CDK4/6抑制剂耐药乳腺癌处理策略及其机制研究进展

概述了CDK4/6抑制剂耐药乳腺癌的治疗策略，分析了CDK4/6抑制剂跨线治疗、新型口服SERDs药物、PI3K/AKT/mTOR抑制剂、ADC类药物、AURKA抑制剂、HDAC抑制剂、免疫治疗和抗衰老药物在CDK4/6抑制剂进展后的临床研究结果及其相关机制。展望未来，可开展更多临床研究的潜在靶点。     

G1期细胞周期相关蛋白对POLD1基因启动子活性的调控

POLD1基因编码DNA聚合酶δ的催化亚基.然而作为最重要的复制蛋白,目前并不清楚其表达的细胞周期调控机制.研究中运用细胞周期同步化及荧光素酶报告基因测定了POLD1启动子在细胞周期不同时相的活性,结果显示启动子活性随着细胞周期进程而变化,在早S期最高.为进一步确定调控POLD1表达的细胞周期相关因子,应用不同质粒转染MCF7细胞,分别筛选得到稳定细胞系.荧光素酶实验表明增强p53或p21的表达,抑制CyclinE或CDK2的表达都能抑制POLD1启动子活性;而抑制CDK4或Cyclin D1的表达对启动子活性没有明显影响.瞬时共转染实验进一步验证Cyclin E或CDK2受到抑制后能够降低POLD1启动子活性.研究初步探讨了POLD1基因表达的细胞周期调控通路,进一步了解细胞周期因子对DNA复制体调控的复杂机制.     

环境中有机磷酸酯阻燃剂(TDCP、TECP和TCPP)对人胚肾细胞(HEK 293)的影响（英文）

水环境中的微污染物有机磷酸酯如三(2-氯乙基)磷酸酯(TCEP)、三(2-氯-异丙基)磷酸酯(TCPP)和三(1,3-二氯丙基)磷酸酯(TDCP)主要用作聚氨酯泡沫塑料的阻燃剂。物理、化学和生物处理很难完全消除这些污染物。研究阻燃剂在环境水平和较高浓度下对人细胞系的细胞毒性和细胞周期效应。结果表明,在浓度为0. 001 mg/L和0. 01 mg/L时,只有TDCP具有轻微的细胞毒性,而当这三种化学物质浓度100 mg/L以上时对细胞毒性有显著的诱导作用。TCEP和TCPP的EC50分别为276. 8 mg/L和58. 4 mg/L。三种药物均能抑制CDK 4的表达,TDCP能增加CDK 2和cyclin E的表达,而TCEP和TCPP在CDK 2和cyclin E的表达上表现出自差现象。TDCP和TCEP使细胞数量减少,细胞形态发生改变。可见三种化学物质对HEK 293细胞的杀伤作用可能是通过抑制CDK 4调节蛋白而产生的。     

去甲基化酶JMJD6调控雌激素受体依赖的增强子和编码基因转录激活的分子机制

正乳腺癌中大约2/3为雌激素受体阳性,其发生发展的主要原因之一是由于雌激素水平紊乱导致细胞内雌激素/雌激素受体介导的基因转录异常激活~([1]).对于这类乳腺癌的常见治疗方式为内分泌治疗,但耐药和肿瘤复发是临床上亟待解决的问题.因此,寻找这类乳腺癌新的药物治疗靶点,并对其作用机制进行研究具有重要的意义.已有研究表明,在雌激素受体阳性的乳腺癌细胞中,雌激     

环境中有机磷酸酯阻燃剂（TDCP、TECP、TCPP）对人胚肾细胞（HEK293）的影响(英)

水环境中的微污染物有机磷酸酯如三(2-氯乙基)磷酸酯(TCEP)、三(2-氯-异丙基)磷酸酯(TCPP)和三(1,3-二氯丙基)磷酸酯(TDCP)主要用作聚氨酯泡沫塑料的阻燃剂。物理、化学和生物处理很难完全消除这些污染物。本研究的目的是研究阻燃剂在环境水平和较高浓度下对人细胞系的细胞毒性和细胞周期效应。结果表明,在浓度为0.001 mg/L和0.01mg/L时,只有TDCP具有轻微的细胞毒性,而当这三种化学物质浓度100 mg/L以上时对细胞毒性有显著的诱导作用。TCEP和TCPP的EC50分别为276.8 mg/L和58.4mg/L。三种药物均能抑制CDK 4的表达,TDCP能增加CDK 2和cyclin E的表达,而TCEP和TCPP在CDK 2和cyclin E的表达上表现出自差现象。TDCP和TCEP使细胞数量减少,细胞形态发生改变。可见三种化学物质对HEK 293细胞的杀伤作用可能是通过抑制CDK 4调节蛋白而产生的。     

