重组羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用

用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中以包涵体方式获得高表达。SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35％,表达产物融合了表达质粒上的6His。在变性条件下,经Ni-NTA柱纯化,得到羧肽酶原B,在复性液中进行稀释复性后,胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B,然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B(28．5mg／L),比活为13．5u／mg。用RP-HPLC分析胰蛋白酶 羧肽酶B酶解胰岛素原C肽三聚体的酶解产物,证明该重组的羧肽酶B可替代提取的羧肽酶B应用于胰岛素原C肽的制备工艺中。     

钝顶螺旋藻Fe-SOD的纯化及性质

以螺旋藻中分离纯化的Fe-SOD平均比活为4576U/mg，总活力回收率50%，纯度达电泳纯，SDS-PAGE测定纯化的Fe-SOD亚基相对分子质量为21ku，每分子亚基含0.7个Fe原子；在Tris-盐到缓冲液中的最适pH为8.2，最适温度为25℃，在紫外区279nm有最大光吸收，酶的pH稳定范围为6～11，65℃以上迅速的失活，该酶对H2O2敏感，在5mmol/L H2O2中迅速失活，而在Ψ=0.1的乙腈和5mmol/L叠氮化钠中稳定。