血清白蛋白的分离纯化及鉴定

由新鲜驴血浆离心得到的血清经冷冻,离心,透析,0.22μm滤膜过滤,经过两步Source 15Q离子交换色谱于HPLC进行纯化,得到3个含有驴血清白蛋白的峰.经SDS-PAGE电泳测定,其分子量在66.0 kDa左右,纯度达到电泳纯.经PAGE电泳鉴定,均为单一驴血清白蛋白.此法步骤简单,用血量少,适用于实验室常规分析和研究.     

人源EC-SOD在毕赤酵母中的构建与表达

利用基因工程技术构建表达载体并电转化至毕赤酵母中,成功实现人源EC-SOD在毕赤酵母X33中的表达.重组蛋白经盐酸羟胺法测得25 mL摇瓶发酵液上清酶活为508 U·mg~(-1),5 L发酵液上清酶活为909U·mg~(-1).发酵液上清用硫酸铵沉降后,使用DEAE弱阴离子交换树脂初步分离纯化出较纯的EC-SOD,测得比活为1 700 U·mg~(-1),并进行氯化硝基四氮唑蓝(NBT)活性定性染色.结果表明,毕赤酵母成功胞外表达具有一定活性的SOD蛋白.     

鸡卵黄免疫球蛋白的嗜硫性色谱一步分离纯化

采用重力沉降法对卵黄液进行脱脂预处理 ,利用嗜硫性色谱 ,实现鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的一步分离纯化 ,蛋白质的回收率高达 91% .鸡卵黄免疫球蛋白IgY经SDS -PAGE检测为电泳纯 ,活性回收率达 70 %以上     

黑曲霉发酵粉中一种β-葡萄糖苷酶的分离纯化与表征

黑曲霉发酵酶粉通过硫酸铵分级沉淀、SephadexG-25脱盐、再通过两步DEAE-TOYOPEARL650M弱阴离子交换色谱,分离得到一个新的电泳纯的β-葡萄糖苷酶.该酶对水杨素的比活力为597.12IU mg,并对其专一,不能水解棉花和羧甲基纤维素钠;DTT处理前后分子量均为117.5kDa;最适pH和温度分别为4 5和70℃;在pH5.0、50℃下对水杨素钠的米氏常数Km为3.73mg mL,最大反应速率Vm为0.088mg葡萄糖 (mL·min).     

沼水蛙皮肤中抗菌肽的分离纯化与活性测定

使用C18反相柱,采用线性梯度洗脱从沼水蛙皮肤分泌物中分离纯化出抗菌肽,应用纸片法测定抗菌活性,并测定抗菌肽氨基酸组成.然后进行序列比对和空间结构预测,从抗菌肽的氨基酸序列和空间结构推测抗菌肽的抗菌机制,并展望了抗菌肽的应用前景.     

功能性食品配料--丝素的性质和应用

采用电泳法对可溶性丝素粉末的性质进行研究 .十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)图谱表明 ,透析法制备的丝素粉末分子量主要分布在 30kD左右 ,超滤法制备的为 4 0kD左右 ;聚丙烯酰胺等电聚焦电泳 (IEF)结果表明 ,丝素的等电点分布广泛 ,等电区在pH 6 .1- 6 .6 ,4 .8- 5 .3以及pH 3左右 .在蛋糕配料中添加 0 .5 % - 1% (W /V)的丝素 ,改善了蛋糕的品质 .     

新型嗜硫膜亲和纯化鸡传染性法式囊卵黄抗体研究

以普通定性滤纸为基质 ,经碱处理 ,二乙烯砜活化和巯基乙醇偶联后 ,制备成嗜硫膜 (thiophilic -mem brane ,TM) ,考察了其对鸡传染性法式囊 (IBD)卵黄抗体 (IgY)的特异性亲和吸附作用 .卵黄经醋酸钠 -醋酸缓冲液 10倍稀释于 4℃自然沉降脱脂后 ,所得上清液 (WSF)经嗜硫膜亲和吸附分离 ,可一步纯化得到SDS-PAGE电泳纯的卵黄抗体 .IgY在嗜硫膜上的吸附速度随着流速的增加而增大 ,吸附量则随着流速的增加而减少 .     

热加工降低板蓝根对狗肾上皮细胞的毒性

调查不同热加工阶段板蓝根样品对狗肾上皮细胞的毒性.选用常用于流感病毒检测和抗流感药物的狗肾上皮细胞作实验模型,采用MTT比色法研究菘蓝新鲜根、板蓝根、板蓝根煎剂三种样品对MDCK细胞的细胞毒性情况.结果显示:菘蓝新鲜根、板蓝根和板蓝根煎剂三种样品的细胞半数致死浓度分别为3.74、39.55和61.95 mg·mL-1.该结果表明,热加工可降低板蓝根对狗肾上皮细胞的细胞毒性,这可能与热加工过程中发生的美拉德反应相关.     

葛根芩连汤及其聚集物颗粒对STZ诱导 2型糖尿病大鼠的降糖作用研究

葛根芩连汤是中药经典名方,在临床应用中显示出良好的治疗糖尿病的效果.研究观察高速离心分离的汤药聚集物颗粒组分(沉淀)、溶质组分(上清)在高脂高糖饮食(4周)后注射链脲佐菌素诱导的2型糖尿病模型Wistar大鼠上的降糖作用,测量体重、空腹血糖,血脂、血浆胰岛素、多脏器SOD活力,阐析该汤剂降糖降脂功效与其聚集物颗粒的关系.由实验得出,葛根芩连汤中的聚集物颗粒组分(沉淀)具有抗糖尿病活性,且此种活性可能经由提升胰腺和肝脏抗氧化能力、促进胰岛素分泌和改善血脂代谢而达成.     

环状排列黄色荧光蛋白在大肠杆菌及毕赤酵母中表达的比较研究

采用基因工程方法,实现了cpYFP在毕赤酵母X33的表达,并与大肠杆菌BL21(DE3)表达做对比.结果表明,毕赤酵母胞外分泌的目的蛋白不仅背景较大肠杆菌表达的清晰,且荧光强度为前者的3倍.同时,毕赤酵母表达的重组cpYFP对超氧阴离子自由基反应的灵敏性高于大肠杆菌表达的cpYFP.这些结果表明,毕赤酵母表达体系可作为制备重组cpYFP的良好体系,也为cpYFP在自由基生物学领域的广泛应用提供充足的原料来源.