草鱼胰蛋白酶的分离纯化及性质研究

从草鱼肝胰脏中分离纯化出一种胰蛋白酶．纯化过程包括：硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sephamse离子交换,Sephacryl S-200凝胶过滤和Q-Sepharose离子交换层析．SDS-PAGE显示在分子量约为28．5ku处有单一电泳带,表明该酶已得到高度纯化．以Boc-Leu-Arg-Arg-MCA为底物测得该酶的最适温度为40℃．最适pH值为9．0．丝氨酸蛋白酶抑制剂（Pefabloc SC,PMSF,Benzamidine）对该酶的活力有明显抑制作用．底物特异性实验表明该酶特异性分解精氨酸和赖氨酸残基的C末端,进一步证明纯化蛋白为草鱼胰蛋白酶,其酶学性质与鲤鱼胰蛋白酶相似．     

光合细菌中氢化酶的分离纯化及其性质研究

以光合细菌为出发菌株,离心得到的菌体经超声破碎后,得到的粗酶液经硫酸铵沉淀、透析、DEAE-52离子交换层析和Sephadex G-200分子筛凝胶层析分离纯化获得电泳纯的氢化酶,且该酶的分子量为62.0 ku和37.0 ku的两个亚基组成的分子量为99.0ku的二聚体,对该酶进行酶学性质的研究得到酶催化最适温度和pH值范围分别为30℃和pH=7.5,且在25～35℃和pH=7.0～8.0范围内催化放氢活力较稳定.     

诺卡氏菌株胞外β-淀粉酶的分离和鉴定

诺卡氏菌株（Nocaridasp．）82除去菌体的发酵液经硫酸镀沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析、SephadexG－200凝胶过滤，得到高纯度的β-淀粉酶。用SDS－PAGE测定酶蛋白分子量为53000，不具亚基；酶反应最适pH和温度分别为7．0和60℃，有较高的热稳定性；Fe2十和Zn2+对酶活力有促进作用，而Hg2+对酶活力有抑制作用。     

猪心肌乳酸脱氢酶的提纯工艺及酶反应最适条件

研究了适合于工业化生产的猪心肌乳酸脱氢酶的初步提取工艺，经硫酸铵分级沉淀得到酶的比活为86．5U／mg，再经DEAE离子交换层析比活可达525．0U／mg，酶活总收率为54．5％．并对酶促反应的最适条件进行了研究，其最适反应pH为7．6～7．8，最适反应底物浓度分别为NADH5mg／mL和丙酮酸钠25mmol／L。     

啤酒废酵母超氧化物歧化酶（SOD）的分离纯化及性质研究

啤酒废酵母（１０８－１０９细胞／ｍｌ）通气发酵后，经乙醇－氯仿沉淀，加热，调ＰＨ，（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀等除去杂蛋白质。最后经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５层析得到纯化的ＣｕＺｎ－ＳＯＤ，酶比活在１５００单位／ｍｇ蛋白以上，酶的分子量为１４８０００，由四个亚基组成，紫外最大吸收峰位于２５６ｕｍ处。Ａ２５６．４／２８０＝１．２２．     

大肠杆菌108(pPAHD1)青霉素G酰化酶的纯化与结晶

大肠杆菌108(pPAHD1)发酵液经离心沉淀,蔗糖高渗处理得到青霉素酰化酶粗品,再经苯乙酰胺-Sepharose4B疏水层析和DEAE-Cellulose DE-52分离纯化,得到可用于结晶的青霉素G酰化酶。在55％饱和度硫酸铵-0.05mol/LPBS,pH7.5条件下批量静置得到该酶晶体。     

核糖核酸酶抑制因子的制备及急性毒性实验

对新鲜人胎盘进行硫酸铁分级沉淀，透析，DEAE-纤维素-23离子交换层析，制取初步纯化的核糖核酸酶抑制因子（RI）．小鼠急性毒性实验结果表明，RI对小鼠没有急性毒性．     

黄鳝超氧化物歧化酶的纯化和部分性质研究

黄鳝超氧化物歧化酶粗酶液，经过正丁醇脱脂，丙酮分级沉淀，DEAE-琼脂糖离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤，从黄鳝中分离纯化获得铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)，并对其性质进行研究，最终该酶的比活力为1500U／mg，提纯倍数为368．5．回收率为24．7％．该酶对KCN不敏感．而对H2O2敏感，对热较稳定，对酸碱有较强的耐受性，抗胃蛋白酶的破坏，聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电点聚焦电泳结果表明：纯化酶蛋白呈一条带，酶分子量约为85kD，亚基分子量约为16．5kD，等电点为7．15。     

