不同来源SOD蛋白的稳定性比较

纯化制备了来源于猪血的天然SOD,由大肠杆菌体系表达的PTD-SOD1以及由酵母体系表达的重组SOD和PTD-SOD2三种基因重组SOD蛋白,并从pH稳定性、温度稳定性、水浴时间稳定性和外源试剂耐受性几个方面对它们进行了比较.结果表明,重组SOD的稳定性总体上是最强的,PTD-SOD2次之,PTD-SOD1最弱,而天然SOD仅比PTD-SOD1稍强.     

人超氧化物歧化酶-过氧化氢酶融合基因的构建、表达及其产物的初步纯化和性质研究

尝试应用基因工程技术制备一种兼具人超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性的双功能融合蛋白CAT-PTD-SOD,其中的PTD是序列为RKKRRQRRR的短肽.首先通过重叠PCR构筑CAT-PTD-SOD融合基因,然后把该基因转化进入大肠杆菌表达菌株Rosetta 2(DE3)菌株.通过SDS-PAGE、CAT和SOD活性分析以及分离纯化组分的分析确认该重组菌株能够表达CAT-PTD-SOD,其表达量可达总蛋白的8.9%,SDS-PAGE显示其分子量约为85 kD.可溶性实验发现该融合蛋白大部分以兼具SOD和CAT活性的可溶形式存在.抗H2O2能力实验表明CAT-PTD-SOD具有很好的抗H2O2能力,在0.033 mol.L-1、甚至0.067 mol.L-1的H2O2溶液中,其SOD活性20 min内无明显下降.     

利用形态学与RAPD标记鉴定福建龙亭樱桃的亲缘关系

观察龙亭樱桃及中国樱桃、福建樱桃的形态学特征,并结合RAPD标记揭示龙亭樱桃和中国樱桃及福建樱桃的亲缘关系.结果表明,用20个随机引物共扩增出184条谱带,其中多态性带105条.亲缘关系分析显示,龙亭樱桃与福建樱桃的遗传相似性系数为0.668,与中国樱桃的遗传相似性为0.595.龙亭樱桃在形态上结合了中国樱桃和福建樱桃的部分特征.结合周边樱花品种植物花期,认为龙亭樱桃为中国樱桃与福建樱桃的杂交后代.     

三聚氰胺多克隆抗体的制备及鉴定

用三聚氰胺偶联蛋白为抗原,按不同的时间规律及抗原剂量对成年兔进行免疫,获得特异性的三聚氰胺多克隆抗体.效价检验应用蛋白质电泳和间接ELISA方法.应用10%及12.5% SDS-PAGE,验证血清中IgG抗体的产生情况,再用间接酶联免疫吸附试验测得第4次免疫后抗体效价达到1.2×107.此法易于实施,且获得的血清样品具有较高的效价,为今后三聚氰胺多克隆抗体的分离纯化提供了可靠的实验依据.     

SOD-肝素结合结构域融合蛋白的毕赤酵母重组菌株构建及表达

利用基因工程技术将人源Cu, Zn-SOD与EC-SOD的C末端肝素结合结构域（HBD）的编码序列进行密码子优化并人工合成,然后电转化至毕赤酵母进行表达.单因素实验表明,与现有研究的一些重组EC-SOD相比,其比活力提高了1.30～3.78倍.正交分析得最佳摇瓶条件为诱导时间为5 d,初始pH值为5.2,诱导剂量的体积分数为1.0%,酶活可达1 120.2 U?mL^-1,是初始酶活的2.94倍;这些结果表明,SOD-HBD融合蛋白在一定程度上解决了重组EC-SOD表达量低的问题,为重组EC-SOD蛋白的推广与应用提供重要的物质基础条件.     

PTD-Tat之C端融合在活体体内的跨膜递送作用

报道了Tat蛋白转导区域(PTD-Tat)的C端融合蛋白在线虫和小鼠体内的跨膜递送作用.将重组表达质粒pGEX-GFP-Tat在大肠杆菌中高效表达出的融合蛋白GST-GFP-Tat对小鼠腹腔注射(ip)17h后,荧光显微镜观察其心、肝和肾组织,均检测到强烈的绿色荧光,甚至该蛋白跨越了血脑屏障(BBB).此外用融合蛋白喂食线虫发现蛋白分布于线虫消化管道及其原体腔,且表现出的跨膜递送活性与喂食时间和蛋白浓度呈现正相关.该研究结果拓宽了PTD-Tat在蛋白药物递送方面的应用范围,为蛋白质疗法开辟了新的视野,并为其有效应用提供理论指导.     

苦瓜籽中抗真菌蛋白MAP13的分离纯化与表征

将苦瓜籽粗提液分别经阴离子色谱柱、阳离子色谱柱交换后,得到一个具有抗真菌活性的蛋白MAP13.该蛋白经鉴定达到电泳纯,相对分子量为12.7 kDa.经还原剂处理后,电泳结果表明该蛋白由分子量分别为7和6 kDa的两个亚基组成,亚基之间通过二硫键连接.体外抑菌实验表明该蛋白对苹果轮纹病菌、瓜果腐霉病菌和棉花枯萎病菌具有较强的抑制作用.     

小鼠酪氨酸酶的克隆及在大肠杆菌中的表达

采用逆转录-聚合酶链式反应(RT -PCR)方法,从小鼠黑色素瘤总RNA中扩增得到小鼠酪氨酸酶的cDNA .该基因重组到T7启动子控制下的表达载体pET - 2 2b(+)中,构建表达质粒pET -TYR并转化大肠杆菌Rosetta (DE3) .SDS -PAGE及蛋白质序列测定表明,经0 .8mmol/L异丙基硫代- β-D -半乳糖苷(IPTG)诱导后,可高效表达重组的小鼠酪氨酸酶,表达量约占菌体总蛋白质的2 5 % ,表达产物为包涵体     

正常红细胞与异常红细胞的毛细管电泳分离

通过对红细胞的毛细管电泳行为的研究,建立了利用毛细管电泳检测鉴定红细胞不同状态的方法,在含6%葡萄糖的磷酸盐缓冲液(0.1 mol/L pH 7.4),(50 cm/65 cm)×75μm毛细管,进样5 s,电压20 kV,温度25℃的电泳条件下可获得尖锐且对称的细胞峰;同时,成功分离了正常红细胞和被病毒感染的异常红细胞,分离度达1.04,并在此基础上考察不同损伤程度的红细胞的泳动行为.     

鹿茸中促肾上皮细胞增殖蛋白的分离纯化与表征

采用凝胶过滤层析以及离子交换色谱方法,从鹿茸中纯化出一种蛋白,其在SDS-PAGE电泳上显示为一条带,分子质量为53.3 kDa,同时初步考察了该纯化蛋白在6种不同浓度下对狗肾上皮细胞(MDCK)增殖的影响.结果发现,该蛋白在0.124 mg/mL浓度时,MDCK细胞的增殖效果最佳,达73.02%.