带有TAT-PTD跨膜转导域融合基因的原核表达及表达条件优化

为构建pGEX-TAT-GFP原核表达质粒并优化GST-TAT-GFP表达条件,将PCR扩增的基因TAT-GFP克隆至质粒pGEX-2T,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并优化表达条件,表达产物进行SDS-PAGE、Western blot及荧光学特性鉴定.结果表明:构建的质粒经PCR、酶切和DNA测序正确,含有重组质粒的宿主菌经过IPTG诱导表达分子量约为54.3 kD的融合蛋白GST-TAT-GFP,并经优化确定最佳的诱导表达条件.     

酒精对肝细胞损伤的自由基机理研究

为探讨酒精对肝细胞损伤的自由基机理,首先研究酒精对体外培养的L-02肝细胞的增殖和生化指标的影响.实验表明,酒精浓度在100mL·L-1以上时,共培养结束后30h内细胞存活率始终低于50%;当酒精浓度控制在80mL·L-1以下时,细胞恢复过程中存在存活率突降又上升的时间段;当酒精与细胞共培养时间为2、3、4h时,存活率突降又上升的时间段分别为18、12、6h.结果表明,酒精对肝细胞的损伤因浓度和与细胞共培养时间不同而造成化学损伤(即由酒精及其代谢产物本身的毒性直接杀死细胞)和自由基损伤.酒精引起的自由基损伤具有滞后性;随着与细胞共培养时间的延长,自由基攻击的时间会提前,并且所需的酒精浓度会降低.实验结果证实了酒精对肝细胞损伤确实与自由基有重要的关系,也为从清除自由基途径预防和治疗酒精性肝病提供一定的理论依据.     

Tat短肽跨膜递送作用的研究(Ⅰ)--模型蛋白Tat-GFP在毕赤酵母中的表达与纯化

为探讨Tat短肽的跨膜递送作用,利用DNA重组技术在毕赤酵母表达系统中表达融合蛋白Tat-GFP,通过硫酸铵沉淀、SephadexG-75凝胶色谱和POROS-20HQ离子交换色谱分离纯化该融合蛋白.表达和纯化了分子量约为29kD的融合蛋白Tat-GFP,在经融合蛋白作用的细胞内检测到融合蛋白的存在.这个结果可望为外源性蛋白进行细胞内治疗提供一种新的工具.     

hCuZn-SOD基因的克隆、表达及其产物的初步纯化和表征

为获得hCuZn-SOD基因,根据GenBank中人铜锌超氧化物歧化酶(hCuZn-SOD)基因碱基序列,设计扩增引物,用RT-PCR方法从人的肝细胞中克隆出hCuZn-SODcDNA序列,并将它插入pUCm-T载体中,经过DNA序列测定证实,该片段序列的一个碱基发生突变(与报道基因相比),引起其编码第116个氨基酸由G变为D.采用定向克隆的方法将hCu Zn-SOD的cDNA片段克隆到表达载体pGEX-2T上,构建表达质粒pGEX-SOD,并转化大肠杆菌BL21(DE3).SDS-PAGE分析证实,经IPTG诱导,融合蛋白GST-SOD获得高效表达.破碎菌体、上清经谷胱甘肽亲和层析初步纯化后,得到纯度达90%的目的蛋白.活性实验表明,GST-SOD具有生物活性.     

应用比浊法测定凝血酶样酶活性

传统常用目测法观察血浆凝固时间来测定凝血酶样酶的活性,因无法微观地检测凝固过程的起始而导致灵敏度低．应用比浊法检测凝血酶样酶活性,以东菱克栓酶为标准凝血酶样酶,在血浆凝固过程中,浊度随时间基本呈直线变化直至浊度变化最终趋于恒定,表明此时血浆已完全凝固．酶活与浊度一时间变化曲线的直线斜率之间存在严格的线性关系．线性范围为０．０５～０．６５ｕ／ｍＬ．结果表明,比浊法是一种改进的凝血酶样酶测活方法．     

一步洗脱离子交换色谱法分离纯化蛋黄中IgY

报道了一步洗脱离子交换色谱法分离纯化蛋黄水溶性组分 (WSF)中IgY的新方法 .通过将含IgY的WSF用pH7.0磷酸盐缓冲液 (PBS)调整至盐浓度为 0 .0 75mol L ,上样到DEAEToyoprarl6 50M阴离子交换色谱柱 ,用 0 .15mol LpH7.0PBS洗脱、收集 ,再经SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳检验为单一组分 .分离方法简单、分离纯化效果好 ,总蛋白回收率达 93%以上     

蛇毒蛋白质毛细管高效液相色谱分离

利用高分离效能、高灵敏度的毛细管高效液相色谱法, 实现皮摩尔级微量蛇毒蛋白质的组分分离同时利用自行充填的毛细管高效液相色谱柱替代昂贵的原装柱, 既能较好分离复杂的蛇毒蛋白质, 又可满足不同的分离纯化要求     

豆腐乳降胆固醇作用的研究

研究了豆腐乳作为食物蛋白源的降胆固醇作用．以ＩＣＲ小鼠为实验动物模型,随机分成四组,以商业饲料为对照,其余三组分别用酪蛋白、大豆分离蛋白（ＳＰＩ）、豆腐乳粉代替饲料中的蛋白源喂养ＩＣＲ小鼠５周．结果表明,ＳＰＩ、豆腐乳粉表现出明显的降胆固醇作用,而后者表现出更明显的效果．     

苦瓜籽中一种抗胰蛋白肽的分离及抗真菌作用观察

利用凝胶过滤层析Sephadex G-75、强阳离子交换色谱SP-650M,从苦瓜籽中分离纯化出一种活性多肽.该多肽在Tricine-SDS-PAGE上显示为单一的谱带,分子量约为6.8 kDa.在经还原剂二硫苏糖醇(DTT)处理后的电泳结果表明该多肽不含有分子间的二硫键.此多肽是一种胰蛋白酶抑制剂,同时具有抗植物致病菌活性,是一种具有双功能作用的多肽.     

抗生素的毛细管电泳分离

通过对电极缓冲体系、pH值、乙腈添加浓度、N -甲基吗啡啉添加浓度及温度、电压的优化选择 ,用毛细管电泳方法分离土霉素、金霉素、多西环素、四环素、氯霉素 5种抗生素 .应用胺类修饰剂N -甲基吗啡啉作为添加剂 ,提高了抗生素的分离效果 .实验结果表明 ,此方法操作简单快速、成本低、定量准确 (R <0 .9917)、灵敏度高 ,检测极限分别为 0 .0 118,0 .0 2 36 ,0 .0 118,0 .0 118,0 .0 0 0 4ng .