新生大鼠海马神经干细胞的体外培养及鉴定

的探讨新生大鼠海马神经干细胞（NSC）的体外培养和诱导分化的条件和特点。方法分离出生1d大鼠海马,在表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和B27联合作用下使其稳定增殖,用5-溴脱氧尿苷（BMU）标记处于增殖状态的神经干细胞,应用免疫荧光染色方法行巢蛋白（Nestin）、5-溴脱氧尿苷（BrdU）、β-Ⅲ型微管蛋白（Tuj-1）、波形蛋白（Vimenfin）和Galc-C免疫荧光染色,对NSC的增殖及其分化的细胞进行鉴定。结果体外培养的NSC增殖成神经干细胞球并传代,鉴定为Nestin染色阳性细胞和5-溴脱氧尿苷（BrdU）标记染色阳性细胞,并可诱导分化为神经元细胞（Tuj-1染色阳性细胞）、神经胶质细胞（Vimentin染色阳性细胞）和少突胶质细胞（GMc-C染色阳性细胞）。结论采用无血清培养基中加入特定生长因子的培养技术,可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的新生大鼠海马神经干细胞。     

新生大鼠海马神经干细胞的体外培养及鉴定

目的 探讨新生大鼠海马神经干细胞(NSC)的体外培养和诱导分化的条件和特点.方法 分离出生1d大鼠海马,在表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和B27,联合作用下使其稳定增殖,用5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记处于增殖状态的神经干细胞,应用免疫荧光染色方法 行巢蛋白(Nestin)、5-溴脱氧尿苷(BrdU)、β-Ⅲ型微管蛋白(Tuj-1)、波形蛋白(Vimentin)和Galc-C免疫荧光染色,对NSC的增殖及其分化的细胞进行鉴定.结果 体外培养的NSC增殖成神经干细胞球并传代.鉴定为Nestin染色阳性细胞和5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记染色阳性细胞,并可诱导分化为神经元细胞(Tuj-1染色阳性细胞)、神经胶质细胞(Vimentin染色阳性细胞)和少突胶质细胞(Calc-C染色阳性细胞).结论 采用无血清培养基中加入特定生长因子的培养技术,可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的新生大鼠海马神经干细胞.     

神经生长因子对神经干细胞向少突胶质细胞分化的诱导作用研究

目的体外分离和培养大鼠海马神经前体细胞,在此基础上探索在体外环境下使神经干细胞定向分化为少突胶质细胞,为后续的神经干细胞移植提供实验基础.方法取孕10 d的Wistar大鼠胚胎脑的海马,分离神经前体细胞,将单克隆的神经干细胞球贴壁,并使用生长因子(NGF),分析不同浓度的NGF对神经干细胞分化的影响.在含NGF的NSC培养基中进行体外培养,以GalC免疫组化标记分化后的少突胶质细胞,对神经干细胞的分化特性进行鉴定.结果NGF可促进神经前体细胞的增殖及神经球的克隆形成,并获得了Nestin阳性的神经前体细胞,其可分化为分别表达GaIC的阳性细胞.结论体外分离和培养的大鼠海马神经前体细胞,在NGF生长因子的作用下,神经干细胞可定向分化为少突胶质细胞,并与培养基中NGF的浓度有一定的关系,有望应用于脱髓鞘神经系统疾病的细胞移植治疗.     

胚胎大鼠室下带神经干细胞分离、培养与鉴定

自从1992年Reynolds和Weiss首先报道在成年小鼠纹状体中分离培养出能在体外不断增殖、具有多种分化潜能的细胞群以来,神经干细胞(neural stem cells,NSCs)诱人的应用前景激发了许多科学家的兴趣．近来的研究进一步证实,胚胎和成年哺乳动物的神经组织和人脑中可以分离出神经干细胞,在体外培养时可被生长因子诱导而增殖,并具有分化成神经元和胶质细胞的潜能．本研究采用无血清培养技术,从孕14d胚胎大鼠前脑室下带(SVZ)中成功分离培养出神经干细胞,经增殖获得大量的克隆球团,用nes-     

ICR小鼠胚胎NSCs体外培养和诱导分化

利用表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）的联合促进作用使原代胚胎皮层神经干细胞（Neural Stem Cells,NSCs）稳定增殖,以此来分离培养ICR小鼠胚胎NSCs,并在体外高效诱导成神经元。通过诱导分化的对照实验获得神经元分化比例最高的方法。免疫细胞化学不仅证实了培养的NSCs可表达Nest...     

