环境中有机磷酸酯阻燃剂(TDCP、TECP和TCPP)对人胚肾细胞(HEK 293)的影响（英文）

水环境中的微污染物有机磷酸酯如三(2-氯乙基)磷酸酯(TCEP)、三(2-氯-异丙基)磷酸酯(TCPP)和三(1,3-二氯丙基)磷酸酯(TDCP)主要用作聚氨酯泡沫塑料的阻燃剂。物理、化学和生物处理很难完全消除这些污染物。研究阻燃剂在环境水平和较高浓度下对人细胞系的细胞毒性和细胞周期效应。结果表明,在浓度为0. 001 mg/L和0. 01 mg/L时,只有TDCP具有轻微的细胞毒性,而当这三种化学物质浓度100 mg/L以上时对细胞毒性有显著的诱导作用。TCEP和TCPP的EC50分别为276. 8 mg/L和58. 4 mg/L。三种药物均能抑制CDK 4的表达,TDCP能增加CDK 2和cyclin E的表达,而TCEP和TCPP在CDK 2和cyclin E的表达上表现出自差现象。TDCP和TCEP使细胞数量减少,细胞形态发生改变。可见三种化学物质对HEK 293细胞的杀伤作用可能是通过抑制CDK 4调节蛋白而产生的。     

氯代磷酸酯作为锂离子电池电解液阻燃添加剂的性能研究

为了提高锂离子电池电解液的热稳定性,使用氯代磷酸酯磷酸三（1-氯2-丙基）酯TCPP和磷酸三（2-氯乙基）酯TCEP作为锂离子电池电解液阻燃添加剂,研究其对锂离子电池电解液热稳定性和电化学性能的影响．循环性能测试、循环伏安法、交流阻抗等电化学分析表明：TCEP和TCPP与正极材料LiNi0.8Co0.2O2有很好的相容性,有良好的电化学稳定性;而对负极石墨材料则有一定的剥离现象发生．微量量热实验表明TCEP和TCPP的加入能提高电解液的热稳定性．     

四(2-氯乙基)-1,2-亚乙基双磷酸酯的合成研究

以磷酸三(2-氯乙基)酯(TCEP)为原料,在钠石灰作用下合成了四(2-氯乙基)-1,2-亚乙基双磷酸酯.当反应温度为190℃,反应时间为3.0h,催化剂用量为原料质量的0.7%时,该产品收率可达到88.2%. 本文还对四(2-氯乙基)-1,2-亚乙基双磷酸酯的合成方法和TCEP的缩合反应机理进行了探讨.     

皮蛋模拟胃肠道消化物对HepG2细胞的影响

皮蛋是中国传统食品,其水解物具有抗氧化、抗炎和抗癌等功效,具有良好的医学前景,但目前皮蛋发挥抗癌功效的途径及作用机制尚不清楚。探究了皮蛋模拟胃肠道消化物(preserved eggs simulated gastrointestinal digests,PESD)对人肝癌HepG2细胞增殖和细胞周期的影响。将皮蛋经体外模拟胃肠道消化处理后,进行细胞实验,用CCK-8法进行细胞增殖分析,研究PESD对HepG2细胞存活率的影响,采用碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色标记的方法,通过流式细胞术测定PESD对HepG2细胞周期的影响,用western blot法测定细胞周期相关调控蛋白的表达。研究发现:PESD以剂量依赖性方式对HepG2细胞增殖进行抑制,IC₅₀为4.17mg/mL;PESD处理显著增加了S期细胞的占比(P<0.05),使HepG2细胞阻滞于S期;4mg/mL的PESD处理HepG2细胞24h后,细胞中cyclin A、cyclin E、ATM、chk2和CDC25A的蛋白表达水平上升(P<0.05),而CDK2蛋白表达水平下降(P<0.05)。研究认为,皮蛋模拟胃肠道消化物是以剂量依赖性的方式来抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,主要是通过ATM-chk2-CDC25A信号通路,上调cyclin A和cyclin E蛋白的表达,下调CDK2蛋白的表达来实现人肝癌HepG2细胞阻滞于S期,影响人肝癌HepG2细胞周期进程,抑制癌细胞的增殖。研究结果旨在为皮蛋抗癌作用机制的阐明提供一定的理论基础。     

