福建药白曲中优势菌的筛选及其特性研究

对福建药白曲中的优势菌进行分离纯化,得到4株毛霉(M1,M2,M3,M4)和3株酵母(Y1,Y2,Y3).初步鉴定3株酵母分别为啤酒酵母葡萄酒变种、产膜毕氏酵母和汉逊酵母.对毛霉和酵母的生理特性研究表明:毛霉产酶高峰期是在发酵第3~4d;4株毛霉中M4产蛋白酶、糖化酶和淀粉酶均相对较高,同时能产生特殊的酒香味;酵母生长最适温度为30℃,最适pH5~6,生长对数期为5~15 h;3株酵母中,Y1产酒精能力最高.综合考虑福建黄酒酿造工艺,选取毛霉M4和酵母Y1作为纯菌种酿造菌株.     

尖吻蝮蛇类凝血酶在大肠杆菌中的表达及其优化

将尖吻蝮蛇类凝血酶基因克隆到载体pET32a(+)上,在大肠杆菌Rosetta2(DE3)中表达N端融合了硫氧还原蛋白的类凝血酶.通过SDS-PAGE检测融合蛋白条带,纤维蛋白原凝结实验检测酶学活性.确定表达菌株后,对其诱导条件进行优化,在30℃诱导3 h,诱导剂IPTG浓度为0.5 mmol·L-1条件下类凝血酶表达水平最高.     

肠道菌群模式菌株的HPLC分离条件优化及其表征

采用高效液相色谱分别考察了肠道菌群模式菌株及各单菌的色谱行为,成功建立了HPLC分离分析肠道菌群模式菌株的最佳洗脱方法,即阶梯式梯度洗脱.结果显示,肠道模式混合菌株经过高效液相色谱分离得到5个明显的洗脱组分,分别为0.10 mol·L~(-1)(脆弱拟杆菌和金黄色葡萄球菌)、0.20 mol·L~(-1)(青春双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌)、0.25 mol·L~(-1)(粪肠球菌)、0.30 mol.L~(-1)(奇异变形杆菌、克雷伯肺炎杆菌和产气荚膜梭菌)和0.50 mol·L~(-1)(大肠杆菌和产气荚膜梭菌)洗脱峰.色谱柱的上样浓度为培养菌液(OD600=0.576)的5倍时,其最大上样量为500μL,且方法分辨率高、重现性好、结果稳定.     

重组SOD在毕赤酵母中表达的发酵工艺研究

以实验室构建的产SOD重组菌为出发菌株,研究其摇瓶发酵工艺条件以提高表达水平,进而在5L高密度发酵. 以确定接种后诱导时间（16h）、诱导剂浓度（2%）、温度（30℃）、初始pH值（6.2）和诱导时间72h为条件,摇瓶水平酶活比初始时提高了64%;经5L罐发酵实验,酶活达到40864U·mL^-1,是摇瓶的86倍.     

带有TAT-PTD跨膜转导域融合基因的原核表达及表达条件优化

为构建pGEX-TAT-GFP原核表达质粒并优化GST-TAT-GFP表达条件,将PCR扩增的基因TAT-GFP克隆至质粒pGEX-2T,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并优化表达条件,表达产物进行SDS-PAGE、Western blot及荧光学特性鉴定.结果表明:构建的质粒经PCR、酶切和DNA测序正确,含有重组质粒的宿主菌经过IPTG诱导表达分子量约为54.3 kD的融合蛋白GST-TAT-GFP,并经优化确定最佳的诱导表达条件.     

TAT-SOD融合蛋白的跨膜转导性质的研究

探讨了融合蛋白TAT-SOD的跨膜转导特性.实验结果表明:非变性的TAT-SOD也可以不受细胞种类限制,突破质膜屏障,显著提高L02、A375、Hela细胞的胞内SOD的活力;TAT-SOD的这种跨膜转导有明显的浓度、时间依赖关系,随着浓度和时间的增加而增加;在TAT跨膜转导SOD过程中,TAT-SOD首先黏附到细胞膜上,黏附量随TAT-SOD浓度的提高而明显增加,随作用时间的延长虽然也有增加,但是在30 min内迅速达到一个较高的水平,其后增加的趋势极为缓慢.细胞紫外线辐射防护试验表明,320 U/mL的TAT-SOD对细胞的保护率约为野生型SOD的5倍.试验结果说明,TAT-SOD具有明显的跨膜转导能力,可提高SOD的生物利用率.     

关于正交配置表构造中若干问题的探讨

对构造正交配置表的矩阵法和非矩阵法作了比较研究,结果表明非矩阵法在构造非对称性问题正交配置表时比矩阵法更简便、可靠、精确,并指出Ｍｉｃｈｅｌｓｅｎ和Ｖｉｌａｄｓｅｎ在讨论用非矩阵法构造对称性问题正交配置表时所存在的问题．同时讨论了正交配置矩阵所具有的各种特征．     

培养条件对发酵乳饮料中酪蛋白颗粒结构和蛋白水解产物的影响

报导了培养条件对发酵乳饮料中酪蛋白颗粒结构和酪蛋白水解程度的影响．结果表明，粒径小的酪蛋白颗粒可在３７℃下而不是在菌种的最适温度下获得．在培养基中添加柠檬酸钠可导致拉径大的酪蛋白颗粒的形成．添加糖则使形成的酪蛋白颗粒的粒径变小．发酵ｓｄ后蛋白质水解物的浓度达到最高值．     

HPLC-DLS法表征麻杏石甘汤中甘草酸成分

研究麻杏石甘汤煎煮过程中甘草酸质量浓度的变化及其聚集状态.采用Daisogel-C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相甲醇-0.2 mol·L-1醋酸铵溶液-冰醋酸体积比为67∶33∶1,在流速为1.0 m L·min-1,柱温为25℃条件下检测不同煎煮时间、超滤前后麻杏石甘汤中甘草酸质量浓度变化.联用Zetasizer粒度仪考察麻杏石甘汤中甘草酸的存在形式.结果表明,麻杏石甘汤煎煮过程中前20 min甘草酸质量浓度显著上升,随后无明显变化.超滤前麻杏石甘汤中颗粒平均粒径约为250.0 nm,甘草酸质量浓度约82.4μg·m L-1,超滤后无明显颗粒,甘草酸质量浓度极小.从而得出结论:麻杏石甘汤煎煮过程中,甘草酸从药材释放到汤剂中,并通过超分子作用自身或与其它化学成分形成胶束而存在于汤剂中.     

一种与核黄素合酶α亚基具有结构相似性的板蓝根多肽的分离纯化与表征

利用离子交换色谱SP-5PW和疏水色谱POROS HP2从板蓝根鲜根水相抽提物中分离纯化多肽组分,并对其进行生化表征.获得一种达到电泳纯的多肽RIP2,其相对分子质量约为6.87 ku,等电点约为7.73,N端氨基酸序列依次为QIGEFATAPF.经数据库搜索比对,发现该多肽与核黄素合酶α亚基具有一定的同源性.细胞毒性实验表明该多肽具有一定抗病毒作用.