SPC-A-1 70KD热休克蛋白抗原肽复合物的提纯及抗瘤免疫研究

目的探讨人肺腺癌细胞(SPC-A-1)70 KD热休克蛋白的提取方法及体外抗肿瘤作用.方法 SPC-A-1培养至对数生长期,43 ℃加热处理12 h,超声破碎细胞离心取上清、盐析沉淀、30 KD分子筛滤过、SDS-PAGE分离鉴定,MTT法测定其体外细胞毒活性.结果提取产物经SDS-PAGE分析,其电泳区带在70 KD位置处,细胞毒性试验表明,此复合物能够加强脐血有核细胞的抗肿瘤效果.结论该提取方法流程简便、实用,有助于临床广泛开展热休克蛋白的应用.     

黄颡鱼三倍体人工诱导方法的比较研究

应用热休克、冷休克、6-DMAP和CB处理黄颡鱼受精卵,探讨诱导三倍体的适宜方法.4种方法均能诱导黄颡鱼受精卵形成三倍体胚胎.受精卵经热休克处理（受精后第8min,40℃处理2min）,诱导率为93.3%,孵化率为78.6%;冷休克法（受精后第3min,4℃处理15min）诱导率为63.3%,孵化率为82.3%;受精卵经6-DMAP和CB处理得到的诱导率较低,分别为26.7%和10.0%.综合考虑,热休克法及冷休克法为诱导黄颡鱼三倍体的适宜方法.     

热休克诱导日本血吸虫卵细胞凋亡的研究

目的:探讨日本血吸虫卵细胞凋亡现象。方法:从感染兔肝脏分离血吸虫卵,用热休克方法诱导卵细胞凋亡,用DNA凝胶电泳技术检测卵细胞凋亡情况。结果:DNA电泳结果显示经热休克处理的卵细胞DNA呈凋亡特有的“梯状”条带。结论:首次证实日本血吸虫卵细胞存在凋亡现象,外源性刺激可诱导卵细胞凋亡的发生。     

接骨草蔗糖酶同工酶的分离纯化及其部分性质研究

从接骨草幼叶中提取的蔗糖酶粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析纯化，得到3种同工酶．对3种同工酶进行SDS-PAGE和IEF电泳均显示一条蛋白带，其亚基分子量分别为45．8KD，44．3KD，43．2KD；等电点分别为pH4．0，pH3．8，pH3．75．凝胶过滤测得3种同工酶全酶分子量分别为91．2KD，89．1KD，87．4KD，表明3种同工酶均由2个相同亚基组成，其表观Km分别为30mmol／L，57.1mmol／L，65mmol／L;Vmax分别为98μg／min，48μg／min，35μg／min．同工酶Ⅰ和同工酶Ⅲ在pH4．4～5．0时有最大活性，同工酶Ⅱ则在pH3．9～4．2时有最大活性．3种同工酶均在pH3-6范围内比较稳定．同工酶Ⅰ和同工酶Ⅱ在48～52℃有最大活性，同工酶Ⅲ在50～55℃有最大活性．3种同工酶均在50℃以下有较好的稳定性．     

肝大部切除前后热休克处理对热休克蛋白、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性影响的分析

综合了磷酸酶的原位复性电泳、体视学分析、比色分析等方法分析①切除大白鼠大部分肝后的肝再生期间,②热休克处理大白鼠（４６℃、３０ｍｉｎ）恢复８ｈ,再切除大部分肝后的肝再生期间,③切除大部分肝恢复４ｈ,再热休克处理（４６℃、３０ｍｉｎ）后的肝再生期间热休克蛋白（ＨＳＣ７０／ＨＳＰ６８）、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）和碱性磷酸酶（ＡＫＰ）动态变化的资料,从６个方面比较分析了ＨＳＣ７０／ＨＳＰ６８,ＡＣＰ和ＡＫＰ在肝再生中的相互关系及对肝再生的可能作用     