重楼活性单体PP-26抑制结肠癌SW620细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的:探讨重楼活性单体PP-26对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用及其机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的重楼单体PP-26对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用;PI单染及Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡水平;Western blotting检测PP-26对细胞周期、细胞凋亡相关蛋白以及Akt和ERK蛋白的表达.结果:与正常肝LO2细胞相比,重楼单体PP-26能显著抑制SW620细胞的生长,作用呈剂量-效应关系;随着PP-26浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与细胞对照组相比有显著差异;不同浓度PP-26作用后,细胞阻滞于G1期;PP-26作用细胞24 h后,CDK4、CDK6表达下降,P15、cyclin D1表达增加;不同浓度PP-26作用后,细胞晚期凋亡率增加,随浓度增加有上升趋势;PP-26作用细胞24 h后,线粒体相关凋亡信号通路蛋白Caspase-9、Caspase-3表达下降,PARP切割条带增加,细胞促凋亡蛋白Bax的表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-x L减少,p-Akt和p-ERK蛋白表达均下降.结论:重楼活性单体PP-26通过上调p15促进结肠癌SW620细胞阻滞于G1期,通过抑制P13K/Akt信号通路及ERK信号通路,活化线粒体凋亡通路,诱导细胞凋亡.     

赤霉素和氯吡脲的体外细胞及致突变毒性研究

赤霉素和氯吡脲作为高效的植物生长调节剂，被广泛用于水果果实的膨大和无核化生产中。为探究赤霉素和氯吡脲接触细胞后所发生的抑制细胞生长和致突变毒性作用，评价赤霉素和氯吡脲的损伤，利用人正常肝细胞(WRL68)对赤霉素和氯吡脲在细胞水平毒性做初步探究，通过小鼠淋巴瘤细胞(L5178Y)TK基因突变试验、鼠伤寒沙门氏菌Ames试验对赤霉素和氯吡脲致突变性进行评价。研究结果表明，赤霉素和氯吡脲对WRL68细胞的半数抑制浓度分别为1.377 mg·mL^-1和57.72μg·mL^-1;赤霉素在4 mg·mL^-1、氯吡脲在100μg·mL^-1剂量下，未观察到致突变毒性。赤霉素和氯吡脲虽不同程度的抑制WRL68细胞增殖但是不存在致突变毒性。     

Hg2＋对青海湖裸鲤肾脏组织的细胞毒性研究

为了解重金属Hg2＋对青海湖裸鲤肾脏组织的细胞毒性;以含有Hg2＋的浓度为0.0025、0.005、0.01、0.02mg/L的培养液培养裸鲤肾脏组织细胞;结果表明,0.005mg/L的Hg2＋浓度为裸鲤肾脏细胞毒性死亡的临界浓度,且裸鲤肾脏细胞的死亡率随Hg2＋的浓度的增加而增大,当培养基的Hg2＋浓度达到0.02mg/L时细胞全部死亡.     

4种有机污染物对假微型海链藻的毒性效应

以藻类生长密度、叶绿素a含量和光合作用速率作为测定指标,研究了4种典型有机污染物(壬基酚、五氯苯、芘、菲)对假微型海链藻(Thalassiosira pseudonana)的急性毒性效应,结果显示这4种有机污染物对假微型海链藻均具有显著的毒性效应.根据生长的72 h-EC50值,相应的毒性强度依次为壬基酚(0.078 mg/L)>芘(0.152 mg/L)>五氯苯(0.195 mg/L)>菲(1.720 mg/L).同时,通过外推法获得各污染物的环境效应阈值,对我国近岸海域这4种污染物的环境风险进行初步分析.此外,还探讨了不同毒性效应参数的敏感性.     

