| 重组羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用 |
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| 引用本文： | 李素霞,田丽萍,张晓彦,夏文超,龚毅,袁勤生.重组羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用[J].华东理工大学学报(自然科学版),2004,30(4):387-391. |
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| 作者姓名： | 李素霞 田丽萍 张晓彦 夏文超 龚毅 袁勤生 |
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| 作者单位： | 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海,200237;中国科学院上海生命科学研究院生物工程中心,上海,200233;中国科学院上海生命科学研究院生物工程中心,上海,200233;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海,200237 |
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| 摘 要： | 用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列，将其重组到原核表达质粒pT7-473中，并在大肠杆菌中以包涵体方式获得高表达。SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35％，表达产物融合了表达质粒上的6His。在变性条件下，经Ni-NTA柱纯化，得到羧肽酶原B，在复性液中进行稀释复性后，胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B，然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B(28．5mg／L)，比活为13．5u／mg。用RP-HPLC分析胰蛋白酶 羧肽酶B酶解胰岛素原C肽三聚体的酶解产物，证明该重组的羧肽酶B可替代提取的羧肽酶B应用于胰岛素原C肽的制备工艺中。
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| 关 键 词： | 羧肽酶原B 羧肽酶B 融合表达 分离纯化 胰岛素原C肽 |
| 文章编号： | 1006-3080(2004)04-0387-05 |
| 修稿时间： | 2003年8月7日 |
Application of Recombinant Carboxypeptidase B in the Preparation of Proinsulin C-peptide |
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| LI Su-xia.Application of Recombinant Carboxypeptidase B in the Preparation of Proinsulin C-peptide[J].Journal of East China University of Science and Technology,2004,30(4):387-391. |
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| Authors: | LI Su-xia |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | procarboxypeptidase B carboxypeptidase B fusion expression purification proinsulin C-peptide |
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