胆管癌血清双向凝胶电泳技术的优化

本研究为筛选胆管癌癌变的标志物,开发相应的药物研究,通过对胆管癌血清双向电泳的样品处理、pH范围、上样量的选择、电泳参数的设置和SDS凝胶电泳染色方法等进行比较优化.确定了样品预处理后通过Millpore公司推出的Montage Albumin Deplete kit去除血清中高丰度的白蛋白,再经丙酮沉淀,用裂解液溶解后,采用pH 3.5～10与pH 5～8的两性载体电解质以体积比1∶ 4混合使用,100 μg的上样量,12.5%的SDS-PAGE胶,16 mA/胶进行双向电泳的电泳体系.优化了胆管癌血清双向凝胶电泳的条件,得到了分辨率较好的胆管癌血清的蛋白图谱,为进一步的研究奠定了基础.     

大蹼铃蟾皮肤白蛋白的分离纯化及抗体制备

通过离子交换层析和凝胶过滤层析,在大蹼铃蟾(Bombina maxima)皮肤中得到其白蛋白(BmA-skin).该蛋白具有较强的胰蛋白酶抑制活性.用0.5mg/只BmA-skin作为免疫源免疫大白兔,经三次免疫后,抽取大白兔血液,分离血清,饱和硫酸氨沉淀,获得抗BmA-skin的多克隆抗体.经ELISA方法测定该抗体与大蹼铃蟾白蛋白发生免疫反应,抗体滴度为1:100000.     

光合细菌中氢化酶的分离纯化及其性质研究

以光合细菌为出发菌株,离心得到的菌体经超声破碎后,得到的粗酶液经硫酸铵沉淀、透析、DEAE-52离子交换层析和Sephadex G-200分子筛凝胶层析分离纯化获得电泳纯的氢化酶,且该酶的分子量为62.0 ku和37.0 ku的两个亚基组成的分子量为99.0ku的二聚体,对该酶进行酶学性质的研究得到酶催化最适温度和pH值范围分别为30℃和pH=7.5,且在25～35℃和pH=7.0～8.0范围内催化放氢活力较稳定.     

猪凝血酶的制备和部分性质的研究

以猪血为材料离心制取血浆.采用-20℃冻存血浆,离心,等电点沉淀,(NH4)2SO4盐析得凝血酶原.经Ca2+激活,DEAE-52阴离子交换柱层析纯化,可获得比活性958.9IU/mg的电泳纯凝血酶,收率为56.3%.研究发现,室温(25℃)下放置20小时以上,凝血酶酶活力下降82%;pH大于或小于7.2,酶活力下降明显.     

荧光光谱法研究绞股蓝皂苷与人血清白蛋白的相互作用

在pH=7.40的Tris-HCl缓冲溶液中,用荧光光谱法研究了绞股蓝皂苷与人血清白蛋白(HSA)相互作用的情况.结果表明,绞股蓝皂苷对人血清白蛋白的内源荧光有明显的猝灭作用,猝灭过程为动态猝灭.并计算得到绞股蓝皂苷与HSA的结合位点数和结合常数.通过热力学数据分析,推断出绞股蓝皂苷与人血清白蛋白之间主要靠疏水作用结合.同时采用同步荧光技术考察了绞股蓝皂苷对HSA构象的影响.     

CdTe量子点荧光量子产率及生物标记

采用巯基乙酸为稳定剂,在水相中直接合成CdTe量子点,实现半导体纳米晶体的水溶性.利用巯基乙酸包覆的CdTe量子点外端的羧基与牛血清白蛋白的氨基,通过偶联剂的作用形成酰胺键,从而达到标记蛋白质的作用.利用荧光和紫外可见分光光度计,研究标记前后体系的发射光谱和吸收光谱的变化以及荧光量子产率,通过透析膜对标记后的牛血清白蛋白进行纯化,进一步用琼脂糖电泳证明牛血清白蛋白与CdTe量子点的结合.     

一种新颖的除去重组人血清白蛋白杂质的方法

开发了一种简便高效的去除杂质的方法 (CBIR法).在含6 mol·L-1尿素、体积分数为30%酒精的不含还原剂的体系中,重组人血清白蛋白的结构被部分变性而其二硫键不被破坏,从而使吸附及包裹在其内部的色素等杂质暴露,而与重组人血清白蛋白分离.由于多对二硫键的存在,在去除变性剂情况下,人血清白蛋白恢复原来的构象.通过一系列实验对复性后的人血清白蛋白纯度和活性进行检测,确定这种CBIR法在提高人血清白蛋白纯度的同时,并不影响其活性.此外,也同样适用于重组人血清白蛋白融合蛋白的纯化,具有广泛的适用性.     

安徽省毛茛科植物新记录

驴蹄草属(Caltha L.) 本属植物分布于南、北两半球温带或寒温带地区。文献记载我国约有4种、4变种、2变型。安徽省以往没有分布记录,只在邻省河南、浙江有驴蹄草(Caltha palustris L.)的分布记录;山东有三角叶驴蹄草(C.palustris var.sibirica Regel)的分布记录。1983年我们在安徽省青阳县九华山地区首次采得驴蹄草属植物标本。经鉴定为:     

BCG 65KD热休克蛋白的纯化

目的：研究卡介苗（BCG）65KD热休克蛋白的提纯方法。方法：BCG经37℃恒温振荡培养两周,42℃热休克处理2h,培养液经离心、抽滤、盐析沉淀、SDS-PAGE分离、电泳洗脱等步聚纯化。结果：提纯产物经SDS－PAGE分析,其电泳区带在65KD位置,经抑制试验表明具有较高抗原活性结论：流程方法简单、实用,有助于对IDDM的诊断及其深入研究。     

尿微量白蛋白和血清胱抑素C在造影剂肾病中的联合诊断价值

目的探讨尿微量白蛋白和血清胱抑素C(Cys-C)在冠心病行介入手术后并发造影剂肾病(CIN)患者的早期诊断价值.方法选取102例因冠心病行支架置入术治疗的患者,检测患者尿微量白蛋白、血清肌酐(Scr)及Cys-C水平,观察造影剂肾病的发生情况,探讨尿微量白蛋白、血清Scr以及Cys-C三者之间的关联性.结果 102例经冠脉支架植入术患者CIN的发生率为16.66%.治疗后,CIN患者尿微量白蛋白、血清Scr及Cys-C水平与治疗前比较明显增高(P0.05),尿微量白蛋白、血清Scr以及Cys-C呈明显正相关性(r=0.422,P0.05; r=0.218,P0.05).此外,尿微量白蛋白和Cys-C联合检测的灵敏度及特异度均高于单一检测(P0.05).结论在冠心病行介入术后并发CIN的患者中尿微量白蛋白和Cys-C水平均显著升高,联合检测对早期识别及诊断CIN具有较高的灵敏度和特异度,可作为早期诊断CIN的首选检测指标.