鳜鱼（S．Keneri）肌球蛋白重链基因cDNA的克隆及其特征分析

鳜鱼（S．Keneri）以优良肉质性状成为极具商品价值和大力推广人工养殖名贵鱼类之一．为掌握控制优良肉质性状的遗传基础,采用同源克隆RT-PCR方法,克隆出该鱼肌球蛋白重链（MYH）cDNA序列．该基因cDNA序列全长5938bp,编码区长度为5814bp,含有poly（A）信号,3’非翻译区长124bp,其开放阅读框共编码1938个氨基酸,推算蛋白质分子质量为221．6Ku．鳜MYH基因由3个结构域组成,即MYSc-type-Ⅱ,SMC-N和Myosintail1,其中MYSc-type-Ⅱ头部结构与鲤、斑马鱼同源性达90％,具高度保守性．通过DNAstar软件MegAlign构建进化树显示不同物种间该基因核苷酸编码序列同源性为77％86％,氨基酸编码序列同源性达80％-92％．采用RT-PCR方法研究MYH在不同发育阶段差异表达结果表明,MYH在肌肉效应期开始有低量表达,成鱼期和鱼苗期表达量高,而囊胚期与神经胚均未表达．由此推测MYH基因于肌肉效应期开始表达．研究结果揭示鳜鱼肌球蛋白重链基因在进化上保持与其他脊椎动物相似性和差异性,为决定名贵鱼类肉质结构基因的研究提供了分子生物学基础．     

甜瓜多聚半乳糖醛酸酶基因cDNA的克隆和序列分析

以甜瓜品种河套蜜瓜成熟果实mRNA为模板，经反转录合成和PCR扩增得到编码多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase，PG)基因全长cDNA，将其克隆于pUC19质粒中获得重组质粒pCMPG．此cDNA长1183bp，包括一个393个氨基酸残基组成的开放阅读框架，与已报道的甜瓜PG基因cDNA核苷酸序列比较同源性为99．3％，相应的氨基酸的同源性为98．5％．     

黄角苔叶绿体rbcL基因编码区的序列分析

测定了黄角苔（Ｐｈａｅｏｃｅｒｏｓｌａｅｖｉｓ（Ｌ．）Ｐｒｏｓｋ）叶绿体ｒｂｃＬ基因编码区的１３９８个核苷酸序列,并且由此推导出对应的氨基酸序列．此基因中密码子的第２和第３位上Ａ／Ｔ所占的比例较高,分别为５３６％和７７５％．黄角苔ｒｂｃＬ基因的编码区与花旗松、菠菜、玉米和雷氏衣藻间在核苷酸序列上的同源性分别为８４０％,８１５％,７９３％和７６３％;在氨基酸序列上的同源性分别为９１．０％,８９．９％,８８．５％和８９．３％．为研究角苔植物的系统发育提供了核苷酸序列方面的资料．     

人乳铁蛋白基因克隆及表达载体构建

通过ＰＣＲ法扩增出２３６６bp的人乳铁蛋白cDNA、８００bp的山羊β－乳球蛋白基因５′端调控序列,经ＰＣＲ反应连接后,克隆到表达载体pLNCX中,测序结果表明,与ＧeneBank中登录的序列相比,所获人乳铁蛋白cDNA序列的同源性为９９．７４％,山头β－乳球蛋白基因５′端调控序列的同源性为９９．７５％。酶切结果证明得到了正确的重组载体,可用于乳腺生物反应器的研究。利用ＰＣＲ反应直接克隆目的片段,并通过同源序列进行ＰＣＲ连接,极大提高了克隆的速度和准确性,,为基因克隆及其表达研究带来了方便。     

河套蜜瓜ACC氧化酶基因cDNA部分片段的克隆和序列分析

以河套蜜瓜(Cucumis melo L．ev Hetao)成熟果实为材料，用硫氰酸胍法提取总RNA，以oligo(dT)15为引物，反转录合成cDNA，利用一对甜瓜ACC氧化酶(1-aminocyclopropane-1-earboxylate oxidase，ACO)基因cDNA的特异性引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增。获得了预期大小的cDNA片段．将此片段克隆于pUCl9质粒中，进行DNA序列分析．序列分析结果表明该片段为545bp，编码甜瓜ACO的第126至第306个氨基酸．该河套蜜瓜ACO基因cDNA序列与Andes甜瓜、Cantaloup charentais甜瓜和哈密瓜的相应序列进行比较，其核苷酸序列与Andes甜瓜的同源性为99．4％；与Cantaloup charentais甜瓜和哈密瓜的同源性均为99．6％。与其对应的氨基酸序列的同源性均为99．4％．     

