His-猪生长激素融合基因在Bm-N细胞和蚕体内的表达与纯化

用构建的带有His—Tag pgh融合基因的重组杆状病毒Bm—BacPAK6—pgh研究了Bm—BacPAK6—pgh在家蚕细胞(Bm—N)和蚕体内的表达，并对蚕体表达产物进行了纯化．SDS—PAGE电泳分析显示，重组病毒Bin—BacPAK6—pgh在Bin—N细胞、蚕体中得到了融合表达，Western blot分析表明，Bm—N细胞、蚕体中表达的融合蛋白与大肠杆菌表达的猪生长激素具有相同的抗原性．Bm-BacPAK6-pgh在Bin—N细胞内的表达始于24h，而蚕体中的表达始于72h，二者的表达峰分别在96h和120h．经40％饱和度硫酸铵盐析和Ni—NTA Agarose亲和柱二步纯化可获得SDS—PA(正电泳纯的具有抗原性的重组猪生长激素融合蛋白。     

鲢鱼（Aristichthys nobilis）鱼精蛋白的纯化和鉴定

采用Sephadex G-50凝胶层析、GM-Sepharose CL 6B离子交换层析及反相高压液相色谱等步骤从鲢鱼鱼精蛋白的粗品中分离得到一种具有抗菌活性的蛋白质。经SDS－PAGE及生物质谱鉴定,该蛋白质为单一组份,分子量为13331.9.Da。该蛋白分子中碱性氨基酸总量为33．4％,N－末端序列为NH2－Pro-Gln-Arg-His-Lys。     

适用于小麦叶片总蛋白分析的双向电泳技术

双向电泳技术越来越成为植物蛋白质组研究中的关键技术,样品制备、固相预制胶条水化、等电聚焦及SDS—PAGE都是影响双向电泳结果的重要步骤,本研究以晋麦47号小麦叶片为研究材料,在样品除盐、预制胶条水化方式、第二向SDS—PAGE电压选择方面进行了探索与优化,通过比较双向电泳图谱,建立适用于小麦叶片总蛋白质分析的双向电泳技术体系．结果表明：样品经多步除盐并加长除盐时间后进行双向电泳,蛋白能较好地被分离,2-DE图谱蛋白点较多,分辨率较高;IPG胶条先后经被动水化与主动水化比仅主动水化的2-DE图谱蛋白点损失少;第二向SDS—PAGE中电压选择120V较200V的2．DE图谱蛋白点拖尾少,纹理现象少．     

家蚕血淋巴蛋白的发育变化的BmLSP的纯化

对1－5龄的家蚕幼虫血淋巴取样,通过十二烷基硫酸钠－聚丙酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）观察并分析蚕幼虫血淋巴主要蛋白的发育变化,对其中的一种主要蛋白即家蚕幼虫血清蛋白,通过流酸铵沉淀,阳离子交换柱层析,凝胶过滤纯化至均一。     

扩展青霉碱性脂肪酶的纯化及N-端氨基酸序列分析

扩展青霉PF898的发酵液经硫酸铵沉淀、DE52纤维素离子交换柱、Sephadex G100凝胶过滤等步骤，其碱性脂肪酶的活性被纯化了79．3倍，回收率约15％，此活为76．9U／mg。纯化蛋白经SDS－PAGE和HPLC TSK－GEL G3000SW凝胶过滤分析显示其分子量约为28kDa。纯化蛋白经氨基酸序列测定仪分析表明，其N－端12个氨基酸的序列为：A－T－A－D－A－A－A－F－P－D－L－H。     

猪口蹄病毒VP1活性肽融合蛋自的纯化

在猪口蹄疫病毒（FMDV）活性肽VP1融合蛋白基因工程菌E．coliC500构建成功的基础上,确定了融合蛋白的分子质量约为71．0ku．对于融合蛋白的提纯,确定了超声波破壁,尿素分级纯化,葡聚糖G－100柱层析,DEAE纤维素DE－52柱层析的方法,将目的蛋白提纯了6．75倍,SDS－PAGE呈一条带．并比较了融合蛋白的半乳糖苷酶反应（ONPG）和酶的温度敏感性等性质的变化．     

