整合素αvβ3对正常和癌变的人滋养层细胞分泌基质金属蛋白酶的影响

胚胎植入过程中，滋养层细胞对母体子宫内膜的侵润过程与肿瘤的迁移非常类似，显著区别在于前者是受严格调控的有节制侵润.利用体外培养的人早孕胚胎细胞滋养层细胞和人绒毛膜上皮癌细胞模型，通过RTPCR、明胶酶谱和免疫细胞化学分析等手段，对比研究了整合素αvβ3对正常和肿瘤细胞产生基质金属蛋白酶的调节. 结果表明，正常细胞滋养层细胞和绒毛膜上皮癌细胞均可产生整合素αvβ3；整合素αvβ3抗体能够促进正常滋养层细胞产生基质金属蛋白酶的能力，但抑制绒毛膜上皮癌细胞中基质金属蛋白酶的分泌. 这表明整合素能够调节基质金属蛋白酶表达，同时也表明正常和肿瘤化的滋养层细胞中基质金属蛋白酶的表达存在截然不同的调节机制.     

生物技术在水产食品加工上之应用--利用生物技术生产鱼肉蛋白降解抑制剂

鲭鱼 (Scomberaustralasicus)、鳕鱼 (Merlucciusproductus)、鲑鱼 (Oncorhynchusketa)、大西洋产鳕鱼或比目鱼等鱼浆在冷冻贮藏过程中极易因CathepsinsB、H、I等之残存而造成品质下降 ,而且于制造鱼浆加工品时 ,常会在加热过程发生鱼浆解胶 (thermaldegradation)之品质劣变问题 .由过去之研究结果显示 ,CathepsinB、L等硫氢蛋白酶均会影响鱼浆蛋白的冷冻安定性及热凝胶特性 .由于从农、畜、水产原料中分离与制备蛋白酶抑制剂极不经济 ,且产量也受限 ,因此 ,本研究室将鸡肺的cystatincDNA序列利用pET - 2 3a(+)表现载体表现 ,并转送到大肠杆菌AD4 94 (DE3)pLysS细胞内 ,经由isopropyl- β -D -thiogalactopyranoside(IPTG)诱导 ,可在大肠杆菌细胞质内表现出高量具有正确蛋白分子内双硫键及活性之recombinantcystatin .基于安全及工业上量产之考量 ,本研究室亦将此cystatin的cDNA序列 ,接到PGAPZαC表现载体上并将此载体转送入酵母菌PichiapastorisX - 33细胞中 ,令cystatincDNA整合到此酵母菌核内之染色体DNA上 ,经由此载体上之GAPpromoter的调控及α -factorprepros equence之引导可以于培养液中大量的表现出具有正确蛋白结构及活性之胞外分泌型recombinantcystatin .以上两蛋白质均经由分离纯化及生化     

转番茄蛋白酶抑制剂Ⅱ基因烟草植株的培育及其抗虫特性分析

将分离的番茄蛋白酶抑制剂Ⅱ基因cDNA序列tin2和含有一个109bp内含子的基因组DNA序列tin2i,分别构建成植物表达载体pBCT2和pBT2.然后通过农杆菌介导转化烟草叶片外植体,获得了两类转基因烟草植株.分子生物学检测和胰蛋白酶抑制剂活性分析结果表明,tin2序列和tin2i序列都能够在转基因烟草中正确表达.抗虫活性检测结果显示,转tin2i序列的烟草植株的抗虫活性高于转tin2序列的烟草植株,推测这可能与tin2i序列中内含子的存在有关.     

鸡肉蛋白水解液的研究

用酶水解鸡肉 ,通过单因素实验确定胰蛋白酶 1、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰酶 2、胃蛋白酶水解鸡肉的最适条件 ,并确定在它们的最适条件下 ,胰蛋白酶和木瓜蛋白酶是单酶水解较好的酶。在双酶水解中 ,发现胰蛋白酶 1与酸性蛋白酶在各自最适条件下组合水解鸡肉水解率最高 ,进一步确定双酶水解的条件为胰蛋白酶先在 5 0℃ ,p H8.5 ,加酶量 40 0 0 U/ g蛋白质 ,固液比 1∶ 4,水解 3h,后酸性蛋白酶在 45℃ ,p H2 .5 ,加酶量 40 0 0 U/ g蛋白质水解 2 h。在这种组合下酶解 ,水解产物的水解度为 40 .5 % ,蛋白回收率为 81.0 %     

