福寿螺β-葡萄糖苷酶催化功能基团

应用化学修饰法研究福寿螺β－葡萄糖苷酶活性功能基团的性质．用５，５′－二硫代双（２－硝基苯甲酸）和对－氯汞苯甲酸为修饰剂修饰酶分子中的巯基，酶活力基本不受影响，说明该酶不是“巯基酶”．用Ｎ－溴代琥珀酰亚胺在ｐＨ６．０下修饰酶后，可使酶活力完全丧失，被修饰后的酶分子在２７８ｎｍ处的紫外吸收峰逐渐下降至完全消失，３３８ｎｍ处的荧光发射峰也逐渐下降至完全淬灭，说明色氨酸残基是酶活性必需基团之一．用碳二亚胺、溴代乙酸或甲醛修饰酶，可以使酶活力完全丧失，说明羧基、组氨酸的咪唑基及赖氨酸的氨基也与酶活性有密切的关系．用乙酰丙酮、苯甲磺酰氟修饰酶，酶活力不受影响，表明精氨酸残基和羟基与酶活性无关．     

长毛对虾碱性磷酸酶功能基因的研究

用对－氯汞苯甲酸修饰该酶分子中的巯基、酶活力不受影响，说明该酶不是“巯基酶”。用Ｎ溴代琥珀酰亚胺修饰酶后，活力完全丧失，修饰后的酶在２７５ｎｍ处的紫外吸收峰完全消失，３４０ｎｍ处荧光发射峰也逐渐下降至完全淬灭，说明色氨酸基是酶活性必需基团之一。     

地衣芽孢杆菌A.4041耐高温α-淀粉酶色氨酸残基和巯基的化学修饰

用N-溴代琥珀酰亚胺（NBS）和N-乙基丁二酰亚胺（NEM）分别对A．4041α-淀粉酶的主要组分α－Ⅲ的色氨酸（TrP）残基和巯基进行修饰．结果表明，50％的Trp残基被NBS修饰，可使酶活力完全丧失；Ca2+和底物可减少修饰酶的失活；加Ca2+或底物后修饰酶的荧光强度较对照修饰酶有显著提高．表明Trp是催化必需基团，并与结合底物和Ca2+有关．用过量NEM修饰巯基，酶活力改变不大，表明巯基不是酶的催化必需基因，并对酶的热稳定性基本无影响．     

限制酶Bsp63Ⅰ的化学修饰与抑制动力学研究

经亲和层析得到Ｂｓｐ６３Ⅰ用对氯汞苯甲酸、磷酸吡哆醛、２，３－丁二酮修饰该酶的巯基、赖氨酸、精氨酸残基，结果表明：这些基因均与该酶活性有关。动力学研究表明磷酸吡哆醛对酶的抑制是一种类反竞争性抑制。     

菜青虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性必需基团的研究

从菜青虫表皮分离纯化N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase），获得电泳单一纯的酶制剂，通过化学修饰法研究该酶的活性必需基团．分别以碳化二亚胺（EDC）、N-溴代琥珀酰亚胺（NBS）、对-氯汞苯甲酸（pCMB）、二硫苏糖醇（DTT）、澳代乙酸（BrAc）和乙酰丙酮在特定条件下对该酶进行特异的化学修饰，结果表明酸性氨基酸的侧链羧基、半胱氨酸巯基、色氨酸的吲哚基、组氨酸的咪唑基、二硫键被修饰后，酶活性均显著下降，因此这些氨基酸残基是酶活性的必需基团，而精氨酸残基及赖氨酸ε-氨基被修饰后对酶活力没有影响，不是酶的必需基团．     

僧帽牡蛎碱性磷酸酶功能基团的研究

采用化学修饰法研究僧帽牡蛎碱性磷酸酶活性功能基团性质.酶经0.4mmol·L-1PCMB修饰30min后活力仍然保持不变,提示巯基与酶的活力无关;用二巯基苏糖醇(DTT)对酶进行修饰,当DTT浓度达到2.5mmol·L-1时,酶活力丧失98%,表明硫 硫键与酶活力有密切的关系;以N 溴代琥珀酰亚胺(NBS)修饰酶的色氨酸残基,酶的修饰失活呈一级反应,当NBS浓度达到0.65mmol·L-1时,酶活力丧失100%,并辅以紫外吸收光谱的变化分析,表明色氨酸残基是酶催化活力所必需的;醋酸酐、马来酸酐、甲醛等氨基试剂对酶的修饰作用显示氨基是酶的必需基团.     