纹状体神经干细胞的分离培养及其鉴定

胎脑内存在有能分化为神经元和神经胶质细胞的神经干细胞 .在表皮生长因子 (EGF)或碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)存在的条件下 ,从 14d胎鼠纹状体分离培养神经干细胞 ,并通过间接免疫荧光细胞化学法对其鉴定 ,发现大量呈 Nestin抗原阳性的干细胞团的形成 ,EGF和 b FGF对神经干细胞的增殖及分化能产生一定的影响 ,但它们对增殖及分化的影响是有差别的 .     

条件培养液诱导躯干部神经嵴干细胞向雪旺细胞分化的实验研究

目的:利用雪旺细胞条件培养液诱导躯干神经嵴干细胞向雪旺细胞方向分化,为组织工程化人工神经提供更好的种子细胞。方法:组织块法获取向躯干神经嵴干细胞,并进行免疫细胞化学双重染色鉴定,胶原酶消化传代并将其置于雪旺细胞条件培养液,4周后行S-100和MBP免疫细胞化学染色来鉴定细胞类型。结果:躯干神经嵴干细胞在雪旺细胞条件培养液中可存活、增殖,并且MBP染色为阳性,表明可定向分化为功能性的雪旺细胞。结论:将传代的躯干神经嵴干细胞置于雪旺细胞条件培养液中可使其分化为功能性的雪旺细胞。     

一些神经营养因子对神经干细胞的增殖和分化的影响

胚胎和成年哺乳动物脑内存在能分化为神经元和神经胶质细胞的细胞干细胞,从成年脑和胚脑分离的神经干细胞能在体外分裂并进一步分化成神经元和胶质细胞,许多生长因子,如成纤维细胞生长因子和表皮生长因子等都参与了这一分裂、分化过程。对神经干细胞的增殖及分化产生一定的影响,但在不同的情况下,它们对增殖及分化的作用不同。     

大鼠胚胎神经干细胞的培养和鉴定

目的　体外培养和鉴定神经干细胞 .方法　从胎鼠前脑取出脑组织 ,采用酶消化、机械吹打、对倍稀释成单个细胞 ,经无血清培养获得单细胞克隆 ,由免疫细胞化学方法鉴定分离的神经干细胞 .结果　从胎鼠脑中分离的细胞具有连续传代形成克隆的能力 ,表达神经干细胞蛋白 (nestin) ,并能诱导分化成神经元和神经胶质细胞 .结论　分离的细胞是神经干细胞 .     

新生小鼠神经干细胞的分离、培养和鉴定

目的：探讨新生小鼠神经干细胞(NSCs)分离、培养以及鉴定的方法。方法：分离新生昆明种小鼠(出生24h内)的大脑组织,经胰酶消化加机械吹打后,利用无血清培养基悬浮培养细胞,获得具有自我增殖能力的细胞克隆,并将细胞克隆贴壁培养测其分化能力。应用抗Ncstin、Musashi、SSEA-1、NSE免疫细胞化学方法及BrdU标记方法鉴定细胞克隆。结果：从新生昆明种小鼠大脑组织分离的细胞悬液,经悬浮培养,生成大量具有增殖能力的细胞,可形成神经球(neurosphercs),抗Nestin、Musashi、SSEA-1阳性,BrdU标记也呈阳性。细胞克隆贴壁培养后神经球分化为神经细胞,抗NSE阳性。结论：上述方法分离的细胞具有自我更新、自我复制及分化为神经细胞的能力,属于中枢神经系统干细胞。     

神经干细胞的诱导分化

目的：探讨神经干细胞（NSCs）的诱导分化机制。方法：本文就Nscs的来源、分布、诱导分化的调控机制和因素以及其应用前景作一综述。结果：神经干细胞可从鼠、人的胚胎和成年中枢神经系统（CNS）成功分离并培养，具有自我更新和多分化潜能，经体外诱导或植入体内后均能分化为成熟神经元和神经胶质细胞。结论：神经干细胞的发现和研究的深入为神经发育研究及中枢神经功能重建提供了新的思路。     

