不同体外培养条件对牛体外受精胚胎质量影响的研究

研究探讨了不同体外培养条件下牛体外受精胚胎的发育速度及囊胚细胞数，从而了解不同体外培养系统对牛体外受精胚胎质量的影响，实验一中伴体外受精卵分别在ＳＯＦ＋牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）和ＴＣＭ１９９＋ＢＯＥＣ两种培养系统内培养，在这两种培养条件下囊胚发育率分别为２２．２％和２１．２％，囊胚细胞数分别为１１３．３±５．０和９７．９±８．３，受精后第６～９ｄ的囊胚出现率分别为４０．１％，３７．０％，１９．     

人胎儿小脑皮质蒲肯野细胞发育的定量观察

本文应用体视学方法，对３５例不同月龄组的胎儿，观察其小脑皮质蒲肯野细胞在发育过程中的变化．结果发现蒲肯野细胞层在胚胎第６个月时出现，其数密度和核体密度随月龄的增长逐渐减少，细胞的体积则随月龄的增长而逐渐增大．体密度与表面积密度变化不明显．     

The Effects of Different Culture Systems on the Quality of Bovine In Vitro Fertilized Embryos

研究探讨了不同体外培养条件下牛体外受精胚胎的发育速度及囊胚细胞数，从而了解不同体外培养系统对牛体外受精胚胎质量的影响．实验一中将体外受精卵分别在ＳＯＦ＋牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）和ＴＣＭ１９９＋ＢＯＥＣ两种培养系统内培养，在这两种培养条件下囊胚发育率分别为２２．２％和２１．２％，囊胚细胞数分别为１１３．３±５．０和９７．９±８．３，受精后第６～９ｄ的囊胚出现率分别为４０．１％ａ、３７．０％、１９．２％ｂ、２．７％和１３．５％ｃ、３２．７％、３６．５％ｄ、１７．３％（ａ＞ｃ，Ｐ＜０．０１，ｄ＞ｂ，Ｐ＜０．０５），表明牛体外受精卵在ＳＯＦ＋ＢＯＥＣ中的发育速度快于在ＴＣＭ１９９＋ＢＯＥＣ中．实验二中将体外受精卵分别培养于ＳＯＦ＋ＢＯＥＣ、ＳＯＦ＋牛卵丘细胞、ＳＯＦ＋ＢＳＡ三种培养系统中，结果囊胚发育率分别为３５．５％ｅ、２９．４％和２２．４％ｆ（ｅ＞ｆ，Ｐ＜０．０１），囊胚细胞数分别为１１７．３±８．０ｇ、９４．２±９．３和９０．２±９．４ｈ（ｇ＞ｈ，Ｐ＜０．０５）．实验三观察了体外受精胚胎在ＳＯＦ＋ＢＯＥＣ培养条件下发育速度与囊胚细胞数的关系，结果第６～９ｄ的囊胚细胞数分别为１１０．８±１０．２ｉ、１２８．     

成纤维细胞和ES细胞在小鼠和兔去核卵母细胞内发育

以昆明白小鼠成纤维细胞和胚胎干（ES）细胞作为供核细胞，以昆明白小鼠和日本大耳白兔的MⅡ期去核卵母细胞作为受体，采用核移植方法，构楚了克隆胚胎．在同种克隆中，以ES细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率明显低于以成纤维细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率（24．4％相对于56．9％，P〈0．05），1．8％的ES细胞克隆胚胎发育到囊胚阶段，而成纤维细胞克隆胚胎没能发育到囊胚阶段；在异种克隆中，以ES细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率（89．6％）和囊胚发育率（18．8％）明显高于以成纤维细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率（54．2％）和囊胚发育率（4．2％）．     

不同品种肉用型种羊超排效果的研究

采用FSH递减注射法．对不同品种肉用型供体母羊的超排效果进行研究．结果表明，进行超排处理之后，母羊的黄体数、平均排卵数、胚胎回收率、平均可胚数、异常胚胎数和未受精卵数在各品种之间存在差异．这与品种的药物敏感性、超排处理时优势卵泡的存在与否以及品种的遗传性有很大的关系．     