烟草叶片蔗糖酶的化学修饰

采用PMSF、NBS、IAc、BrAc、SUAN、TNBS、PCMB、DTT等8种化学修饰剂在一定的条件下选择性修饰蔗糖酶,研究烟草蔗糖酶分子中氨基酸侧链基团与酶活性中心的关系.结果表明:PMSF、NBS、PCMB等3种化学修饰剂能显著地抑制酶的活力,而BrAc、IAc、TNBS、SUAN、DTT等对酶的活力影响不大.说明对丝氨酸残基、色氨酸残基和巯基的化学修饰后对酶的活力影响很大,而酶分子中的组氨酸残基及赖氨酸残基不在酶的活性中心,修饰后对酶的活力没有直接影响.     

限制性内切酶Bsp78I的化学修饰与动力学研究

从Ｂａｃｉｌｕｓｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ７８菌中将Ｂｓｐ７８Ｉ纯化到均一程度。测得该酶对ｐＢＲ３２２ＤＮＡ的Ｋｍ值为２．６７×１０＾－８ｍｏｌ．Ｌ＾－１。用对氯汞苯甲酸、磷酸吡哆醛、２，３－丁二酮修饰该酶巯基、赖氨酸、精氨酸残基，结果表明这些基因均与该酶活性有关。     

内切酶xhoI部分氨基酸残基的化学修饰

限制性核酸内切酶xho I能够被巯基试试剂和修饰赖氨酸、精氨酸残基的试剂抑制,酶的抑制作用遵守假一级动力学,底物λ-DNA对酶的抑制作用有强烈地保护作用,这些资料表明xho Ⅰ含有对酶活性至关重要的必须的赖氨酸残基、精氨酸残基和巯基。     

中华猕猴桃蛋白酶催化功能基团的研究

从野生中华猕猴桃分离提纯得SDS电泳单一纯酶制剂,酶蛋白的总巯基数为7,其中游离巯基数为1.3×10~(-5)MpCMB使酶活力丧失100％,酶修饰失活呈一级反应,表明酶分子的唯一游离巯基为该酶催化活性的必需功能基团.酶在2×10~(-4)M PMSF,活力仍不受影响,提示Ser残基与酶的催化功能无关.以Na_2S_4O_6保护游离巯基,用NBS修饰Trp残基,并辅以紫外光谱和萤光光谱分析.结果表明Trp残基为酶催化功能所必需.初步的CDC化学修饰结果亦表明,羧基似与酶催化活性有关.     

兔血铜锌超氧化物歧化酶的纯化及其性质

用乙醇－氯仿处理，丙酮分级沉淀，ＤＥＡＥ－纤维层析等方法，从兔血红细胞中纯化出铜锌超氧化物歧化酶，产率为５１％，比活力为１２４３０ｕ／ｍｇ．该酶经冷冻干燥后呈淡蓝色，天然状态，下该酶的分子量约为３００００，由相同的两个亚基组成，紫外扫描表明纯酶在２６５ｎｍ处有最大光吸收值，经聚丙烯酰胺凝胶电泳后，用蛋白染色及ＮＢＴ活性染色均显示出三条带，结果表明用该纯化方法得到的ＳＯＤ为均一性纯酶，氨基酸组成显示     

中华猕猴桃蛋白酶赖氨酸残基的作用

有关中华猕猴桃蛋白酶(Actinidin,EC 3,4,22,14)催化功能基团的研究表明一个游离巯基,一个组氨酸残基为酶催化活性中心必需基团;色氨酸残基为酶活力表现所必需;羧基似与催化活性有关。迄今尚未见到有关赖氨酸残基作用的报道。本文应用TNBS(2,4,6-三硝基苯磺酸)修饰动力学方法和光谱分析,进一步探讨了赖氨酸残基与Actinidin催化活性之间的关系。有关酶的分离提纯鉴定及酶活力测定均参照文[4],其它实验条件见图注。     

综合利用清平磷矿废料的一种简单可行的办法

介绍了综合利用高Ａｌ低Ｐ含量的清平磷矿废料的一种简单可行的办法．在焙烧清平磷矿废料的硫酸浸取液中加入硫酸铵，在酸性条件下，在常压及５℃的低温下，使铝铵钒（ＮＨ４Ａｌ（ＳＯ４）２·１２Ｈ２Ｏ）大量结晶，从而导致Ｐ和Ａｌ分离．到目前为止，Ａｌ２Ｏ３的总浸取率在８０％以上，其回收率在９０％以上．最后，从残余Ｆｅ３＋、Ａｌ３＋和部分ＳＯ２－４被除去的滤液中，通过石灰水分步中和、沉淀，能得到合格的饲料磷酸氢钙和磷肥．     