Cu~(2+)、Zn~(2+)对三疣梭子蟹幼蟹的急性毒性

以三疣梭子蟹幼蟹(体质量为:15.3±1.2 g)为实验动物,采用静水体外暴露法,开展了两种常见重金属离子(Cu~(2+)、Zn~(2+))的急性毒性和加和等毒性强度联合毒性实验。结果表明:(1)Cu~(2+)、Zn~(2+)对三疣梭子蟹幼蟹的96 h半致死质量浓度分别为3.934 mg/L和3.901 mg/L;三疣梭子蟹幼蟹对Cu~(2+)、Zn~(2+)的96 h安全质量浓度分别为0.039 34 mg/L和0.039 01 mg/L,表明两种重金属对梭子蟹幼蟹的毒性相近;(2)Cu~(2+)、Zn~(2+)离子在加和等毒性强度下对三疣梭子蟹幼蟹96 h联合毒性与其浓度配比相关,低毒性强度的Cu~(2+)对Zn~(2+)具有拮抗作用,低毒性强度的Zn~(2+)对Cu~(2+)具有协同作用,当Cu~(2+)、Zn~(2+)毒性强度相当时表现为相互独立作用。     

铅对河南华溪蟹主要组织细胞线粒体标志酶活性的影响

采用毒性实验方法,研究了Pb2 对河南华溪蟹心脏和肝胰腺细胞线粒体标志酶,即单胺氧化酶(MAO)、苹果酸脱氢酶(MDH)和细胞色素氧化酶(CCO)活性的影响.Pb2 处理浓度分别为0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、50 mg/L,实验同时设对照组.分别在24 h、48 h、72 h、96 h进行MAO、MDH、CCO活性的测定.结果显示,随着Pb2 浓度的增加和处理时间的延长,MAO、MDH、CCO的活性基本呈先升后降的趋势,且高浓度组(50 mg/L)表现为明显的抑制作用,剂量-效应和时间-效应关系明显,同时线粒体酶活性的改变有一定的组织差异性,心脏比肝胰腺更敏感.结论:铅可以导致线粒体酶产生明显且不可逆转的损伤;线粒体酶可作为动物受逆境胁迫的生化指标.     

阻燃硬质聚氨酯泡沫燃烧热值对阻燃性能的影响

将聚磷酸铵(APP)、磷酸三(β-氯异丙基)酯(TCPP)、氰尿酸三聚氰胺(MCA)、可膨胀石墨(EG)及EG与APP复合阻燃剂分别添加于硬质聚氨酯泡沫(RPUF),采用氧弹量热仪、氧指数仪、燃烧背温测试仪及锥形量热仪研究了阻燃RPUF燃烧热值(HoC)与氧指数、炭层阻隔作用及热释放等阻燃性能参数的相关性;采用X射线光电子能谱表征了RPUF/APP及RPUF/EG/APP体系燃烧热值测试后残炭表面P元素的化学状态. 研究表明,各阻燃RPUF的HoC由低到高的顺序为RPUF/APP,RPUF/EG/APP,RPUF/TCPP,RPUF/MCA,RPUF/EG,其中RPUF/EG/APP的氧指数相对最高,炭层阻隔效应较好,热释放及质量损失相对最低,产烟量适中,综合阻燃性能最好. RPUF/EG/APP燃烧热值测试残炭表面五氧化二磷比例(57.9%)大于RPUF/APP(35.9%). 阻燃RPUF的HoC主要与体系元素组成及阻燃剂HoC的贡献有关,也与膨胀阻燃体系中组分的相互作用有关;而氧指数、炭层的阻隔作用、热及烟释放等阻燃性能主要取决于阻燃机理.      