大豆（G.max）胰蛋白酶抑制剂SBTi—A2新类型Ti^x的纯化及其…

用丙酮脱脂、稀酸处理、硫酸铵盐析和ＤＥＡＥ－５２纤维素柱层析等方法从大豆中分离纯化得一种新类型胰蛋白酶抑制剂Ｔｉ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示Ｔｉ＾ｘ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示Ｔｉ＾ｘ与已知的大豆蛋白酶抑制剂Ｔｉ＾ａ的相分对分子质量均为２１０００，且Ｎ－末端均为Ａｓｐ；亲和电泳分析显示Ｔｉ＾ｘ与Ｔｉ＾ａ；两者经ＣＮＢｒ裂解后电泳分析得到相同带型；纯化样品的氨基酸组成分析显示Ｔｉ＾ｘ比Ｔｉ＾ａ多了两个碱     

水溶性海参皂苷的分离纯化及其抗真菌活性研究

从冻干仿刺参加工废弃液中分离纯化出水溶性海参皂苷，筛选并纯化出其强抗真菌活性组分，为利用水溶性海参皂苷研制高效抗真菌药物创造条件. 先后利用大孔树脂柱层析和硅胶柱层析对水溶性海参皂苷进行了纯化，并对各种纯化组分的抗真菌活性进行了测定. 在30%，50%，70%，80%，95%乙醇溶液的大孔树脂柱层析洗脱组分中，70%乙醇溶液洗脱组分对裂殖酵母菌和白色念珠菌的抗真菌活性最强. 70%乙醇溶液洗脱组分经硅胶柱层析进一步纯化后，得到了SC-1、SC-2、SC-3和SC-4四种纯化样品，除SC-1无抗真菌活性外，其它3种纯化样品对裂殖酵母菌和白色念珠菌均具有显著的抗真菌活性，且组分SC-2和SC-3的抗真菌活性高于SC-4. SC-2纯化样品在高压液相柱层析（HPLC）图谱中仅显示为单一洗脱峰，且在旋转蒸发后可形成结晶，表明其纯度极高，可用于高效抗真菌药物的研制.     

限制性核酸内切酶Bsp63I的部分性质研究及与其同工酶的比较

纯化至电脉均一纯的限制性核酸内切酶Bsp63I经SephadexG-200测得相对分子质量约为113800,SDS－聚丙烯酰凝胶电泳测得其亚基相对分子质量约为56800,用DNS法测得该酶N－末端氨基酸为丙氨酸,表明该酶由2个相同的亚基组成,还对Bsp63I和它的同工酶PstI和Bsp78I之性质进行了比较。     

扩展青霉脂肪酶的纯化及氨基酸序列测定

扩展青霉 (Pen .expansum)WMC2 0 718所产碱性脂肪酶经离心分离、硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子交换层析以及凝胶过滤等步骤 ,其酶纯化了 18.5倍 ,获得了比活性为 4 2 0 0U mg的纯碱性脂肪酶 ,提取得率 4 8.8%。纯化后的脂肪酶经过SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和高效反相色谱 (RP HPLC)检测 ,分别达到了SDS PAGE电泳纯和RP HPLC色谱纯。经SDS PAGE和SephadexG 15 0凝胶过滤色谱 ,分别测得酶的相对分子质量为 2 75 0 0和 2 82 0 0 ,表明该酶以单体形式存在。N末端 2 0个氨基酸残基序列测定的结果为ATADAAAFPDLHRAAKLSSA。该酶的最适作用温度为 30℃ ,在 35℃以下稳定 ,4 5℃处理 30min仅残留 30 %酶活性 ;pH稳定范围在 6 .5～ 10 .5之间 ,最适pH值为 10 .0。阴离子表面活性剂LAS对该酶活性的影响较大 ,而非离子表面活性剂AEO9对酶活性无影响。洗涤剂蛋白酶在规定的添加量范围内 ,对脂肪酶的活性影响较小。     

用柱层析技术纯化孕血清中的早孕因子（EPF）

采用ＤＥＡＥ，Ｓ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦ·Ｆ离子交换层析，ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，ＨｅｐａｒｉｎＳｅｇｈａｒｏｓｅ亲和层析，从１１０例妊娠３～８周早孕妇女混合静脉血清中提取，纯化早孕因子（ＥＰＦ）。以玖瑰花结抑制试验（Ｅａ－ＲＩＴ）检测孕血清及各阶段提取物的ＥＰＦ活性，盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其纯度．结果表明提取，纯化的ＥＰＦ达电泳纯，在国内尚未见报导。     