Hiwi基因在耐药MCF-7/ADM乳腺癌细胞株中的表达

目的探讨Hiwi基因在耐阿霉素人乳腺癌MCF-7/ADM细胞和非耐药MCF-7细胞的表达.方法应用实时定量PCR与Western blot技术进行Hiwi基因在耐阿霉素人乳腺癌MCF-7/ADM细胞和非耐药MCF-7细胞株表达水平检测.结果 Hiwi基因在耐阿霉素人乳腺癌MCF-7/ADM细胞中的表达明显高于正常乳腺细胞(P0.01)及非耐药MCF-7细胞(P0.05).结论 Hiwi基因在耐阿霉素人乳腺癌MCF-7/ADM细胞株的高表达为耐药乳腺癌细胞的靶向治疗指出新的研究方向,对乳腺癌治疗预后评估具有临床指导性.     

生物素修饰的Fe3O4纳米粒子作为抗癌药物载体的应用研究

本文将生物素(Biotin)修饰于Fe₃O₄磁性纳米粒子表面制备了BIO-MNPs纳米材料。盐酸阿霉素(DOX)可以通过与生物素之间的氢键作用和自聚集作用负载于BIO-MNPs表面，实验条件下的最大负载量可达823.6 mg/g，且BIO-MNPs@DOX对DOX的释放在弱酸性环境下更优。体外溶血实验以及细胞毒性实验证明BIO-MNPs具有良好的血液相容性和较低的生物毒性；体外细胞摄取实验证明BIO-MNPs@DOX对肝癌细胞和人乳腺癌细胞具有较好的靶向性能，且具有良好的抑制效果。以上结果表明BIO-MNPs可作为药物载体负载抗癌药物DOX，且BIOMNPs@DOX在癌细胞的靶向抑制方面具有一定的应用价值。     

TRAF3的表达与乳腺癌侵袭转移的关系

TRAF是一种参与多条信号通路的重要连接蛋白,包含7种亚型.其中TRAF3在肿瘤中的作用存在争议.实验旨在探讨TRAF3在乳腺癌中的表达差异.方法:采用免疫组化及westernblot方法检测TRAF3在乳腺癌中的表达情况以及和临床病理因素的关系.结果:TRAF3表达与组织学分型有关(P0.01);TRAF3表达与淋巴结有无转移有关(P0.05);并且乳腺癌TRAF3阳性率与临床TNM分期有关(P0.05).结论:TRAF3分子可能具有抑制乳腺癌侵袭与转移的作用,研究其信号转导机制有助于为乳腺癌提供新的治疗靶点.     

CTAB调控乳腺癌干细胞抑制迁移

乳腺癌转移是限制其临床治疗的主要因素.十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)作为一种潜在的抗癌化合物具有明显的抗肿瘤作用.使用划痕和Transwell实验证明了CTAB可抑制ZR-75-1细胞迁移.乳腺癌干细胞是导致乳腺癌转移的一个重要因素.通过免疫荧光、流式细胞术和细胞成球实验证明CTAB降低了乳腺癌干细胞比例,并且抑制了干性标记物CD44和CD133的表达.实验证明CTAB抑制乳腺癌干细胞并且抑制乳腺癌细胞迁移.     

FGFR2IIIc及其突变型腺病毒对小鼠乳腺癌作用的研究

目的：研究FGFR2IIIc及其突变型腺病毒对小鼠乳腺癌的作用。方法：确定腺病毒颗粒Ad、Ad-FGFR2IIIc及Ad-FGFR2IIIcS252W感染4T1细胞的最佳MOI,并通过RT-PCR检测外源目的基因的表达。建立BALB/c小鼠的4T1乳腺癌模型,在此模型上原位注射重组腺病毒颗粒治疗17天,观察其对小鼠肿瘤的作用。结果：当MOI=60时腺病毒对4T1细胞的感染率可达到95%以上,RT-PCR结果显示,FGFR2IIIc和FGFR2IIIcS252W可在4T1细胞中成功表达。与对照组和Ad组比较,Ad-FGFR2IIIc对小鼠肿瘤无明显作用,Ad-FGFR2IIIcS252W能显著减缓小鼠肿瘤体积和质量的增长。结论：FGFR2IIIc对BALB/c小鼠4T1乳腺癌无显著作用,FGFR2IIIcS252W能够显著抑制BALB/c小鼠4T1乳腺癌的生长。     