核酸酶P1的纯化和酶学性质研究

桔青霉发酵液通过硫酸铵分级沉淀、凝胶层析和离子交换纤维素层析等生化分离步骤，得到的核酸酶P1比活力为711U/mg，纯化倍数1500。纯化的酶蛋白纯品经SDS－聚丙烯酰胺电泳，呈现一条单带。该酶催化反应的最适pH范围为6－8，最适温度在70℃，在60℃以下时酶活较为稳定，锌离子对此酶有明显的激活作用，而铜离子具有明显的抑制作用。     

诺卡氏菌株82β－淀粉酶的部分纯化及其性质研究

诺卡氏菌株８２（Ｎｏｃａｒｄｉａｓｐ．８２）可产生一种β一淀粉酶，经５０％硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ一纤维素离子交换层析，将其纯化２１倍。该酶在６０℃，ｐＨ７．０条件下酶活最高；１００℃处理３０ｍｉｎ仍具有４０％的最初酶活力。     

芥菜茎中水溶性多糖的分离纯化及性质的初步研究

采用水提醇沉法从芥菜中提取出水溶性粗多糖CP,经Sevag法脱蛋白和H2O2去色素,过DEAE-纤维素柱,经水洗涤和盐洗脱得到BPA,再经Sephadex G-100凝胶层析纯化得BPA 1.采用SephadexG-150凝胶过滤层析和醋酸纤维纸电泳鉴定,初步鉴定BPA 1为纯品.红外光谱检测证明BPA 1是多糖.     

高纯度黄芩素的制备及表征

提出了由黄芩制备高纯度黄芩素的方法。采用酸沉碱溶法从黄芩中提取黄芩苷,通过水解黄芩苷制取黄芩素粗品,再经硅胶和聚酰胺柱层析纯化,得高纯黄芩素,用高效液相色谱法（HPLC）测得其纯度为99.35%。采用正交试验法优化了实验条件,并对最佳条件下制备的黄芩素纯品进行了红外吸收光谱（FTIR）、紫外吸收光谱（UV）和核磁共振氢谱（¹H-NMR）表征,结果表明其为目标产物。      

九牛造苯提取物的薄层层析

以九牛造(Euphorbia Hylonoma)粗粉为原料用苯提取,提取物浓缩后,经薄层层析及柱层析后得到4种组分A、B、C、D.     

高速逆流色谱结合硅胶柱色谱法分离制备干姜中的6-姜酚、8-姜酚、6-姜烯酚

通过实验建立了高速逆流色谱(HSCCC)结合硅胶柱色谱法分离制备干姜中6 姜酚、8 姜酚和6 姜烯酚的方法。干姜样品采用乙酸乙酯超声提取,提取物经过硅胶柱色谱粗分,选取其中A3和A4两个馏分进行高速逆流色谱分离,所得单一成分采用高效液相色谱(HPLC)检测纯度,并采用电喷雾质谱(ESI-MS)、核磁共振氢谱(¹H NMR)对所得化合物的结构进行鉴定。研究结果表明,该方法简便快捷,所得产物纯度高、制备量大、分离效率好。     

红树内生真菌BYY-1中一个酚类化合物的分离鉴定与抗肿瘤活性

采用硅胶柱层析、薄层层析、Sephadex LH-20柱层析从红树内生真菌BYY-1的次级代谢产物中分离到化合物B1.通过乙酰化、NMR、HR ESI-Q-TOF MS等技术鉴定了化合物B1的结构,确定其为首次从红树内生真菌中分离到的化合物.运用MTT法和流式细胞术研究了化合物B1的抗肿瘤活性,结果表明,化合物B1可显...     

牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277菌株外切聚磷酸酶的表达、纯化和结晶

外切聚磷酸酶(exopolyphosphatase,PPX)对于细菌在恶劣环境下引起的严紧反应、病原菌的致病性和抗生素耐药性等生物学过程必不可少。牙龈卟啉单胞菌是与牙周炎关系最密切的病原菌。为解析牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)ATCC 33277菌株的外切聚磷酸酶(PgPPX)的结构,首先利用大肠杆菌对PgPPX蛋白基因进行克隆与蛋白表达,然后依靠谷胱甘肽巯基转移酶标签对融合蛋白亲和层析后,采用阴离子交换色谱、凝胶过滤色谱得到表面电荷、聚合形态均一的PgPPX蛋白,最后对纯化后的目的蛋白进行结晶条件筛选。结果表明:PgPPX蛋白在溶液中表现为二聚体形式,纯度大于98%,表达量高达30 mg/L,且该蛋白在0.2 mol/L MgSO_4·6 H_2O、20%PEG3350(m/V)条件下获得的晶体形状较好。     

细胞毒性T细胞抗原4胞外结构域的高效表达与纯化

目的:获得细胞毒性T淋巴细胞相关分子4胞外结构域(exCTLA4)在大肠杆菌中高效表达的条件,并纯化获得高纯度的重组蛋白.方法:构建原核表达质粒pET28a-exCTLA4并转入大肠杆菌Transetta(DE3)中,通过改变诱导物IPTG浓度、细菌培养温度和时间,获得了exCTLA4的最佳表达条件.收集最佳诱导条件下表达exCTLA4的菌体,将菌体超声破碎后,离心分离exCTLA4包涵体,用低浓度尿素(2mol·L~(-1))洗去大部分背景蛋白后,再用高浓度尿素(8mol·L~(-1))溶解包涵体,进一步用镍离子亲和层析方法得到高纯度exCTLA4.结果:构建了表达载体pET28a-exCTLA4,获得了exCTLA4在Transetta(DE3)中的最佳诱导条件,即在1mmol·L~(-1) IPTG、25℃下,诱导6h能得到最佳表达,但重组蛋白以包涵体形式存在.通过纯化exCTLA4包涵体及进一步的镍离子亲和层析获得了高纯度的目的蛋白,Western blot鉴定为CTLA4.结论:获得了exCTLA4重组蛋白在大肠杆菌中的最佳表达条件和纯化方法及步骤,为该蛋白的应用奠定了基础.     

柘树根多糖的分离纯化及组成初步研究

以柘树（Cudrania tricuspidata （Carr.） Bur.）的根为材料，经热水抽提、木瓜蛋白酶-Sevag法除蛋白、乙醇沉淀和凝胶柱层析分离纯化，得到1种水溶性的柘树根多糖（CTP）并研究了其单糖组成. 采用紫外光谱和红外光谱法对柘树根多糖进行了定性分析，结果表明，柘树根多糖具有多糖特征性的紫外和红外吸收峰，不含糖醛酸；高效凝胶渗透色谱法测定结果表明，柘树根多糖的峰值分子量为18881；采用气相色谱法测定柘树根多糖中单糖的种类和构成比例，结果表明，柘树根多糖主要由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖等4种单糖组成，并计算出4种单糖的摩尔组成比例.     

野木瓜水溶性多糖的提取分离及鉴定

本文对纤维素酶法从野木瓜中提取水溶性粗多糖的工艺进行系统的研究,通过正交试验确定了最佳酶法提取条件：提取温度50℃,pH值4.0,提取时间2.5h, 酶用量3%。粗多糖经蛋白酶与Sevage法相结合脱蛋白、大孔树脂脱色及水浴透析,得到野木瓜水溶性精多糖CCP, 再经DEAE-纤维素阴离子交换层析柱,得一种洗脱组分CCP1。纸层析和Sepharose Cl-6B色谱柱分析表明CCP1为多糖纯品;用苯酚-硫酸比色法测定该多糖的糖含量为97.3%;紫外光谱分析未见蛋白质（280nm）与核酸（260nm）的特征吸收峰;红外光谱分析具有典型多糖吸收峰。结果表明,CCP1是初次从该植物中提取分离出来新的均一多糖组分。     

多级色谱纯化牛胎盘免疫调节多肽及性质测定

使用DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换色谱、Sephadex G-25 凝胶色谱和Sephasil C18反相高效液相色谱等分离纯化技术,采用体外培养淋巴细胞增殖试验,从牛胎盘提取液中分离出了具有免疫调节活性的多肽。免疫调节多肽对淋巴细胞增殖的促进作用具有剂量依赖性。纯化后的免疫调节多肽经过毛细管电泳(CE)鉴定为单一组分。毛细管等电聚焦电泳(CIEFE)测定多肽的等电点是3.82。基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定多肽的相对分子质量为2134。蛋白质测序仪测定多肽的序列为Tyr-X-Phe-Leu-Gly-Leu-Pro-Gly-X-Thr。