AAPH诱导的氧化应激对小鼠早期胚胎发育的作用及机制研究

哺乳动物胚胎发育是一个受复杂信号通路严格调控的过程,同时受遗传和环境因素等多种因素影响.由体外培养环境破坏活性氧ROS平衡所引起的氧化应激反应被认为是影响体外胚胎发育的重要因素之一,但活性氧影响胚胎的机制仍有待研究.本研究首先观察了叠氮化合物2,2'-偶氮二(2-脒基丙烷)盐酸盐AAPH[2,2-Azobis(2-Amidinopropane)dihydrochloride]处理后对胚胎发育的影响,检测了胚胎的活性氧水平、线粒体膜电位和细胞凋亡情况,同时检测了合子基因组激活相关基因的表达变化,针对活性氧诱导剂AAPH影响小鼠早期胚胎发育的分子机制进行研究.结果表明,AAPH能够提高小鼠胚胎的活性氧水平,影响胚胎发育率,AAPH的作用呈现剂量依赖性,这种影响是通过降低线粒体的膜电位,进而促发细胞凋亡.同时,抑制合子基因组激活相关基因Zscan4d、eIF-1A、Hspa1b、H2afz的表达.本研究探讨了活性氧影响早期胚胎发育过程的机制,为哺乳动物体外受精培养体系的优化提供了依据.     

绵羊β—乳球蛋白基因5′端及上游调控序列的PCR扩增的方法学研究

本对绵羊β-乳球蛋白基因5′端及上游调控序列的PCR扩增的方法扩增进行了研究。经比较分析,将从羊血中提取的绵羊基因组DNA的模板用量定为4μl(0.4μg/μl）,TaqDNA聚合酶用量为0．83μl(3u/μl）,变性为94℃1min,退火为64℃1min72℃延伸2min,循环次数为32次,获得的PCR产物经电泳检测,条带明亮,特异性高,大小为898bp。经序列分析发现,与已知基因组序列一致性达99％以上,可用于指导外源基因在转基因动物乳腺中表达。     

数字电视发射机的技术特点及发展现状

数字电视广播技术发展引发了广播电视系统的一场技术革命。本文在这里浅谈一下数字电视发射机的主要部件、发射特点及发展现状，并介绍了现目前国内数字电视发射机的关键技术。     

电路仿真软件在电子线路中的应用

近年来,电路仿真软件在电子线路中得到了广泛的应用,尤其是PSpice仿真软件、Saber仿真软件等,更是得到了迅速的发展,本文主要研究了电路仿真软件在电子线路中的应用,并且举例PSpice仿真软件的应用状况,探讨了仿真软件在电子线路中的发展。     

优质奶牛种公牛培育及示范应用

本研究首先通过奶牛胚胎定向选配、胚胎移植技术(MOET)、全基因组检测(选择)、后备种公牛精细化饲养管理等技术集成应用,建立良种奶牛种公牛育种技术体系,为生产冷冻精液用于人工授精进行产业化示范,大量繁育良种奶牛后代起到了积极促进作用.试验结果表明,不同月龄的受体青年母牛进行胚胎移植效果比较,移植后的35天进行B超孕检,其中13.5-14、13-13.5、12.5-13月龄的青年受体母牛移植受胎率分别为56.2%、58.6%、45%,都存在显著差异,表明适合的体成熟更有利于受胎率提高.其中6、8、9、10月龄的后备种公牛的平均体重分别为247(kg)、320(kg)、351(kg)、380(kg),较行业标准平均体重高出26(kg)、36(kg)、47(kg)、27(kg);6、8、9、10月龄睾丸周径分别为24(cm)、31(cm)、34(cm)、35(cm),较行业标准平均高出2.3(cm)、4.6(cm)、5.5(cm)、4.6(cm),睾丸周径与精液的产量正相关.24、16和12月龄的后备种公牛的平均采精量分别8.7ml、4.75ml、4ml,原精的密度分别为15.3亿个/ml、16.1亿个/ml、11亿个/ml;原精的活力平均为0.65%以上;畸形率分别为14.3%、15%、17%,符合牛冷冻精液国标的标准.此外,随机使用9头后备种公牛的冷冻普通精液,分布在4个规模化牧场对适配月龄的青年母牛进行了2159头次的人工输精实验,输精后的第35天B超仪进行妊娠诊断,受胎率达到58.9%,后代母犊的比例为47.9%;利用5头后备公牛的性控分离冷冻精液进行了人工输精,青年母牛进行了1493头次输精实验,35天后B超仪进行妊娠诊断,受胎率达到了59.6%,后代母犊的比例为93.8%,两者无显著差异.上述结果表明,不同月龄的受体青年母牛的胚胎移植受胎率存在显著差异,不仅要求性成熟同时必须满足体成熟;精细化的饲养管理和科学合理的日粮构成对后备种公牛的生长发育、体尺体重及未来的产能极其关键;不同月龄段的基因组选择公牛虽然精液的产量有差异,但精液的质量指标没有显著差异,因此,可以实施12月龄进行生产,提升遗传进展.普通精液和性控冷冻精液在适配的青年母牛的情期受胎率没有显著差异,性控冷冻精液的性控准确率达到93.8%.综上结果表明,通过基因组选择可以提升公牛遗传进展,基因组后备公牛的冻精活力与受精能力明显提升,奶牛种公牛的品质得到了明显提高,为培育高产奶牛和提升奶牛养殖经济效益打下了基础.     