基质金属蛋白酶-28在人细胞滋养层细胞与绒毛膜癌细胞系JEG-3细胞中的表达

细胞滋养层细胞和肿瘤细胞的侵入行为具有惊人的相似性，其中基质金属蛋白酶（MMPs）是滋养层细胞和肿瘤细胞侵入的非常重要的介导因素。近来，MMPs家族的一个新成员－MMP－28被克隆并确定下来，采用反转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）、酶谱分析和Northern blot等方法，检测了妊娠早期细胞滋养层细胞和绒毛膜癌细胞系JEG－3细胞中MMP－28的基因表达和蛋白分泌情况。RT－PCR显示，细胞滋养层细胞JEG－3细胞均有MMP－28mRNA的表达；Northern blot研究显示，JEG－3细胞中MMP-28mRNA的表达强于细胞滋养层细胞中MMP－28mRNA的表达，具有时间依赖关系；酶谱分析显示，JEG－3细胞中MMP－228蛋白分泌 活性高于细胞滋养层细胞中MMP－28蛋白分泌活性，呈时间依赖关系，这与MMP－28的基因表达结果相一致。进一步证明了MMP－28可能在正常妊娠和肿瘤发展等一些与组织重建有关的过程中发挥一定的作用。     

基质金属蛋白酶-26(MMP-26)在小鼠胚胎植入过程中的作用

基质金属蛋白酶-26（MMP-26，又称Endometase或基质水解素-2）是MMPs家族的一个新成员，它可在胎盘，子宫以及不同肿瘤细胞系中表达，采用子宫角注射，免疫组化，原位杂交，胚泡与子宫上皮单层培养，免疫印迹，RT-PCR和RNA印迹等多种体内外实验方法研究并报道了MMP-26在小鼠胚胎中的表达以及MMP-26抗体在胚胎植入中的作用，研究表明，MMP-26的mRNA与蛋白在小鼠胚泡中均有强烈的表达，此外，体内研究显示，MMP-26抗体能显著抑制小鼠胚胎的着床；在体外培养体系中，MMP-26抗体可显著抑制小鼠胚泡在子宫上皮单层上的黏附与扩展；同时，MMP-26抗体以剂量依赖关系抑制整合素αV亚基mRNA和蛋白的表达，研究提示，MMP-26可能直接或间接参与滋养层细胞侵入子宫内膜的过程，促使小鼠胚泡成功植入。     

胰岛素口服给药

注射是胰岛素目前临床应用的惟一给药途径，但由于半衰期短，需长期频繁注射，造成患者身体、心理和经济上的极大负担，口服胰岛素的最大优势在于减少与副作用相关的注射次数，增加病人的治疗依从性，从长远上降低糖尿病相关的发病率和死亡率，由于口服方便、安全且最符合内生胰岛素分泌模式，研发胰岛素口服剂型是目前国际胰岛素药物的发展前沿，研究集中在分子修饰、使用酶抑制剂和吸收促进剂，微粒等方面，其中，用生物降解高分子材料制备包封率、载药率和制剂稳定性较高的胰岛素毫微粒正成为主流方向，是最有希望的胰岛素口服制剂制备途径，口服剂型的研制成功、将是胰岛素非注射剂型研究的革命性突破，并会产生巨大的理论和商业价值。     

鱼中高温激活蛋白酶的提取纯化

以市售鱼为原料，进行其高温激活蛋白酶（ＨＴＡＰ）的提取纯化通过抽提、高速离心分离、ＤＥＡＥ－ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ６５０Ｍ离子交换色谱、ＳＥＰＨＡＣＲＹＬＳ２００凝胶过滤等方法，把ＨＴＡＰ从鱼中分离提取出来运用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）法对分离提纯的ＨＴＡＰ纯度进行鉴定，并通过此法测出了该ＨＴＡＰ的分子量为３９０００     

小麦巯基蛋白酶抑制剂的纯化和性质研究

将小麦麦胚和麸皮的浸取液，经加热和利用ｐＨ沉淀，获得疏基蛋白酶抑制剂粗品；再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ柱上得到均为单一蛋白带的小麦ＣＰＩ纯品。其纯化度为原料浸液的４２倍。由ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得ＣＰＩ分子为单一肽链     

大豆叶片衰老过程中半胱氨酸蛋白酶基因的特异性表达

用反转录和多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和琼脂糖凝胶电泳方法对大豆叶片衰老过程中半胱氨酸蛋白酶基因的表达情况进行了研究，发现由ＰＣＲ扩增出的ｃＤＮＡ带谱会随着叶片的不断衰老而发生较明显的改变，初步证明，至少有一条ｃＤＮＡ带为绿叶样品所特有，另外，两条ｃＤＮＡ带则为衰老叶片样品所特有，该实验结果为进一步分离大豆叶片衰老时特异表达基因及其启动子和最终实施转基因工程奠定了基础。