联苯基取代聚噻吩衍生物的合成及其发光性能研究

为了研究侧链芳香基团对聚噻吩衍生物发光性能的影响 ,采用偶联反应合成了反应单体 3-联苯基噻吩 ,然后在三氯化铁的氧化作用下聚合 ,得到了聚 (3-联苯基 )噻吩 (PBPTH) .通过红外光谱、紫外可见光谱以及核磁共振氢谱对材料的结构进行了表征 .在紫外光谱上 ,PBPTH的最大吸收峰位于 4 0 6nm处 ,比聚(3-辛基 )噻吩 (P3OT)的吸收峰蓝移了 34nm .在荧光光谱上 ,PBPTH的光致发光峰位于 5 36 8nm处 ,比P3OT的发光峰蓝移了 32nm .研究结果表明 :由于侧链联苯基的空间位阻作用 ,导致了聚合物共轭程度的降低 ,从而造成了吸收光谱和发光谱的蓝移 ;PBPTH的发光强度与P3OT相比有了明显的下降 ,说明联苯基生色团不足以补偿共轭程度降低对发光性能的影响     

组氨酸残基在焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶催化功能中的作用

应用焦碳酸二乙酯(DEPC)对焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶(PFP)进行化学修饰时,酶的活性迅速丧失,呈拟一级动力学反应.羟胺的复活作用及修饰后酶的紫外光谱变化表明,酶失活的原因是DEPC与酶的组氨酸残基形成了乙酯基组氨酸复合物.失活动力学表明,酶的活性位点结合1分子DEPC即丧失活性.活性位点的组氨酸残基的完整性是酶活性的必要条件之一.底物F6P、产物果糖1,6-二磷酸(FBP)、P i及激活剂果糖2,6-二磷酸(F2,6BP)均可保护酶免被DEPC失活,底物PP i却没有保护作用.组氨酸残基在酶的催化功能中可能与F6P,FBP及P i的结合过程有关,而与PP i无关.     

麦冬凝集素的氨基酸修饰和荧光光谱研究

通过对麦冬凝集素（OJL）进行特殊氨基酸的化学修饰，揭示了OJL所含的6个Trp残基只有1个位于蛋白表面，Trp、Tyr和Ser/Thr不是OJL凝集活性所必需的氨基酸，而Arg是维持其活性的必需基团.OJL在天然状态下荧光发射峰在328 nm处，Trp周围的极性较弱，处于疏水的微环境或Trp的吲哚环有特殊的构象.丙烯酰胺可以淬灭93.46%的色氨酸荧光，而CsCl和KI淬灭的程度较小，分别为41.25%和55.56%，证明Trp主要位于疏水环境.     

中华猕猴桃蛋白酶羧基的化学修饰

有关中华猕猴桃蛋白酶(Actinidin,E C 3、4.22.14)催化功能基团的研究表明:CYSH—25、His—161为酶活性部位必需基团,而Lys和Trp残基为酶活力表现所必需。本文中报道应用水溶性碳二亚胺(EDC)修饰动力学方法,进一步探讨羧基     

Cd与Se比例对CdSe量子点发光性能的影响

硒化镉(CdSe)量子点具有荧光量子产率高、稳定性好以及光谱易于调节等优点,在发光二极管、太阳能电池及荧光标记等领域有着广阔的应用前景,而研究不同工艺条件对其性能的影响具有重要意义.以金属氯化物为Cd和Se源,以巯基丙酸(3-MPA)为包覆剂利用水相回流反应法在100 ℃下反应120 min制备了系列CdSe量子点,并讨论了不同Cd与Se比例时样品的形貌、带隙及光学性能的变化.CdSe量子点的尺度在2.19~2.57 nm,最强激发峰位于431 nm,发射峰位于561 nm,吸收光谱带边从460 nm蓝移到450 nm,表明样品在合成过程中,Cd与Se比例对样品的性能有一定的影响.     

文昌鱼碱性磷酸酶赖氨酸基团的研究

关于文昌鱼碱性磷酸酶(AKP)的基本性质及功能基团等,本实验室作了系统的研究,判定1个色氨酸残基为酶活性中心所必需,赖氨酸残基(Lys)是AKP活性必需基团之一,而每分子AKP上含有36个Lys。在此基础上,采用化学修饰剂对Lys基团进行定量研究,并探讨其它功能基团的性质,为酶的结构与功能关系提供进一步的信息。