CDK16在食管鳞癌中的表达及其对肿瘤发生发展的影响

目的研究发现,细胞周期素依赖性激酶(cyclin dependent kinases,CDKs)家族成员与食管鳞癌的发病密切相关,但细胞周期素依赖性激酶16(CDK16)对食管鳞癌发病的影响尚不清楚.本研究旨在探讨CDK16在人食管鳞癌组织中的表达及生物学意义.方法应用组织芯片技术结合免疫组织化学技术检测45例食管鳞癌组织、45例癌旁组织中CDK16蛋白的表达情况,并使用统计分析软件研究CDK16蛋白的表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系.结果 CDK16在食管鳞癌组织中呈阳性表达,且表达强度与肿瘤分化程度呈负相关.另外,CDK16在食管鳞癌细胞中的表达位置与肿瘤的分化程度紧密相关.CDK16的表达与食管鳞癌的分化程度、淋巴结转移及TNM临床分期均具有显著的相关性(P<0.05),而与患者的年龄、性别以及肿瘤的部位、最大径、病理形态没有显著的相关性(P>0.05).结论 CDK16在食管鳞癌中的高表达与食管鳞癌的发生发展及转移密切相关.检测CDK16的表达有助于食管鳞癌的临床诊断和预后评估.     

抑癌基因p27在肿瘤细胞MCF7中的表达

抑癌基因p27是一个细胞周期依赖性激酶抑制子CKI(CDK inhibitor),对细胞周期起着负调控的作用,将p27基因克隆到表达载体pcDNA,转染到肿瘤细胞MCF7中,筛选到稳定表达株．p27基因的过量表达确实对肿瘤细胞的生长产生了抑制作用,并且引发了部分肿瘤细胞的凋亡．     

Partial inhibition of CDK4 gene expression leads to the extension of G1 phase of V79-8 cells

V79-8 is an abnormal cell line which does not have detectable G1 and G2 phases in its cell cycle. This cell line is derived from V79 cell line which has Gl phase but lacks G2 phase. By using an anti-sense approach, CDK4 gene expression was partially inhibited to find whether CDK4 might contribute to the lack of Gl phase in V79-8 cells. Anti-CDK4 anti-sense plasmid was constructed and used to transfect V79-8 cells. Clones of transfected cells (V79-8-asCDK4) were examined, in comparison with V79-8 cells, to determine its growth curve, cell doubling-time (GT), the level of CDK4 gene expression and the levels of expression of some other growth related genes. V79-8-asCDK4 cells showed a slower growth rate with a doubling time 2.5-h longer than that of V79-8 cells. A flow cytometry (FCM) analysis demonstrated that the 2.5 h increase of the doubling time of V79-8-asCDK4 cells was mainly due to the appearance of Gl phase because its G2 + M phase was not significantly different from that of V79-8 cells. The decrease of CDK4 gene expression in V79-8-asCDK4 cells was shown by Northern-blot. Changes in the expression levels of the growth-related genes TGF-β, cyclin D1 and Rb were also detected in V79-8-asCDK4 cells. CDK4 functions mainly in G1 and at the transition between G1 and S phases. Expression of an anti-sense CDK4 gene fragment reduces the levels of endogenous CDK4, CDK4/cyclinD kinase activity and the phosphorylation of Rb. These events may postpone the inactivation of the check-point leading to the delay of entry into S phase and the reappearance of G1 phase in V79-8-asCDK4 cells.     

Cyclin B1、CDK1在肺癌中过表达及其意义

摘要：采用免疫组化ABC法检测12例肺癌组织、11例癌旁组织及3例正常肺组织中cyclin B1、CDK1蛋白的表达情况，以探讨细胞周期蛋白eyelin B1及细胞周期蛋白依赖性激酶CDK1在不同肺癌组织中的异常表达及其临床意义。结果显示cyclin B1在正常肺组织、癌旁组织、癌组织中阳性率分别为0％、9．1％和50．0％，CDK1的阳性率则为0％、18.2％和75.0％，cyclin B1、CDK1在小细胞肺癌和鳞癌中存在广泛的过表达，而在大细胞肺癌中没有表达，并且在不同肿瘤亚型中表达也有差异性．     