用抑制差减杂交技术分离烯丙异噻唑诱导水稻特异表达的基因

烯丙异噻唑(PBZ)处理水稻根能使其产生对稻瘟病的系统获得性抗性,因此在东南亚稻区被广泛用于防治稻瘟病,然而关于其作用的分子机理还知之甚少．运用抑制差减杂交技术,试图通过分离鉴定受PBZ诱导调控的关键基因,探索其作用的分子机理．以PBZ处理后的水稻叶片cDNA为目标群体(tester),以未处理水稻叶片cDNA为对照群体(driver),用经过对照cDNA差减的、烯丙异噻唑处理的cDNA群体构建了一个含260个重组子的差减文库．通过差示筛选鉴定出了26个。PBZ诱导水稻特异表达和增强表达的候选克隆．对26个cDNA克隆进行了双向测序和同源性比较,发现其中3个克隆：rJAB1,rTAB2和蛋白磷酸酯酶2Aδ调节亚基同型物基因,位于抗病相关信号转导途径上,它们与哺乳动物和人类免疫途径上的信号因子有明显相似之处,因此推断可能与诱导抗性有关．另外8个克隆与已知基因同源性为70％～99％．经Northern杂交分析,其中rJAB1(编码c-jun激活区结合蛋白1)受烯丙异噻唑和稻瘟菌诱导表达;膜糖蛋白同源基因及肌动蛋白(actin)α1受烯丙异噻唑诱导表达,部分克隆为低丰度转录本．     

花椰菜（Brassica oleracea vat．botrytis）抗黑腐病差异表达cDNA片段的克隆及功能的初步研究

采用花椰菜抗黑腐病近等基因系C731（感病系）和C712（抗病系）作为材料,利用cDNA—AFLP技术,研究了花椰菜黑腐病抗性在黑腐病菌侵染和非侵染条件下基因表达的情况．获得了两个阳性克隆M2和M6．Northern杂交和点杂交进一步证明M2是组成型表达的cDNA片段,只是在病菌侵染与非侵染条件下表达丰度不同．而M6是差异表达的cDNA片段．Southern杂交表明M6 cDNA片段在花椰菜基因组中是单拷贝序列．随后的序列分析发现M6cDNA片段与拟南芥1号染色体的BACF19P19中66665～66813bp有84％同源性,该片段编码拟南芥的2A6蛋白的部分序列．推测的氨基酸序列与拟南芥的2A6蛋白部分序列有91％同源性．用H2O2作为外源分子胁迫处理的初步功能分析发现：M6cDNA片段受H2O2诱导,在诱导早期16～24h高度表达,其在叶片中的积累呈逐渐上升趋势．根据序列分析和初步的功能分析的结果推测：M6cDNA片段可能就是编码花椰菜中类2A6蛋白的部分基因片段．是参与花椰菜抗病反应信号途径的相关调控基因片段．     

诸葛菜EPSPS基因5’端的克隆和序列分析

烯醇式丙酮基莽草酸—3—磷酸合成酶(5—enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase,EPSPS)是植物和微生物莽草酸途径中的一个必需合成酶，植物中该基因的超量表达或该基因中某些氨基酸突变可以产生对除草剂草甘膦(g1yphosate)的耐性．采用5’—RACE技术从诸葛菜(0rychophragmus violaceus)叶中克隆出一条长743bp的cDNA片段．序列分析结果表明：该cDNA与其它植物的EPSPS基因具有相当高的核苷酸序列同源性。其所编码的氨基酸序列与欧洲油菜(Brassica napus)同源性最高为90％，与拟南芥(Arabidopsis thaliana)、玉米(Zeamays)、西红柿(Lycopersicon esculentum)、烟草(Nicotiana tabacum)和水稻(Oryza sativa)的同源性分别为88％，81％，64％，62％和71％．     

人类Neuritin cDNA的克隆和表达

从人胎脑cDNA文库筛选出一条1618bp的cDNA。此cDNA含有一个426bp的最大开放阅读框,编码一个142个氨基酸的蛋白质,预测分子质量为15.3ku。与目前数据库中序列比较,该cDNA与鼠neuritin基因同源性达98％。多组织Northern blot分析显示neuritin在脑组织高度表达。neuritin cDNA的读框片段正确插入到pQE40表达载体中,获得了预期的表达产物,并初步得到了其纯化蛋白。     