肉苁蓉(CistanchedeserticolaMa)胚胎学研究Ⅱ.胚和胚乳的发育

肉苁蓉为细胞型胚乳，初生胚乳核第一次分裂即形成细胞壁．具珠孔端胚乳吸器．种子成熟后由３～５层胚乳细胞包围着胚．合子横分裂形成顶细胞和基细胞．顶细胞纵分裂形成二分体和四分体，以后向各个方向分裂形成多细胞原胚．基细胞多次横分裂形成由一纵列细胞组成的胚柄．其胚胎发生属柳叶菜型．成熟种子中，胚仍然处于球形胚阶段．     

昆明鼠胚胎干细胞的分离培养与鉴定

目的：从昆明系小鼠的早期胚胎分离和培养胚胎干细胞(ES细胞)．方法：收集小鼠3．5d胚龄的囊胚，将其培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上，5—6d后取隆起生长的内细胞团块分离后再培养，观察集落的生长情况并通过碱性磷酸酶染色、原位杂交、细胞核型分析等对细胞集落进行鉴定．结果：KS细胞集落性生长，符合小鼠胚胎干细胞的一系列特性．结论：昆明系小鼠囊胚在胚胎成纤维细胞饲养层上可以发育成ES细胞，并能进行传代培养．     

静电场对小鼠胚胎发育能力的影响

首次报道哺乳动物胚胎经静电场处理后对＂细胞阻滞＂和后期发育能力的影响．结果表明，用静电场处理小鼠体外受精卵和２细胞胚胎时，对克服小鼠＂２细胞阻滞＂无显著影响．处理发育于Ｍ１６＋１００μＭＥＤＴＡ＋输卵管上皮的２细胞胚胎时，显著提高了胚胎的发育能力，最佳处理剂量的囊胚率从４２％提高到６４％，囊胚孵化率从２０％提高到４５％．     

泽蛙单倍体胚胎核糖核酸（RNA）的提取和测定

本研究以同一形态发生期(鳃盖闭合期)的泽蛙(Rana limnocharis Bole)雌核单倍体胚胎和这一期的泽蛙二倍体胚胎为材料，仿Sze(施履吉)法分别测定它们的细胞数目，并用苯酚法提取各自的核糖核酸，然后用紫外分光光度计对所提取的核糖核酸进行定性、定量。实验结果表明：鳃益闭合期泽蛙单倍体的细胞数目是二倍体的1．53倍，但每一细胞内的RNA含量却不及二倍体细胞的二分之一。作者据此讨论了泽蛙单倍体胚胎死亡的原因。     

玉米叶片愈伤组织体细胞胚胎发生的细胞形态学观察

应用ＭＳ＋２．０ｍｇ．Ｌ＾－１，２，４－Ｄ＋０．５ｍｇ．Ｌ＾－１ＢＡ作为培养基，附加５００ｍｇ．Ｌ＾－１水解酪蛋白和ｗ＝３０％蔗糖、可以从玉米叶片愈 直接诱导出体细胞胚胎。观察表明，玉米胚性细胞同非胚性细胞差别显著。玉米幼叶体细胞胚胎可能起源于单细胞；发育早期的胚性细胞团与周围薄壁细胞存在着明显的界限，推测可能同体细胞胚胎发生初期的生理隔离有关，它随着胚胎发育而逐渐消失。     

罗氏沼虾的染色体研究

从罗氏沼虾处于囊胚期和原肠期的胚胎细胞中提取中期染色体进行细胞遗传学研究。染色体制片分析表明，罗氏沼虾二倍体染色体数目2N=118，但是也有一些细胞具有100～109条染色体。以外，还有一些细胞具有与单倍体染色体数相近的染色体数。     

