测定的方法对杂色鲍(Haliotis diversicolor)、皱纹盘鲍(Haliotis dis-cus)、西氏鲍(Haliotis sieboldii Reeve)及杂色鲍不同杂交群体鲍体表黏液中的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)的比活力进行了测定,并比较了它们之间的差异.结果表明在3种不同鲍中,西氏鲍体表黏液中AKP、T-SOD的比活力最强,显著高于杂色鲍台湾群体,这与生产实践中西氏鲍抗逆性强、存活量高相吻合,推测AKP、T-SOD是较好的免疫指标性酶;而在杂色鲍不同的杂交群体间,台湾♀×F1♂杂交群体与F1♀×台湾♂杂交群体体表黏液中3种酶比活力均最高,推测这种杂交方式能够产生较强的杂种优势.本研究有助于为鲍的选育和病害的防治提供参考.     

杂色鲍的遗传育种研究进展

杂色鲍是我国南方重要的海水养殖种,但近年来因种质退化等原因导致暴发性病害频发,杂色鲍的遗传改良研究对于杂色鲍养殖产业的可持续健康发展十分重要.综合厦门大学贝类遗传育种课题组近10年的研究成果,评述了近年来杂色鲍的生物学特征、选择育种、杂交育种、雌核发育、DNA分子标记开发和利用、遗传图谱构建和QTL定位、功能基因及转基因鲍等方面的研究进展,并提出了今后杂色鲍遗传育种研究的发展思路.     

乙醇对鲍鱼碱性磷酸酶活力与构象的影响

以乙醇为效应物研究对鲍鱼碱性磷酸酶(ALP)活力影响的结果表明．酶的剩余活力随着乙醇浓度增大而迅速下降，乙醇浓度40％可使酶活力完全丧失．说明乙醇对鲍鱼ALP有明显的失活作用，JG50为13％．含较低浓度乙醇(30％)的失活过程是可逆的反应．测定乙醇对酶的失活作用机理．结果表明乙醇对鲍鱼ALP的失活作用是非竞争性机制，说明底物存在不影响乙醇对酶的失活作用．应用荧光光谱、紫外吸收光谱研究鲍鱼ALP经乙醇微扰后的分子构象变化，发现乙醇对酶分子构象有显的影响，酶的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强．荧光发射峰逐渐发生红移．紫外吸收光谱在276nm吸收峰随乙醇浓度增大而增强．这些结果表明．酶蛋白分子中的生色基团残基的微环境发生变化．     

杂色鲍×盘鲍杂交及亲本自繁群体的AFLP分析

应用AFLP技术研究了杂色鲍(SS)、盘鲍(JJ)及其正反交群体(SJ和JS)的遗传关系,并比较了各群体内的遗传多样性.3对选择性引物共扩增出344个位点.双亲自繁群体SS和JJ 的AFLP图谱差异很大,平均遗传距离达1.425.因此,AFLP图谱可以用于两物种及其杂交种的种质鉴别.正反交群体SJ与JS的AFLP图谱很接近于母本自繁群体,平均遗传距离分别为0.111(SJ与SS之间)和0.134(JS与JJ之间),而与父本自繁群体则有较大区别,平均遗传距离分别达1.408(SJ与JJ之间)和1.394(JS与SS之间).将4个群体分为SS/SJ和JS/JJ两组,进行三水平的AMOVA分析,结果显示:84.74%遗传变异来源于母本不同的两组之间(SS/SJ组和JS/JJ组之间),12.66%变异存在于群体内个体之间,正反交群体与母本之间的变异仅有2.60%.另一方面,正反交F_1群体的多态性位点比例、Nei′s 遗传多样度、香农多样性指数均低于母本自繁群体.综合群体内多样性和群体间遗传关系分析结果,杂色鲍与盘鲍正反交F_1的遗传物质组成有别于同时含有双亲基因组的实质性杂交,而与母本有着高度的遗传同质性,且遗传多样性水平略低于母本自繁群体.     

鲍鱼多糖Hal-B的组成研究

从鲍鱼中分离一种硫酸酯多糖Hal-B，甲醇解反应后，经三甲硅醚衍生化，GC／MS检测，结果表明该我糖主要是由半乳糖、葡萄糖和少量木糖、岩藻糖、葡萄糖醛酸组成。     

鲍鱼多糖Hal-B的乙酰解研究

对鲍鱼中分离得到的硫酸脂多糖Hal—B进行了乙酰解的研究。硅胶柱层析分离得到两个组分，核磁共振和串联质谱的研究表明：这两个组分分别是全乙酰化的半乳糖和全乙酰化的寡糖混合物。