改性菠萝皮渣纤维素固定化菠萝蛋白酶研究

为了探究改性纤维素作为固定化酶载体的可行性,在离子液体中用L-丝氨酸对提取的菠萝皮渣纤维素进行均相改性,并将改性菠萝皮渣纤维素用于固定化菠萝蛋白酶。采用傅里叶变换红外光谱仪、热重分析仪以及X射线衍射光谱仪对菠萝皮渣纤维素、改性菠萝皮渣纤维素以及固定化酶进行了表征。结果表明,菠萝皮渣纤维素被成功改性,晶体结构从纤维素Ⅰ型转变为纤维素Ⅱ型;菠萝蛋白酶成功地固定在改性菠萝皮渣纤维素上,且固定化酶较改性菠萝皮渣纤维素的热稳定性得到提升。对酶的固定化工艺和酶学特性进行研究,结果表明,固定化酶的优化制备工艺为菠萝皮渣纤维素与离子液体的质量比为3∶100,L-丝氨酸与菠萝皮渣纤维素的质量比为1∶1,戊二醛溶液体积分数为1%,交联时间为1.0h。与游离菠萝蛋白酶相比,固定化菠萝蛋白酶具有更好的温度稳定性和酸环境稳定性。     

新型四氧化三铁荧光纳米探针构建及活性研究

基质金属蛋白酶-2(MMP-2)是一类重要的肿瘤标志物，开发能特异性检测MMP-2的智能型荧光纳米探针，对于癌症的早期诊断与治疗都至关重要。利用亚铜离子催化的“点击”化学反应将荧光素(FITC)和多肽底物KCPLGVR偶联，并与dp-PEG-Mal修饰的四氧化三铁纳米颗粒(Fe₃O₄)通过巯基与马来酰亚胺的反应，制备得到一种新型MMP-2特异性响应荧光纳米探针Fe₃O₄-PEG-KCPLGVR-FITC。通过体外重组酶检测和肿瘤细胞成像结果表明，合成的探针对过表达MMP-2的MCF-7细胞(人乳腺癌细胞)表现出较好的检测灵敏度和特异性，在MMP-2过表达的肿瘤早期诊断方面具有一定的应用潜力。     

双拷贝v-cath基因的重组AcMNPV的构建与功能

利用AcMNPV穿梭载体Bac-to-Bac系统构建了分别由标状病毒极早期基因iel启动子和极晚期基因ph启动子控制的AcMNPV组织蛋白酶基因v-cath表达的两种双拷贝重组杆状病毒。用这两种重组病毒感染细胞主 幼虫，研究了不同时相v-cath基因的表达及细胞和幼虫死亡的机理。SDS－PAGE和Western blot分析结果表明：在感染Sf9细胞12h后（12hpi)，重组病毒dciAcMNPV的晚期基因v-cath在早期基因iel启动了驱动下得到表达。到48hpi，重组病毒dcdAcMNPV中v-cath基因在晚期和极晚期ph启动子驱动下高水平表达，阴性对照v-cath缺陷型病毒（ncAcMNPV)则没有V－CATH蛋白表达。毒力实验表明它们的杀虫活性大小依次为dcdAcMNPV＞dciAcMNPV＞野生型AcMNPV＞ncAcMNPV。根据双拷贝重组病毒的毒力和幼虫的死亡特性，AcMNPV的v-cath基因是一个毒力辅助因子和与虫体液化死亡有关的基因。所构建的重组病毒dcdAcMNPV由于是通过改变病毒自身基因的表达时相和拷贝数而提高了杀虫效率，因而不存在田间释放时的安全性隐患，有望成为一种新型的病毒杀虫剂。     

制革用脱毛碱性蛋白酶基因的分子进化

皮革的生物制革（脱毛）是解决和改善传统制革工业对环境污染的一个重要转变，也是现代生物技术发展的一个重要领域。生物制革的关键是筛选获得高效的脱毛蛋白酶，但是野生型的蛋白酶往往不能很好地满足现有的制革工艺。为此，我们利用现代基因工程技术对野生型的蛋白酶进行改造，创制更加符合现有制革工艺的碱性蛋白酶。     