精子膜抗原提取、纯化及SDS—PAGE分析

目的：分析正常生育男性精细胞膜抗原，以便进一步应用精子抗原于其抗体的检测。方法：1．精子膜抗原粗制方法，按“全国临床检验操作规程”(第二版，1998年，P398)描述的方法进行，即收集20名正常生育男性精子样品，用含0．5％NP—40的Tris—Hcl缓冲液抽提。2．粗提液蛋白含量测定采用紫外分光光度法。3．蛋白抗原纯化方法，采用冰冷乙醇沉淀法，以粗提液：冰冷95％乙醇(—20℃)＝1：9(v/v)混合，并按1／50容量加入饱和乙酸钠混匀，于—20℃放置48h。取出后于—10℃，1800g离心30分钟，弃上清，例放试管，沥干沉淀，—20℃保存备用。4、SDS—PAGE分析，步骤3所获样品，以NS溶解，通过紫外分光光度计测定含量，并调节到6mg/ml。SDS—PAGE分析条件的点样量25μl，分离胶17．5％，隔层胶5％，电泳缓冲液用甘氨酸—Tris，PH18．6，电压20v过夜，次日再150V4h。电泳后凝胶经考麦斯亮兰染色、乙酸—甲醇洗脱，直至显示清晰电泳图谱。结果：1、粗提液经紫外分光光度计测定，其原液含蛋白质为24mg/ml，最大吸收峰值280nm。2．纯化的精子膜抗原溶液经SDS—PAGE分析，图谱显示2个蛋白斑，与标准蛋白比较，其分子量一个为35—45KD，另一个为15—25KD；75—85KD处出现微量痕迹。结论：我们成功地进行了精子膜抗原提取、纯化及SDS—PAGE分析实验，结果有清晰记录，为进一步应用精子抗原检测精子抗体的研究提供物质基础。     

大黄鱼三倍体诱导的初步研究

以温度休克方法研究了养殖大黄鱼（Pseudosciaena crocea）三倍体诱导的处理条件,结果表明：1）采用体克和热休克方法均可诱导出三倍体大黄鱼,三倍体诱导率明显受处理温度、处理起始时间以及处理持续时间等因子的影响;2）4℃冷休克条件下,处理起始时间为受精后2min,处理℃持续时间为10min有较高的孵化率和三倍体诱导率;3）37℃热休克条件下,处理起始时间为受精后2．5min,处理持续时间为5min也可获得较高的孵化率和三倍体诱导率。     

流感病毒RNA聚合酶重组质粒pQE32-PB2-1转化效率的实验研究

目的:甲型流感病毒RNA聚合酶PB2-1亚基的基因工程重组质粒pQE32-PB2-1转化入受体菌,并优化转化条件,以建立其高效、快速的转化体系.方法:以大肠杆菌DH5α菌株为受体菌,研究了氯化钙溶液浓度(25、50、75、100mmol/L),热休克温度(30、37、42、50℃),转化时间(15、30、60、75min)及热休克作用时间(60、80、100、120sec)对基因工程重组质粒pQE32-PB2-1转化效率的影响.结果:氯化钙溶液浓度、转化时间、热休克温度、热休克作用时间对转化效率的影响有统计学意义(P<0.05).氯化钙溶液浓度和转化时间之间及热休克温度和热休克作用时间之间分别存在交互作用.结论:在本实验条件下,以75mmol/L氯化钙制备感受态细胞,转化60min,经42℃热休克作用120秒后直接涂平板选择转化子,可获得高效、快速的转化效果.     

热激对高温敏感核不育水稻芽生长及其蛋白质组分的影响

温敏不育水稻培矮64S芽期经热激(38℃)处理后，与其在22℃条件下相比较，芽蛋白组分表现出明显差异：在大干97．4KD、小于14．4KD和66．2～42．7KD范围内分别新增2条、1条和3条蛋白质带，另有8条带加强(42．7～14．4KD)和2条带减弱(97．4～42．7KD)。与热激条件下的常规稻湘晚籼2号比较，培矮64S经热激(38℃)后新增了4条蛋白质带，另有2条带加强和1条带减弱。在热激后，温敏不育水稻培矮64S芽中蛋白质组分的这些变化，必然引起植株体内某些酶系统的改变，以致影响芽的正常生长发育，使芽的生长受到明显的抑制。     

金鱼三倍体诱导技术的初步研究

运用冷休克、热休克、静水压三种方法抑制金鱼受精卵第二次减数分裂，诱导金鱼三倍体．结果表明：金鱼三倍体诱导率明显受压力、处理温度、处理起始时间以及处理持续时间等因子的影响；在22℃水温下，受精8min后，在0℃冷休克条件下，持续处理14min的三倍体诱导率可达25．5％；受精10min后，在39℃热休克条件下，持续处理1min，三倍体诱导率可达100％；受精4min后，在550kg／cm^2静水压休克条件下，持续处理3min三倍体诱导率可达28．6％．还对提高金鱼三倍体诱导率和孵化率的方法进行了探讨．     

酵母双杂交筛选与视黄醇结合蛋白有相互作用的蛋白质

为了研究视黄醇结合蛋白(RBP)在维生素A代谢调控中的作用和与相关疾病发生、发展的关系,以RBP作为诱饵基因构建了融合表达载体pGBKT7-RBP;在排除自身转录激活活性的基础上,与人肾脏cDNA预转库融合筛选(Pretransformed MATCHMAKER Lbraries),经营养缺陷型和X-α-gal显色鉴定,从中筛选出三种与RBP有相互作用的新蛋白质,并从人睾丸cDNA库中克隆了这三个基因的全长序列。     

蛋白质及其水解物的分析应用

蛋白质是重要的生物高分子,具有催化、传输、运动、防御和调节等重要生理功能.本文介绍了蛋白质的功能特性、蛋白水解物的研究应用现状,展望蛋白质改性的应用前景.     

