纹状体神经干细胞的分离培养及其鉴定

胎脑内存在有能分化为神经元和神经胶质细胞的神经干细胞 .在表皮生长因子 (EGF)或碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)存在的条件下 ,从 14d胎鼠纹状体分离培养神经干细胞 ,并通过间接免疫荧光细胞化学法对其鉴定 ,发现大量呈 Nestin抗原阳性的干细胞团的形成 ,EGF和 b FGF对神经干细胞的增殖及分化能产生一定的影响 ,但它们对增殖及分化的影响是有差别的 .     

人胚神经干细胞的体外培养

目的　探讨人胚神经干细胞体外培养的条件和分化情况 ,以摸索出一种切实可行的能获得较纯且多潜能人胚神经干细胞的方法 .方法　采用取 3月龄人胎脑 ,用胰蛋白酶消化法分离单个细胞 ,部分冻存 ,另一部分进行细胞培养 ,加EGF ,bFGF刺激生长 ,有限稀释法获得单细胞克隆 ,血清诱导分化 ,并用免疫组化方法进行鉴定 .结果　EGF和bFGF同时存在于无血清培养基中 ,有大量神经干细胞团生成 ,含血清培养基则诱导神经干细胞分化成为神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞 .结论　神经干细胞的存活和分裂有赖于EGF和bFGF的共同作用 .经冻存后的胎脑细胞同样能分离培养出有活性的神经干细胞 .     

一些神经营养因子对神经干细胞的增殖和分化的影响

胚胎和成年哺乳动物脑内存在能分化为神经元和神经胶质细胞的细胞干细胞,从成年脑和胚脑分离的神经干细胞能在体外分裂并进一步分化成神经元和胶质细胞,许多生长因子,如成纤维细胞生长因子和表皮生长因子等都参与了这一分裂、分化过程。对神经干细胞的增殖及分化产生一定的影响,但在不同的情况下,它们对增殖及分化的作用不同。     

新生大鼠海马神经干细胞的体外培养及鉴定

目的 探讨新生大鼠海马神经干细胞(NSC)的体外培养和诱导分化的条件和特点.方法 分离出生1d大鼠海马,在表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和B27,联合作用下使其稳定增殖,用5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记处于增殖状态的神经干细胞,应用免疫荧光染色方法 行巢蛋白(Nestin)、5-溴脱氧尿苷(BrdU)、β-Ⅲ型微管蛋白(Tuj-1)、波形蛋白(Vimentin)和Galc-C免疫荧光染色,对NSC的增殖及其分化的细胞进行鉴定.结果 体外培养的NSC增殖成神经干细胞球并传代.鉴定为Nestin染色阳性细胞和5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记染色阳性细胞,并可诱导分化为神经元细胞(Tuj-1染色阳性细胞)、神经胶质细胞(Vimentin染色阳性细胞)和少突胶质细胞(Calc-C染色阳性细胞).结论 采用无血清培养基中加入特定生长因子的培养技术,可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的新生大鼠海马神经干细胞.     

新生大鼠海马神经干细胞的体外培养及鉴定

的探讨新生大鼠海马神经干细胞（NSC）的体外培养和诱导分化的条件和特点。方法分离出生1d大鼠海马,在表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和B27联合作用下使其稳定增殖,用5-溴脱氧尿苷（BMU）标记处于增殖状态的神经干细胞,应用免疫荧光染色方法行巢蛋白（Nestin）、5-溴脱氧尿苷（BrdU）、β-Ⅲ型微管蛋白（Tuj-1）、波形蛋白（Vimenfin）和Galc-C免疫荧光染色,对NSC的增殖及其分化的细胞进行鉴定。结果体外培养的NSC增殖成神经干细胞球并传代,鉴定为Nestin染色阳性细胞和5-溴脱氧尿苷（BrdU）标记染色阳性细胞,并可诱导分化为神经元细胞（Tuj-1染色阳性细胞）、神经胶质细胞（Vimentin染色阳性细胞）和少突胶质细胞（GMc-C染色阳性细胞）。结论采用无血清培养基中加入特定生长因子的培养技术,可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的新生大鼠海马神经干细胞。     

胚胎大鼠室下带神经干细胞分离、培养与鉴定

自从1992年Reynolds和Weiss首先报道在成年小鼠纹状体中分离培养出能在体外不断增殖、具有多种分化潜能的细胞群以来,神经干细胞(neural stem cells,NSCs)诱人的应用前景激发了许多科学家的兴趣．近来的研究进一步证实,胚胎和成年哺乳动物的神经组织和人脑中可以分离出神经干细胞,在体外培养时可被生长因子诱导而增殖,并具有分化成神经元和胶质细胞的潜能．本研究采用无血清培养技术,从孕14d胚胎大鼠前脑室下带(SVZ)中成功分离培养出神经干细胞,经增殖获得大量的克隆球团,用nes-     