羊毛表面性状的微观研究

借助扫描电镜和透射电镜对洗净澳毛的表面微观结构进行研究。并通过对其鳞片细胞的红外吸收光谱图的化学结构分析。建立了比较完整的羊毛纤维表面微观物理结构和化学结构模型。经过变性处理后，羊毛纤维表面性状结构发生了预期变化。进一步证明了毛纱上浆率低的根本原因是表面疏水性物质的存在。     

纤粘连蛋白-整合素相互作用启动胚泡中基质金属蛋白酶活性

纤粘连蛋白是一种主要的细胞外基质，能够与整合素相互作用，介导胚泡的粘附和扩展．首次发现与纤粘连蛋白共同培养的小鼠胚泡产生基质金属蛋白酶－２和－９；若无纤粘连蛋白，小鼠胚泡不产生基质金属蛋白酶－２和－９；焦点粘着激酶是整合素信号转导通路中的关键信号分子，其反义寡聚脱氧核酸显著抑制纤粘连蛋白诱导的胚泡基质金属蛋白酶活性．结果表明，纤粘连蛋白可能通过其整合素受体的信号转导通路，启动小鼠胚泡基质金属蛋白酶－２和－９的表达，协调胚泡的侵入能力和子宫内膜的接受能力，从时间和空间上保证植入相关事件的准确性．     

Biosynthesis of selenosubtilisin: A novel way to target selenium into the active site of subtilisin

Glutathione peroxidase （GPx, EC1.11.1.9）, an important anti-oxidative selenoenzyme, can catalyze the reduction of harmful hydroperoxides with concomitant glutathione, thereby protecting cells and other biological issues against oxidative damage. It captures considerable interest in redesign of its function for either the mechanism study or the pharmacological development as an antioxidant. In order to develop a general strategy for specifically targeting and operating selenium in active sites of enzymes, the catalytically essential residue selenocysteine （Sec） was first successfully bioincorporated into the catalytic center of subtilisin by using an auxotrophic expression system. The studies of the catalytic activity and the steady-state kinetics demonstrated that selenosubtilisin is an excellent GPx-like biocatalyst. In comparison with the chemically modified method, biosynthesis exhibits obvious advantages： Sec could be site-directly incorporated into active sites of enzymes to overcome the non-specificity generated by chemical modification. This study provides an important strategy for specifically targeting and operating selenium in the active site of an enzyme.     

酶复合整理改善羊毛织物的防缩性能

为解决单独用蛋白酶处理羊毛织物时防缩效果不明显且强力降低的问题,提出用碱性蛋白酶对羊毛织物进行处理,部分去除羊毛纤维的鳞片,在此基础上再用谷氨酰胺转胺酶对羊毛进行处理,实现羊毛纤维蛋白质分子之间的交联.扫描了整理前后羊毛织物的红外光谱图,这种酶复合整理工艺使得羊毛织物的防缩性能显著改善,而强力和伸长性能基本保持不变,从而更具应用价值.     

地热田碱性蛋白酶菌株的选育与酶性质的研究

从温泉附近土样中成功分离到一株高温碱性蛋白酶产生菌株H-1,经初步鉴定为芽孢杆菌（Bacillus.）菌株H-1最佳产酶的发酵时间为67.5h,该酶在30～70℃酶活性随温度升高而增强,70℃酶活性达到最高,在pH7.0～11.0范围内较稳定,从菌株H-1液体发酵液中提取粗酶液,经CMC-I阳离子交换层析和SepHadex G-75凝胶层析,得到单一组分;通过Native-PAGE、SDS-PAGE电泳鉴定,粗酶至少含有3种碱性蛋白酶同工酶;单组分碱性蛋白酶的比活力为3875U,相对分子量约为31KDa.