基于网络拓扑和多种生物信息融合的关键蛋白质识别算法

关键蛋白质的识别有助于了解细胞存活的基本需求,并为疾病治疗找到新方法,但是蛋白质自身携带着复杂的生物特性,仅依赖网络拓扑特性不能精准地判断其关键性.因此,提出一种新方法来提高识别关键蛋白质的准确率.首先,考虑网络拓扑特性以及蛋白质在不同亚细胞中的重要程度,定义了SNC方法;其次,利用蛋白质在亚细胞与复合物信息中的特性定义了SIDC方法;最后,通过融合网络拓扑结构和多源生物信息,提出了关键蛋白质识别算法CTB.在YDIP、YMIPS和Krogan数据集上利用精准率-查全率等多种评估方法进行实验,结果表明CTB算法提高了识别关键蛋白质的性能.     

测定饲料蛋白质含量的一种新方法

本文介绍一种测定各种饲料蛋白质含量的新方法—蛋白质水解茚三酮法。将标准蛋白和几种饲料样品加3％H_2SO_4,直接加热6小时,通过蛋白质水解产生的氨基酸与茚三酮反应的光吸收值,计算总蛋白量;与未水解的标样及饲料样品的甲醇提取液的茚三酮反应吸收值之差计算去游离氨基酸的纯蛋白质量。本法与凯氏氮素定量法无显著差异,与DAVID L·MARKKS报导的密封水解24小时的效果相同。     

BIA技术及其在蛋白质科学研究中的应用

生物大分子相互作用分析(BIA)技术可以实时观察分子问相互作用．本文简要阐述了该技术的基本原理及系统组成，以及在蛋白质科学研究中的应用．包括配体垂钓，蛋白质相互作用，蛋白质功能鉴定等．     

Expressions of Two Rice Mip Genes under Water Stres,Salt Stress and Exogenous ABA

ＥｘｐｒｅｓｉｏｎｓｏｆＴｗｏＲｉｃｅＭｉｐＧｅｎｅｓｕｎｄｅｒＷａｔｅｒＳｔｒｅｓ，ＳａｌｔＳｔｒｅｓａｎｄＥｘｏｇｅｎｏｕｓＡＢＡ＊ＺｈｏｕＺｈｉｑｉ（周志琦），ＬｉｕＱｉａｎｇ（刘强），ＫａｚｕｋｏＹａｍａｇｕｃｈｉＳｈｉｎｏｚａｋｉ＋，Ｈｉｒ...     

病毒诱导的植物抗性机制及其应用的研究

病毒的多种基因产物可引起植物的病源诱导抗性，如外壳蛋白、复制酶、运动蛋白缺陷的干涉RNA和DNA以及非翻译RNA等。对植物病源诱导抗性的研究有助于阐明病毒的致病机理并对植物抗病的应用具有重要的理论和应用价值。     

大豆蛋白质的溶出工艺研究

采用凯氏定氮法和Bradford法测定蛋白质含量,计算大豆浆液中大豆蛋白质的溶出率。通过对NaCO3浓度、料液比、浸泡时间和温度的改变优化大豆蛋白质的溶出条件。结果表明,在常温下最佳的浸泡条件为0.4%的NaCO3和16h的浸泡时间,根据对浆料蛋白浓度的要求选择适当的料液比,在50℃条件下浸泡时间减少到6h。     

番茄丛矮病毒组(Tombusviruses)成员外壳蛋白是一种单双链DNA结合蛋白

应用South-western技术以番茄丛矮病毒组(tombusvirus)6种病毒为材料研究了它们的外壳蛋白对单双链DNA的结合作用。结果表明tombus-组6种病毒(PLCV,AMCV,CNV,CyRSV,PAMV,TBSV)的外壳蛋白及PLCV重组外壳蛋白是一种单双链DNA结合蛋白,对单链DNA的结合能力远远超过双链DNA。这种结合作用可能与在tombus一组病毒外壳蛋白立体空间结构有关,因为当蛋白变性时结合作用大大降低。另外,一旦外壳蛋白与单链DNA发生相互作用,用4moL/L尿素或0.1％SDS在90°C水浴中难以洗掉。Tombus一组病毒外壳蛋白这种对单双链DNA的结合作用可能表明它们是一种参与病毒体内运输或调节复制的蛋白。     

G蛋白信号转导调节因子的研究

G蛋白信号转导调节因子（Regulator of Gprotein signaling,RGS）是G蛋白的信号转导系统的负性调节因子,大部分RGS蛋白通过GTP酶激活蛋白方式发挥作用．本文概述了G蛋白信号转导调节因子的结构、功能、意义及国际最新的研究趋势．对RGS的深入研究有利于对信号转导调节的了解．