靶向碱基切除修复途径以克服结直肠癌细胞中的阿霉素耐药性

结直肠癌(CRC)具有非常高的发病率和死亡率，成为全球第三大最常见的恶性肿瘤和第二大最致命的癌症.阿霉素作为化学治疗药物，多年来一直广泛应用于癌症临床治疗，但由于其耐药性和副作用，治疗效果较为有限.已有研究证明，在癌细胞中DNA修复能力会大大增强，这在很大程度上会使得癌细胞在化学治疗药物引起的DNA损伤中存活下来. Flap核酸内切酶1(FEN1)在各种类型的癌细胞中表达较高，并在DNA损伤修复中起着关键作用.研究表明，FEN1抑制剂SC13显著增强了阿霉素的治疗效果，这种联合治疗可以通过激活cyclinD-CDK4-6/INK4/Rb通路进而抑制结直肠癌的细胞增殖，故靶向FEN1可为阿霉素在临床使用中提供一种新的策略.     

桑黄粗多糖对肿瘤细胞增殖及转移相关能力的抑制作用

研究了桑黄粗多糖（PL）对高转移卵巢癌细胞（HO-8910PM）和乳腺癌细胞（Bcap-37）增殖和转移相关能力的影响及其作用的机制.研究结果表明,桑黄粗多糖能有效抑制裸鼠移植瘤的生长,抑制率为65.37%;对离体培养的HO-8910PM和Bcap-37细胞的抑制率分别达到15.53%和23.81%;500 ind/ml PL作用于HO-8910PM细胞96 h可诱导其凋亡,通过细胞周期G0/G1期阻滞而抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡;PL能显著抑制HO-8910PM的黏附、侵袭和迁移等肿瘤转移相关能力.桑黄粗多糖具有抑制肿瘤细胞增殖及肿瘤转移的作用.     

中药复方板蓝根颗粒抗柯萨奇B_4病毒作用的实验研究

采用中药复方板蓝根颗粒进行了体外抗柯萨奇病毒B4(CVB4)的研究,通过观察病毒引起的细胞病变效应(CPE)、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明:中药复方板蓝根颗粒对CVB4无直接灭活作用,但能抑制CVB4在Hep-2细胞内的的生物合成和阻止CVB4的吸附,其半数抑制浓度(IC50)分别为1129.00和1130.44μg/mL,治疗指数(TI)均为2.78.在100～1600μg/mL范围内复方板蓝根颗粒与CVB4抑制率呈明显的量效关系(P<0.01),在1600μg/mL时能抑制CVB4在Hep-2细胞内的增殖>50%.研究表明中药复方板蓝根颗粒能有效地抑制CVB4在Hep-2细胞中的增殖,其抗病毒作用发生在阻断病毒吸附细胞和抑制病毒进入细胞之后的复制增殖.     

P15基因甲基化和血液病相关性的研究进展（综述）

P15基因是肿瘤抑制基因的侯选基因,受细胞生长抑制蛋白TGF－β的诱导,编码周期素依赖激酶4／6（CDK4／6）抑制因子,对细胞周期起负调控作用,P15基因操纵区5′－GpG岛的甲基化被认为是基因缺失之外的又一失活机制。P15基因5′－Gp G岛的异常甲基化导致该基因转录的抑制,5′－杂氮脱氧胞嘧啶（5′－Aza-2cdR）通过共价俘获DNA甲基转移酶抑制DNA的甲基化,使因甲基化失活的生长调控基因重新激活并表达。5′－Aza-2cdR可通过P15基因去甲基化再表达抑制细胞的生长,为临床恶性白血液病去甲基化治疗提供实验依据。     

腈基类化合物对半胱氨酸蛋白酶的抑制机理

半胱氨酸蛋白酶是人体自身产生的重要酶类物质,它广泛的参与人体新陈代谢和蛋白的水解。但过量产生的半胱氨酸蛋白酶会导致骨质疏松和乳腺癌。腈基类化合物分子是一种新发现的具有抑制半胱氨酸蛋白酶作用的靶向药物分子,高效且低副作用。但是它的抑制机理一直没有得到解决。本文介绍借助量子力学/分子力学（Q M/M M）的计算研究,解得了此类化合物对于半胱氨酸蛋白酶的抑制机理,并借助分子学软件设计了一种新型药物分子,有助进一步药物研究。     

