哺乳动物细胞姐妹染色单体互换检测化学物质的潜在致癌性(初报)

检测化学物质潜在致癌性有多种比较灵敏的方法,其中有Ames法和哺乳动物细胞姐妹染色单体互换(SCE)法。我们用鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体检测系统鉴定为阳性的亚硝基胍(NTG)和阴性的焦亚硫酸钠,诱发中国仓鼠细胞姐妹染色单体互换,并以此为指标,鉴定其潜在致癌性。离体培养的中国仓鼠成纤维细胞株,同待检物质和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)混合培养24小时,BrdU最终浓度为每毫升培液15微克。细胞用0.075M KCl低渗处理,甲醇:冰醋酸(3:1)固定,制片。然后,基本按Korenberg等的方法处理,吉     

遗传病·肿瘤·有害物质快速检测

目前,人们接触到的化学物质大体上有三大类。一类是自然界中的天然产物,如生物体的各种代谢产物等,一类是人工合成的产品,如药物、杀虫剂、工业原料、化学试剂等;再一类是生产过程中排出的废水,废气、废渣中所含的化学物质。这些种类日益繁多的化学物质通过呼吸、饮食和体表接触等途径摄入人体。其中大部份可能对人体是无害的。但也有一些     

用沙门氏菌/微粒体系统对36种化学物质潜在致癌性的检测试验(初报)

近年来,Ames 等人用鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的组氨酸营养缺陷型突变株建立了化学致癌物的检测系统。由于化学物质对细菌的诱变作用,同其对哺     

GFP标记的GDNF重组腺病毒载体的构建和体内外表达

通过构建绿色荧光蛋白(GFP)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)共表达的腺病毒载体,讨论其在治疗脊髓和脑有关神经系统疾病的潜在应用价值,了解腺病毒载体在大鼠体内的分布及在体外分泌外源基因产物能力,并对其生物安全性作了初步考察,为GDNF重组腺病毒载体在临床和基础研究中的应用作了一定准备．     

TNFα基因在小鼠成纤维细胞L929中的调控研究

质粒pEGFP-1是一种不含启动子序列的哺乳动物细胞表达载体，将系列缺失的TNFα基因启动子5‘UTR（untranslated region）和3‘UTR插入pEGFP-1中，构建了一组重组质粒，转染L929细胞后，发现当报告基因EGFP的上游含有包括5‘UTR在内的TNFα基因启动子序列时，重组质粒在L929细胞中均能表达EGFP，但是，当EGFP基因3‘端同时含有TNFα基因的3‘UTR时，重组质粒转染L929细胞后，均不能表达EGFP，因此，在L929细胞中，TNFα基因的3‘UTR对基因表达具有抑制作用，进一步研究发现，在L929细胞中，TNFα基因的3‘UTR对基因表达的抑制作用需要其5‘UTR的共同参与，而且，RT－PCR实验表明，LPS在其他细胞中对TNFα基因起诱导作用的机制在L929细胞中不存在。     

mRNA二级结构对重组人白血病抑制因子(rhLIF)在大肠杆菌中表达的影响

真细菌中翻译起始效率通常是由翻译起始位点两侧的ｍ ＲＮＡ 区域二级结构的稳定性决定的．这种稳定性与该区域ＲＮＡ 二级结构的发生自由能（ΔＧ０ ）相对应．重组人白血病抑制因子（ｒｈＬＩＦ）为具有诱导白血病细胞分化、调节骨组织的生长代谢、维持胚胎干细胞的基本特征、促进神经元的分化等广泛生物学活性的细胞因子．为了获得高表达的ＬＩＦ蛋白,通过翻译起始区的位点专一突变,把具有优选密码子和能量优势的ｌｉｆ 片段克隆入ｐＪＬＡ５０３ 载体,然后转化至大肠杆菌中表达,得到表达量提高１０ 倍的重组ＬＩＦ蛋白     

用酵母双杂合系统筛选与人血小板生成素受体c-Mpl相互作用的蛋白质的初报

血小板生成素（ｔｈｒｏｍ ｂｏｐｏｉｅｔｉｎ, ＴＰＯ）是调节血小板生成最主要的细胞因子,其生物学效应由其受体ｃ－Ｍｐｌ介导．利用酵母双杂合系统（ｔｗ ｏ－ｈｙｂｒｉｄ ｓｙｓｔｅｍ ）筛选与ｃ－Ｍｐｌ相互作用的蛋白质因子,以Ｇａｌ４ ＢＤ融合ｃ－Ｍｐｌ膜内部分ｃＤＮＡ 的ｐＡＳＭＭ 为靶蛋白质粒,筛选了人胎盘ｃＤＮＡ 文库,分离到人波形纤维蛋白（ｖｉｍ ｅｎｔｉｎ）的部分编码序列,首次检测到波形纤维蛋白与ＴＰＯ 受体之间的相互作用,这提示细胞骨架蛋白可能在ＴＰＯ 的信号转导过程中起着重要的作用     

小鼠BRI3基因的克隆及其诱导细胞死亡的作用

为了阐明TNFα作用的分子机制，用抑制消减杂交（SSH）技术和反转录PCR（RT-PCR),从hTNFα处理过的小鼠脑血管内皮细胞（bEnd．3）总RNA中扩增并克隆BRI3的cDNA，构建了BRI3基因与绿色荧光蛋白（EGFP）基因融合的表达载体pEGFP/I3，转染L929细胞后，发现EGFP／I3融合蛋白位于细胞质里，通过TUNEL法检测或流式细胞仪分析初步表明，该融合蛋白在L929细胞中的表达能够导致细胞死亡，而且这种细胞死亡能被L929细胞中表达的Bcl－2蛋白所抑制，提示BRI3基因的功能可能与TNFα的细胞毒作用有一定的相关性。     

血影细胞的制备和装载试验

血影细胞(ghost cell)可装载遗传物质、酶、抗体等,通过类似细胞融合的过程,把所含物质“注入”受体细胞,是遗传学、细胞学、医学研究中的一种有用的载体。本文报道用人体红细胞制备血影细胞,以及装载荧光素标记的牛血清白蛋白和噬菌体的试验。人体静脉血2毫升加6毫升rPBS(KCl 137mM、NaCl 2.7mM、Na_2HPO_4 8.1mM、KH_2PO_41.5mM)2000rpm离心5分钟,弃去上清液,再加7—8毫升rPBS,2000rpm离心5分钟,如此     

神经干细胞的体外培养和外源基因在其中的表达

神经干细胞（ｎｅｕｒａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ,ＮＳＣｓ）是中枢神经系统中保持分裂和分化潜能的细胞,在研究神经系统的发育,分化以及治疗神经系统疾病中具有重要的作用,神经干细胞的移植已成为人们探索治疗神经系统疾病的新途径,成功地在体外对神经干细胞进行了分离和培养,并对其在胎鼠脑中的分布进行了鉴定,还证明带有ＧＦＰ（ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）报告基因的腺病毒感染神经干细胞后