神经生长因子对神经干细胞向少突胶质细胞分化的诱导作用研究

目的体外分离和培养大鼠海马神经前体细胞,在此基础上探索在体外环境下使神经干细胞定向分化为少突胶质细胞,为后续的神经干细胞移植提供实验基础.方法取孕10 d的Wistar大鼠胚胎脑的海马,分离神经前体细胞,将单克隆的神经干细胞球贴壁,并使用生长因子(NGF),分析不同浓度的NGF对神经干细胞分化的影响.在含NGF的NSC培养基中进行体外培养,以GalC免疫组化标记分化后的少突胶质细胞,对神经干细胞的分化特性进行鉴定.结果NGF可促进神经前体细胞的增殖及神经球的克隆形成,并获得了Nestin阳性的神经前体细胞,其可分化为分别表达GaIC的阳性细胞.结论体外分离和培养的大鼠海马神经前体细胞,在NGF生长因子的作用下,神经干细胞可定向分化为少突胶质细胞,并与培养基中NGF的浓度有一定的关系,有望应用于脱髓鞘神经系统疾病的细胞移植治疗.     

人和小鼠神经干细胞的体外培养的分化研究

首次克隆了小鼠神经元标志性微管蛋白βⅢ基因，从核苷酸序列推导出小鼠与人两者之间在其羧基端有相同的EAQGPK六肽，进一步证实用抗人微管蛋白βⅢ单抗可检测小鼠神经干细胞分化成的神经元细胞，免疫组化鉴定显示小鼠神经干细胞在体积分数为1％胎牛血清（FBS）诱导下，可分化成神经元，星形胶质细胞，少突胶质细胞，同时培养了13周龄胎儿脑来源的人类神经干细胞，用特异性的抗人nestin抗体鉴定，全部为阳性细胞，但它们经诱导分化产生较不同寻常的细胞分化细胞和分化程度，在生长因子减半和1％FBS诱导条件下可分化为神经元和星形胶质细胞，而无少突胶质细胞分化，NF单抗检测证实为早期分化的神经元。     

ICR小鼠胚胎NSCs体外培养和诱导分化

利用表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）的联合促进作用使原代胚胎皮层神经干细胞（Neural Stem Cells,NSCs）稳定增殖,以此来分离培养ICR小鼠胚胎NSCs,并在体外高效诱导成神经元。通过诱导分化的对照实验获得神经元分化比例最高的方法。免疫细胞化学不仅证实了培养的NSCs可表达Nest...     

人胚胎脑神经干细胞分离纯化及体外培养的研究

为了探讨人胚神经干细胞体外培养条件下的生物学特性,为其应用于临床治疗奠定基础.取胎龄16周的人流产胚胎,胰酶消化结合机械法分离成单细胞悬液,以2×106个细胞/mL接种到含hEGF和h-bFGF的DMEM/F12、N2培养基进行体外培养;观察细胞生长情况,用10% FBS诱导神经干细胞球分化,免疫细胞化学鉴定. 结果显示从人胚大脑分离出的细胞经悬浮培养可以形成细胞球,表达Nestin蛋白.经诱导分化后具有表达神经元,神经胶质细胞的特异性抗原. 说明人胚神经干细胞在体外可以稳定生长,并能分化成为神经原及胶质细胞.     

Neurobasal~(TM)-A和DMEM/F12培养液对大鼠胎儿神经干细胞生长的影响

用带有 3 [H]的胸苷对分裂细胞进行标记 ,通过细胞计数仪测定细胞数量的方法 ,对比了大鼠胎儿神经干细胞在添加相同成分的 Neurobasal TM-A和 DMEM/F1 2培养液中的生长情况 .结果表明 Neurobasal TM-A在有 EGF和 b FGF存在的情况下更适合于神经干细胞的生长和存活     

Inducing dopaminergic differentiation of expanded rat mesencephalic neural stem cells by ascorbic acid in vitro

Ascorbic acid (AA) induced differentiation of neural stem cells (NSCs) into dopaminergic (DAergic) neurons is reported.NSCs derived from rat mesencephalon were maintained and expanded in a defined medium containing mitogens of basic fibroblast growth factor (bFGF) and epidermal growth factor (EGF).Compared with the control, ascorbic acid treatment led to more DAergic neuronal differentiation as indicated by the expression of tyrosine hydroxylase (TH) and dopamine transporter (DAT), which are specific markers of dopamine neurons.AA induction also enhanced expression of Nurr1 and Shh.PD98059, an inhibitor of mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase (MAPK/ERK) pathway, could block AA-induced Nurr1, TH and DAT mRNA expression.The results might suggest a new strategy to provide enough dopaminergic cells for the therapy of Parkinson's disease (PD), and Nurr1 and ERK signaling pathway might participate in the AA-induced DAergic differentiation.     