大豆胰蛋白酶抑制剂的制备与性质测定

用DEAE-纤维素柱层析分级洗脱,从大豆中分离出三种胰蛋白酶抑制剂。以BAEE作底物,测得三种组份对胰蛋白酶的抑制程度为16.6％、25.0％和100％。三种抑制剂的分子量分别为20000、21000和12000,等电点是pH3.4、pH2.7和pH4.5。     

药材甲热激蛋白基因SpHsp60的克隆及温度胁迫下的表达

本研究采用RT-PCR技术克隆了药材甲热激蛋白60(Heat shock protein 60,Hsp60)基因的cDNA全长序列,命名为SpHsp60(GenBank登录号:KX778623).氨基酸序列分析表明SpHsp60具有Hsp60基因家族高度保守的基序,实时定量PCR技术检测了不同温度胁迫后该基因的表达量,结果表明:-5℃和0℃低温处理2h,药材甲成虫体内的SpHsp60的表达量均显著高于对照组,且42℃高温处理2h后的表达量也显著高于对照组.说明SpHSP60与药材甲应对极端温度胁迫相关.     

植物激活蛋白的分离、纯化及等电点的的测定

文章主要介绍首次从真菌中提取的植物激活蛋白是一种高效、多功能、广谱性、能诱导植物对病虫害产生免疫抗性的新型植物诱导物质，通过分离纯化该蛋白，可以为下一步的活性检测，序列测定及基因克隆打下良好的基础。     

2,2-二苯基六甲基三硅烷脱苯基机理的研究

２,２－ 二苯基六甲基三硅烷在三氯化铝的催化下,向反应体系中通入干燥的氯化氢时不是一步生成了２,２－二氯六甲基三硅烷,而是先生成了２－氯－２－苯基六甲基三硅烷,然后再转化得到预期的产物． 通过用制备色谱获得了中间产物以及气相色谱跟踪反应,较详细地观察了反应物转化的过程．     

人小肠癌腹水转移细胞的无血清建系培养

人小肠癌腹水转移细胞系ＨＩＣ的无血清培养亚系经过３ａ的传代培养建立成功，命名为ＨＩＣＳＦ。该细胞仍保留其母系ＨＩＣ一些属性：亚三倍体组型，众数５３条；增殖活跃，倍增时间１６ｈ；异体动物移植致瘤，具有活跃的血管生成行为和较高的转移行为。由于培养条件的变化，该细胞也获得了一些新的特征，ＨＩＣＳＦ细胞属弱贴附细胞，形态多变。贴附细胞主要靠树枝状突起贴附于培养介质，突起内微管、微丝相对较多，细胞骨架总体上呈无序排列。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明ＨＩＣＳＦ细胞分泌多种蛋白质进入培养上清中，培养上清的层析分离表明，至少存在分子质量分别为９０，７０，４５和１０ｋｕ４种促生长活性因子，同时也存在分子质量分别为６０和３０ｋｕ２种生长抑制活性因子。这些生长因子共同调控着ＨＩＣＳＦ细胞的自主生长。     

中华眼镜蛇毒神经生长因子的研究

采用ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ和ＳｅｐｈｏｓｉｌＣ８以及ＨＰＬＣ层析方法，自广西产中华眼镜蛇毒中分离纯化神经生长因子（ＮＧＦ），此ＮＧＦ经８ｄ鸡胚背根神经节体外培养证明具有促进神经纤维生长的活性。经ＨＰＬＣ及聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一组成，经ＳＤＳＰＡＧＥ及ＨＰＬＣ测定分子量分别为２４．１ＫＤ和２４．９ＫＤ，等电聚焦电泳测得ｐＩ为８．２，氨基酸组分分析表明ＮＧＦ含酸性氨基酸较少，通过１２５｜标记ＮＧＦ测定出ＮＧＦ在生物体内主要分布于肾、肺、及周围神经     

自制核心链霉亲和素的性质

在实验室分离和纯化链霉亲和素的基础上对其性质进行了鉴定．在SDS-PAGE中链霉亲和素只有一条带，单体的分子量为14500Da，链霉亲和素的相对分子量约为58000Da；其等电点为5．9～6．2；结合生物素的活性为15．7U／mg．结果表明自制链霉亲和素为核心链霉亲和素，在纯度、活性等方面达到了理想的效果．     

辣椒超氧化物歧化酶(SOD)的提纯和性质研究

本试验采用硫酸铵沉淀和柱层析法从辣椒提取纯化出Cu,Zn-SOD,并对其性质作了一些研究。每公斤辣椒制得168.96毫克SOD,纯度328.64μ/mg.