人和小鼠神经干细胞的体外培养的分化研究

首次克隆了小鼠神经元标志性微管蛋白βⅢ基因，从核苷酸序列推导出小鼠与人两者之间在其羧基端有相同的EAQGPK六肽，进一步证实用抗人微管蛋白βⅢ单抗可检测小鼠神经干细胞分化成的神经元细胞，免疫组化鉴定显示小鼠神经干细胞在体积分数为1％胎牛血清（FBS）诱导下，可分化成神经元，星形胶质细胞，少突胶质细胞，同时培养了13周龄胎儿脑来源的人类神经干细胞，用特异性的抗人nestin抗体鉴定，全部为阳性细胞，但它们经诱导分化产生较不同寻常的细胞分化细胞和分化程度，在生长因子减半和1％FBS诱导条件下可分化为神经元和星形胶质细胞，而无少突胶质细胞分化，NF单抗检测证实为早期分化的神经元。     

Neural stem cell transplantation in the repair of spinal cord injury

Neural stem cells are a pronising candidate for neural transplantation aimed at neural cell replacement and repair of the damaged host central nervous system (CNS). Recent studies using neural stem cells have shown that implanted neural stem cells can effectively incorporate into the damaged CNS and differentiate into neurons, astrocytes, and oligodendrocytes. The recent explosion in the field of neural stem cell research has provided insight into the inductive factors influencing neural stem cell differentiation and may yield potential therapies for several neurological disorders, including spinal cord injury. In this review, we summarize recent studies involving neural stem cell biology in both rodents and humans. We also discuss unique advantages and possible mechanisms of using neural stem cell trans plantation in the repair of spinal cord injury.     

用于“治疗性克隆”人胚胎干细胞研究面临的问题与可能的解决办法

利用培育的干细胞(SC)来实现组织再生和器官修复对于许多重大疾病如糖尿病、心脏疾病、老年性痴呆(AD)、帕金森病(PD)、神经损伤等的治疗具有重要意义,同时也是新药研发的重要工具.使用体细胞核转移技术(SCNT)克隆人类早期胚胎和提取干细胞,即所谓的"治疗性克隆"(Therapeutic cloning)技术,是目前进行干细胞个性化治疗的重要手段,具有广泛的临床应用前景.通过这种方法获得人胚胎干细胞的研究尚处于基础阶段,仍面临着许多有待解决的科学问题和技术挑战.在此主要就用于"治疗性克隆"人胚胎干细胞的研究进展做了简要综述,着重探讨了在该研究领域面临的主要困难,特别是在获得人成熟卵细胞方面,并提出了可能的解决办法.     

大鼠胎脑神经干细胞的分离和培养

胚龄14．5～16．5d(E14．5～16．5)的大鼠胎脑组织获得大鼠胎脑神经干细胞(rat fetal neural stem cells，rFNSCs)，培养于含有碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)和表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)的无血清培养液DMEM／F12中，用^3[H]胸苷掺入试验检测EGF和bFGF对大鼠胚胎神经干细胞分裂和增殖的影响．BrdU结合反应和nestin免疫组化检测显示培养细胞在早期时代约90％以上具有分裂增殖能力并显示nestln阳性，而且这些细胞在培养过程中可以分化神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞，证明分离培养的是神经干细胞，可用于移植、定向分化和基因转移的研究．     

红景天苷对BMSC生物学特性影响

目的：研究红景天苷对骨髓间充质干细胞（Bonemesenchymalstemcells,BMSCs）生物学活性影响。方法：采用贴壁法分离培养BMSCs,检测细胞表面分子表达对所获干细胞进行鉴定。以终浓度为10¨g／mL红景天苷与BMSCs共培养,通过形态学观察和MTT法分析研究其对BMSCs生物学特性影响。结果：成功培养出BMSCs,免疫荧光染色显示,培养的第3代BMSCs表达CD29、CD44干细胞标志。10μg／mL红景天苷与BMSCs共培养后,较对照组细胞生长更为旺盛,更为规整,形成典型的“鱼群状”。生长曲线显示,实验组细胞较对照组生长稳定,增殖能力活跃。结论：10μg／mL红景天苷可促进BMSCs增殖分化,又不影响细胞增殖分化等生物学特性。