植物生长延缓剂对板栗苗枝条生长及叶片非结构性碳水化合物的影响

【目的】探究叶片喷施不同质量浓度的多效唑(PP333)、矮壮素(CCC)、烯效唑(S3307)对板栗苗枝条生长动态及叶片内非结构性碳水化合物(NSC)[可溶性糖(SS)和淀粉(ST)]含量的影响,为板栗化学调控提供理论依据。【方法】以备选砧木3年生板栗‘燕山早丰’(Castanea mollissima‘Yanshanzaofeng’)苗为试验材料,选择15%多效唑可湿性粉剂、50%矮壮素水剂、5%烯效唑可湿性粉剂配置溶液,在花芽分化期选择天气晴朗无风的早晨分别喷施多效唑(50、100、150 mg/L)、矮壮素(100、150、200 mg/L)和烯效唑(30、60、90 mg/L),以喷清水为对照(CK),各处理进行整株喷施,直至叶面布满水珠而不滴水为止。试验采用单因素完全随机区组设计,单株为1个小区,每个处理设5个重复。测定分析3种植物生长延缓剂处理下板栗苗木营养枝、标准枝的生长动态及叶片内非结构性碳水化合物的含量。【结果】①多效唑、矮壮素和烯效唑均能显著降低板栗苗木枝条长度,增加枝条直径,对于标准枝喷施30 mg/L烯效唑效果最好,处理后90 d使得标准枝长度较对照减少24.13%,直径增加26.45%;②延缓剂促进苗木枝条粗壮、长度缩短,延缓板栗砧木生长,提高嫁接成活率并有利于嫁接后生长,100 mg/L多效唑对营养枝促壮效果最好,较对照增加36.63%,长度减少17.10%。③延缓剂处理后,板栗叶片可溶性糖含量升高,其中150 mg/L矮壮素处理板栗苗木叶片内可溶性糖含量始终处于最高水平,且显著高于对照,在处理后90 d达到最高(61.95 mg/g)。④不同延缓剂处理对叶片淀粉含量有不同的影响,处理后30 d,100 mg/L矮壮素处理叶片内淀粉含量始终处于最高水平,且显著高于对照,在处理后60 d和90 d,淀粉含量分别高达1.54、1.51 mg/g;⑤3种延缓剂均能提高板栗苗木内非结构性碳水化合物含量,200 mg/L矮壮素处理对苗木非结构性碳水化合物增加效果最好,该浓度处理后的板栗苗木,其叶片内非结构性碳水化合物总量始终处于最高水平,最高达62.60 mg/g,且显著高于对照。【结论】植物生长延缓剂使得板栗苗木枝条粗壮、长度缩短,抑制砧木生长,从而提高板栗嫁接成活率并有利于嫁接后生长,其中60 mg/L烯效唑对标准枝的处理效果最好,100 mg/L多效唑对营养枝促壮效果最好;对板栗苗木喷施延缓剂有利于其叶片的碳供应,200 mg/L矮壮素处理效果最好;在植物生长延缓剂实际应用于板栗苗木培育中,应根据生产目的合理选择不同种类延缓剂及适宜的质量浓度。     

Autonomous regulation of the anaphase-promoting complex couples mitosis to S-phase entry

Oscillations in cyclin-dependent kinase (CDK) activity drive the somatic cell cycle. After entry into mitosis, CDKs activate the anaphase-promoting complex (APC), which then promotes cyclin degradation and mitotic exit. The re-accumulation of cyclin A causes the inactivation of APC and entry into S phase, but how cyclin A can accumulate in the presence of active APC has remained unclear. Here we show that, during G1, APC autonomously switches to a state permissive for cyclin A accumulation. Crucial to this transition is the APC(Cdh1)-dependent autoubiquitination and proteasomal degradation of the ubiquitin-conjugating enzyme (E2) UbcH10. Because APC substrates inhibit the autoubiquitination of UbcH10, but not its E2 function, APC activity is maintained as long as G1 substrates are present. Thus, through UbcH10 degradation and cyclin A stabilization, APC autonomously downregulates its activity. This indicates that the core of the metazoan cell cycle could be described as a self-perpetuating but highly regulated oscillator composed of alternating CDK and APC activities.