大鼠胎脑神经干细胞的分离和培养

胚龄14．5～16．5d(E14．5～16．5)的大鼠胎脑组织获得大鼠胎脑神经干细胞(rat fetal neural stem cells，rFNSCs)，培养于含有碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)和表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)的无血清培养液DMEM／F12中，用^3[H]胸苷掺入试验检测EGF和bFGF对大鼠胚胎神经干细胞分裂和增殖的影响．BrdU结合反应和nestin免疫组化检测显示培养细胞在早期时代约90％以上具有分裂增殖能力并显示nestln阳性，而且这些细胞在培养过程中可以分化神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞，证明分离培养的是神经干细胞，可用于移植、定向分化和基因转移的研究．     

人骨髓单核细胞表面分化抗原CD14基因的扩增、克隆和鉴定

根据人骨髓单核细胞表面分化抗原ＣＤ１４（ｈＣＤ１４）基因的核苷酸序列，设计ｈＣＤ１４基因５＇端和３＇端的两个引物．以人血中提取的基因组总ＤＮＡ为模板，利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术特异性扩增该基因１２４５加的编码序列．扩增产物经Ｘｂａｌ、ＫｐｎⅠ双酶切后，克隆到ｐＵＣ１８质粒ＸｂａＩ－ＫｐｎＩ位点间，随后转化大肠杆菌ＪＭ１０９．用ＰＣＲ方法筛选出重组菌落．经酶切和序列分析方法检测后，证明获得了含ｈＣＤ１４基因的重组克隆ｐＨＣＤ１４．巳测出的插入片段５＇端部分中包含着人ＣＤ１４基因４８８ｂｐ的序列，与巳报道的相应ＤＮＡ序列相比具有９９％的同源性．     

人骨髓单核细胞表面分化抗原CD14基因的扩增,克隆和…

根据人骨髓单核细胞表面分化抗原ＣＤ１４基因的核苷酸序列，设计ｈＣＤ１４基因５＇端和和３＇端的两个引物。以人血中提取的基因组总ＤＮＡ为模板，利用聚合酶链式反应技术特异性扩增该基因１４５ｂｐ的编码序列。     

不同体外培养系统对牛体外受精胚胎冷冻解冻后孵化能力的影响

采用ＳＯＦ和ＴＣＭ１９９与输卵管上皮细胞共同培养系统对牛体外受精卵进行培养,观察了在这两种培养条件下得到的囊胚经冷冻—解冻后的孵化能力．在ＳＯＦ＋输卵管上皮细胞的培养条件下,囊胚的发育率为２１．３％,囊胚经冷冻—解冻后的孵化率为３７．５％;在ＴＣＭ１９９＋输卵管上皮细胞的培养条件下,囊胚的发育率为２６．０％,囊胚经冷冻—解冻后的孵化率为４７．７％．研究结果表明这两种体外培养系统的培养效果无显著差异（Ｐ＞０．０５）．