草鱼生长激素基因的克隆及原核表达研究

应用RT-PCR技术从草鱼脑垂体总RNA中克隆草鱼生长激素cDNA(cGH)，全长669bp，含开放阅读框633bp，编码210个氨基酸，分子量为23．6kDa，等电点为6．28；与已报道的草鱼GH有12个碱基、3个氨基酸残基的差异，同源性为98％．将草鱼cDNA定向插入原核表达载体pGEX-4T-1，构建了重组草鱼GH基因质粒pGEX-GcGH，经IPTG诱导，pGEX-GcGH在大肠杆菌中可表达49．6kDa的融合蛋白．     

云南疣粒野生稻部分cDNA片段的分离和注释

从疣粒野生稻cDNA扩增文库中随机挑取500个噬菌斑,通过载体环化,选择120个菌样进行测序,获得的95条序列,分别采用Blast、ORFfinder、UniGene和EntrezGene系统等软件进行序列分析,结果为:与栽培稻日本晴序列比较匹配碱基数>400 bp的占27.37%;确定可阅读框(>100 bp,具有起始和终止密码子)的占90%;与拟南芥的功能基因比较,相似性大于60%的有46个;确定功能、代谢过程和编码蛋白部位的cDNA片段分别有34个、31个和31个.     

青海省新型甘蓝型油菜品系主要性状研究

对甘蓝型油菜（039、E144）与青藏高原白菜型油菜浩油11种间杂交获得的66个新型甘蓝型油菜品系的生育期、产量性状、含油量、脂肪酸组成、抗虫性和对波里马细胞质雄，陛不育的恢复性等性状进行了研究。结果表明：66个品系中出现了具有以下特征的新型甘蓝型油菜品系，即生育期极短（西宁地区100d以内）、产量性状优于甘蓝型亲本、含油量高于甘蓝型亲本、油酸含量大于70％、饱和脂肪酸含量小于5％、能够完全恢复波里马细胞质雄性不育、抗虫性（茎象甲）强于甘蓝型亲本。这些品系将为今后甘蓝型油菜育种提供优良的亲本资源。     

Comparative physical mapping of rice BAC clones linked to resistance genes Glh,Bph-3 and xa-5 in Oryza sativa L. and O. granulata Nees et Arn. ex Watt.

Oryza granulata Nees et Arn. ex Watt. is one of the three wild relatives of rice,which are the most valuable for study and utilization in China.In this study,the homology and physical locations of three rice resistance genes,Glh,Bph-3 and xa-5 are comparatively analyzed between O.sativa and O. granulata by Southern blotting and fluorescence in situ hybridization (FISH).The results of Southern blotting indicate that there exist homologous sequences of the tested RFLP markers in O. granulata.By using three bacterial artificial chromosome (BAC) clones scanned by the tested RFLP as probes, FISH signals are detected on both mitotic and pachytene chromosomes in O.sativa and O.granulata.Dual-color FISH demonstrates that two of the three BAC clones (14E16 and 38J9) are located on the short arm of the same chromosome pair in O. granulata. Additionally, colinearity is shown for the two clones between O.sativa and O.granulata. Another BAC clone 44B4 is located on the end of the short arm of other chromosome pair in these two species.Although the phylogenetic relationship between O.sativa and O.granulata is the most distinct in Oryza and these two species have evidently different biological features and ecological habits, the relative lengths and arm ratios of the detected chromosomes and the relative positions of the tested clone signals on chromosomes in O. granulata are quite similar to those in O. sativa.     

一个药用野生稻异源单体附加系在减数分裂时期的GISH分析鉴定

异源单体附加系是从亲缘关系较远或属间的一个物种单条染色体附加到另一个物种中．栽培稻珍籼97B与药用野生稻Hy18杂交与连续回交，在BC2后代中得到一个药用野生稻单体附加系．生物素标屺的药用野生稻总DNA作为探针，未标记的栽培稻总DNA封阻，对其异源单体系减数分裂染色体进行基因组原位杂交．FISH结果表明，在栽培稻（AA，2n=24）基因组中附加了一条药用野生稻染色体，并鉴定为第8号染色体．研究表明，药用野生稻异源单体附加系的建立为药用野生稻的基因组学和遗传学的研究提供一个新的操作平台．而GISH技术在水稻远缘杂交育种中是最准确有效的染色体鉴定方法．在水稻育种改良中具有重要应用前景．     

Assessment on alien herbicide-resistant gene flow among crucifers by sexual compatibility