表皮生长因子对猕猴胚胎角膜上皮组织增殖效应的研究

离体培养试验表明，小鼠颌下腺表此生长因子对离体培养猕猴胚胎眼角膜上皮组织具有显著促进细胞增殖和分化的效应。培养４ｄ的实验组角膜上皮的厚度，上皮细胞增殖层烽以及上皮组织中基底层细胞核与表层细胞核两者的比率均较正常猴胚角膜增长３倍。与此同时培养４ｄ的实验组角膜上皮厚度和上皮细胞的层数，都达到成年猴正常角膜上皮的结构水平。     

Mouse prepro-epidermal growth factor synthesis by the kidney and other tissues

Epidermal growth factor (EGF), a protein comprising 53 amino acids, is derived from a precursor of 1,217 amino acids that includes at least seven EGF-like sequences. EGF has diverse biological activities: it is a potent mitogen for many tissue culture cells, inhibits gastric acid secretion from the intestinal mucosa and promotes healing of the corneal epithelium. EGF given to fetal animals accelerates several developmental processes including palate formation, incisor eruption, eyelid opening and lung maturation. However, the physiological roles of EGF in vivo are unknown. The presence of high-affinity receptors in many fetal and adult tissues suggests that EGF is involved in normal cellular functions. Immunocytochemical studies have revealed the presence of EGF in mouse and human submaxillary glands, rat brain and human intestine. The low levels of EGF in extracts from many tissues may reflect sequestration rather than synthesis of the polypeptide. We show here that several mouse tissues contain preproEGF mRNA and that it is synthesized mainly in the distal tubules of the kidney. PreproEGF does not seem to be processed to EGF or other peptides in this tissue.     

蜣螂醇提物抗良性前列腺增生研究

比较蜣螂不同浓度醇提物抗良性前列腺增生的作用,并探讨相关机制,为蜣螂的开发利用奠定基础。采用皮下注射丙酸睾酮制造大鼠良性前列腺增生模型,以前列腺湿重、前列腺指数、血清酸性磷酸酶质量浓度（ρ_PAP）、雌二醇质量浓度（ρ_E2）、双氢睾酮浓度（DHT）(c_DHT)、睾酮质量浓度（ρ_T）、表皮细胞生长因子（EGF）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及胰岛素样生长因子-1（IGF-1）为指标,考察蜣螂醇提物对良性前列腺增生的影响。结果表明良性前列腺模型造模成功,与模型组相比,85%乙醇提取物组能明显降低大鼠前列腺湿重与前列腺指数,明显降低ρ_PAP,ρ_E2,c_DHT及ρ_T水平,明显降低EGF,bFGF及IGF-1的表达,提高TGF-β1的表达,可显著降低前列腺体密度,显著增加比表面及比膜面值。蜣螂85%乙醇提物具有良好的抗良性前列腺增生的作用,其机制与调节EGF,TGF-β1,bFGF及IGF-1的表达有关。     

蜣螂醇提物抗良性前列腺增生研究

比较蜣螂不同浓度醇提物抗良性前列腺增生的作用,并探讨相关机制,为蜣螂的开发利用奠定基础。采用皮下注射丙酸睾酮制造大鼠良性前列腺增生模型,以前列腺湿重、前列腺指数、血清酸性磷酸酶质量浓度（ρ_PAP）、雌二醇质量浓度（ρ_E2）、双氢睾酮浓度（DHT）(c_DHT)、睾酮质量浓度（ρ_T）、表皮细胞生长因子（EGF）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及胰岛素样生长因子-1（IGF-1）为指标,考察蜣螂醇提物对良性前列腺增生的影响。结果表明良性前列腺模型造模成功,与模型组相比,85%乙醇提取物组能明显降低大鼠前列腺湿重与前列腺指数,明显降低ρ_PAP,ρ_E2,c_DHT及ρ_T水平,明显降低EGF,bFGF及IGF-1的表达,提高TGF-β1的表达,可显著降低前列腺体密度,显著增加比表面及比膜面值。蜣螂85%乙醇提物具有良好的抗良性前列腺增生的作用,其机制与调节EGF,TGF-β1,bFGF及IGF-1的表达有关。