嗜盐真菌多样性及其抗肿瘤活性研究

为探讨海盐田中的嗜盐真菌类型及其抗肿瘤作用,采用稀释涂布法和平板划线法分离海盐田中的可培养真菌,并基于ITS基因序列分析鉴定菌株,通过FGFR2过表达和未过表达的肿瘤细胞增殖抑制活性以及酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA）评价真菌的抗肿瘤作用。本研究分离得到11种嗜盐真菌,隶属于3科4属。真菌Epicoccum sorghinum（编号GXIMD02001）的提取物对FGFR2过表达的乳腺癌细胞MDA-MB-231-（S252W）增殖有较强的抑制作用,其半抑制浓度IC₅₀为11.02 μg/mL,而对FGFR2未过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231几乎没有抑制活性,该提取物在1 mg/mL浓度下对FGFR2蛋白激酶活性抑制率为91.5%;两株真菌（编号GXIMD02004和GXIMD02009）对FGFR2表达乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-231（S252W）增殖抑制的IC₅₀为11.94-16.41 μg/mL;5株真菌的IC₅₀为219.2-449.7 μg/mL。嗜盐真菌（编号GXIMD02001）是首次报道具有靶向FGFR2抗肿瘤作用的海洋真菌,部分嗜盐真菌具有较好抗肿瘤作用,本研究为北部湾海洋微生物来源的抗肿瘤药物开发利用提供科学依据。     

FGFR2Ⅲc及其突变型腺病毒对小鼠乳腺癌作用的研究

目的:研究FGFR2Ⅲc及其突变型腺病毒对小鼠乳腺癌的作用.方法:确定腺病毒颗粒Ad、AdFGFR2Ⅲc及Ad-FGFR2ⅢcS252W感染4T1细胞的最佳MOI,并通过RT-PCR检测外源目的基因的表达.建立BALB/c小鼠的4T1乳腺癌模型,在此模型上原位注射重组腺病毒颗粒治疗17天,观察其对小鼠肿瘤的作用.结果:...     

连花清瘟胶囊抗柯萨奇B_4病毒作用的实验研究

采用中药连花清瘟胶囊进行了体外抗柯萨奇病毒B4（CVB4）的研究.通过观察病毒引起的细胞病变效应（CPE）、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明：中药连花清瘟胶囊对CVB4有直接灭活作用,并能阻止CVB4的吸附细胞和抑制CVB4在Hep-2细胞内的的生物合成,其半数抑制浓度（IC50）分别为410.00,343.13和410.32μg/mL,治疗指数（TI）分别为2.67,3.20和2.66.其中抗病毒吸附作用最强（P〈0.01）.在100～1600μg/mL范围内连花清瘟胶囊与CVB4抑制率呈明显的量效关系（P〈0.05）,在500μg/mL时能抑制CVB4在Hep-2细胞内的增殖大于50%.研究表明中药连花清瘟胶囊能有效地抑制CVB4在Hep-2细胞中的增殖,其抗病毒作用表现为直接灭活病毒,阻断病毒吸附细胞和抑制病毒进入细胞之后的复制增殖.     

KRT15通过Wnt/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞增殖与侵袭并抑制铁死亡

乳腺癌是女性最常见的癌症类型。既往研究表明，角蛋白15(Keratin 15,KRT15)参与调控多种恶性肿瘤的发生发展。然而，目前KRT15在乳腺癌中的调控机制尚不清楚。本研究中，我们发现在乳腺癌细胞过表达KRT15可促进其增殖、侵袭和上皮-间质转化，并抑制凋亡，而敲减KRT15则表现出相反的表型。此外，通过Western blot和铁比色检测发现KRT15抑制乳腺癌细胞铁死亡，KRT15过表达的乳腺癌细胞Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达量增加。因此，KRT15可能通过增强Wnt/β-catenin通路抑制铁死亡在乳腺癌发展中发挥作用，提示KRT15是乳腺癌的潜在驱动基因。     

苏尼替尼对HeLa细胞中的CDK4的影响

以不同浓度的Sutent作用于HeLa细胞,采用MTT法检测Sutent对HeLa细胞增殖的影响.流式细胞术检测Sutent对HeLa细胞周期的影响;Western免疫印迹检测不同浓度的Sutent对HeLa细胞中CDK4蛋白表达的变化;探讨苏尼替尼(Sutent)对HeLa细胞中CDK4的影响.结果表明Sutent能够抑制HeLa细胞的增殖,引起HeLa细胞发生G2期周期阻滞,并且呈浓度依赖性降低HeLa细胞中CDK4蛋白表达量.显示了Sutent作为多靶点药物在药物研发中具有潜在的重要的研究价值.