Cross-pollination and high cross-compatibility are frequently found in many cruciferous plants, which implies that there might be potential risk of alien gene flow among crucifers. In this work, the alien glyphosate-resistant gene flow between GM （Genetically modified） rapeseed variety Q3 （Brassica napus） and 6 varieties from 5 cruciferous species was assessed by sexual compatibility through aniline blue fluorescence observation, manual cross, mentor pollination with the mixture pollen and DNA identification. The results indicated that the compatibility indices of two B. napus varieties, B. juncea vat. multiceps Tsen et Lee and Chinese cabbage （B. chinensis） （as female） with Q3 （as male） were 16.15, 12.77, 2.345 and 0.85, respectively. FI plants were examined by PCR and all of these samples were confirmed as positive. Crossing between Orychophragmus violaceus, Descurainia sophia （as female） and Q3 （as male） expressed high cross-incompatibility. Fluorescence microscope observation indicated that growing of pollen tube terminated at the upper 1/3 part of the style of O. violaceus and on the stigma surface of D. sophia. The mentor plants were further analyzed by PCR and all were shown to be negative. Under the neighboring growth and natural pollination conditions, the rates of gene flow to two B. napus varieties were 2.3278% and 2.1487%, respectively, B. juncea var. multiceps Tsen et Lee and Chinese cabbage were 1.0157% and 0.9236%, respectively. No gene flow was observed in O. violaceus and D. sophia. Frequency of gene flow was highly correlated with sexual compatibility. Due to possible alien gene flow among crucifers, special consideration and care should be taken to grow GM rapeseed.     

油菜MAP激酶基因BnMPK6基因的克隆及表达分析

从陇油6号油菜中克隆得到了一种新的MAP激酶基因BnMPK6,全长1521 bp,其中包括1185 bp的开放阅读框,81 bp的5′非翻译区(5′UTR),255 bp的3′非翻译区(3′UTR).与拟南芥AtMPK6同源性达86.9%,因此命名为BnMPK6(GenBank登录号为HQ156228).该基因编码394个氨基酸的蛋白质,分子量44.8 kDa,等电点为5.13.实时荧光定量PCR结果表明该基因表达量随着低温胁迫时间的增长而增高,说明BnMPK6基因受低温胁迫诱导表达.     

潮汕地区栽培的几种芸薹属蔬菜的核型研究

对潮汕地区栽培的几种芸薹属蔬菜的核型进行了分析 .3个芥蓝品种的核型公式为 :2 n=1 8=8m+1 0 sm(2 sat) ;中甘 1 1号甘蓝为 :2 n=1 8=1 0 m+8sm(2 sat) ;京丰 1号甘蓝为 :2 n=1 8=8m+1 0 sm(2 sat) ;白沙早皇白大白菜为 :2 n=2 0 =1 4m+2 sm+4st(2 sat) ;白沙 1号小白菜核型公式为 :2 n=2 0 =1 4m+4sm+2 st(2 sat) ;白沙 1 1号早包心芥菜为 :2 n=36=2 2 m+1 4sm.其中甘蓝和芥蓝为 2 A核型 ,芥菜和白菜为 2 B核型     

稻属基因组间相关性的AFLP分析

应用AFLP（amplified restriction fragment length polymorphism)－银染法对2种栽培稻和21种野生稻的基因组多态性进行了检测,共计使用了9对选择性引物组合,扩增出602个遗传位点,通过Jacard的方法将电泳带矩阵转化为遗传相似性系数矩阵,并进行了聚类分析和主成分分析,结果表明,稻属植物按其亲缘关系的远近被分为三个大的类群：O.sativa群,O.officinalis群和其它远缘混合群,本文还对两种栽培稻的起源途径以及稻属物种的不同类型基因组间的缘关系进行了初步的探讨,为深入研究稻属物种间的进化关系提供参考。     

Transgene directionally integrated into C-genome of Brassica napus

Transgenic Brassica napus has been widely planted in Canada, the United States, and some other countries. In China, although the policy for genetically modified foods has not yet opened, genetically modified rape- seed oil as raw material for biodiesel of…     

Introduction of pokeweed antiviral protein cDNA into Brassica napus and acquisition of transsenic plants resistant to viruses

Using cotyledonary petioles as explants, the PAP cDNA controlled by wound-in- ducible promoter has been introduced into Brassica napus by coculture with Agrobacterium tumefaciens and laser microbeam puncture respectively. Regenerated plants resistant to gen-tamycin have been selected out. PCR amplification and Southern blotting analysis indicated that PAP cDNA together with wound-inducible promoter had been integrated into Brassica genome with transformation frequencies of 2.0% and 1.7% for two transformation methods respectively. The test of virus challenge showed that these transgenic Brassica plants were resistant in different degrees to mechanically inoculated TuMV.