N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(NNG)对雨生红球藻797株的影响

研究不同浓度的化学诱变剂迭氮化合物N—甲基—N—硝基—N—亚硝基胍（N-methyl-N-nitro-N-nitroaoguanidine,NNG))对雨生红球囊Haematococcus pluvialis 797株的影响。加入不同浓度的NNG后，静细胞数占总细胞数的比例均有所下降。叶绿素a，叶绿素b，总胡萝卜素，虾青素的积累都有增多，并且当NNG浓度为10μmol／L时，虾青素含量无论是以体积计还是以单位细胞计均达到最高，分别提高72％和105．6％：NNG浓度在0—10μmol／L范围内，虾青素含量随着NNG浓度的增加逐渐增高，NNG浓度在10—100μmol／L范围时，虾青素的含量随着NNG浓度的增加逐渐降低。     

鸭胚胎血液中PGCs数量及其外源DNA的体内转染

抽取了麻鸭和骡鸭胚胎发育第14－20期的血液，制作血涂片，PAS染色，观察血液中的原生殖细胞的含量，并对各个时期血液中原生殖细胞的含量进行了统计，最高含量都出现在第16期,分别为8．9752％和2．1871％，用In vivo Gene Delivery Systern和pEGFP-N对PGCs进行了外源DNA的体内转染。结果在6只胚胎中的3只中发现GFP报告基因的表达。     

肉苁蓉水提液对猪早期体外发育胚胎中NO浓度含量的影响

目的探讨肉苁蓉水提液对猪早期体外发育胚胎中一氧化氮浓度的影响,以研究肉苁蓉促进猪胚胎发育的药理作用。方法将采集的猪卵母细胞随机分为试验组和对照组,试验组在胚胎培养时在基础液中加入50μg/mL肉苁蓉水提液。将培养至囊胚阶段的胚胎取出,用Griess试剂法测定囊胚细胞中NO含量。结果细胞中NO含量显著低于对照组(P<0.05)。结论肉苁蓉水提液减少了胚胎细胞中NO含量,这可能是其促进细胞体外发育的作用机理之一。     

原代和传代培养的人输卵管上皮细胞对小鼠胚胎体外发育的影响

为了检测人输卵管上皮细胞对早期胚胎体外发育的影响，将小鼠２细胞胚胎与人输卵管上皮细胞进行体外共培养．结果显示：无论原代培养还是传代培养的人输卵管上皮细胞都可使胚胎发育率提高，发育速度加快．经传代４次以后的细胞对胚胎发育的促进作用有下降的趋势，所以传代第１至第４代是应用于共培养的最佳选择．同一代细胞中已贴壁稳定生长的细胞对胚胎发育的促进作用比刚经传代尚未贴壁的细胞大．     

受精前后卵透明带糖蛋白的生化特性差异

探讨受精后卵透明带糖蛋白的生化特性变化．用SDS-PAGE分析未受精卵和2-细胞胚胎的透明带成分的差异．研究结果表明，受精前后卵透明带的主要带型相似，但2-细胞胚胎透明带在还原电泳中有一条特异的小肽，分子质量在15000～30000之间，约为22000．进一步用HPLC分析两种样品的O-侧糖链的不同，分析显示，两种样品的O-糖链中有3种单糖基的保留时间值很相似，但有些寡糖基明显不同．小鼠透明带精子受体失活的分子机制主要在于O-寡糖链的修饰，O-单糖与精子受体失活没有明显的关系。     

Smad2基因敲除小鼠冷冻胚胎库的建立

目的 建立Smad2基因敲除小鼠胚胎库。方法 利用OPS法对Smad2基因敲除小鼠胚胎进行玻璃化冷冻保存,并比较不同杂交组合小鼠的超数排卵数、解冻胚胎的复苏率及发育率。结果 两组不同杂交组合（Smad2^＋/－♂×Smad2^＋/－♀和Smad2^＋／－×Smad2^＋／－♀）小鼠平均超排卵数分别为14．13枚和24．60枚;复苏率分别为90．16％和91．67％;囊胚发育率分别为73．08％和77．05％。这些结果表明Smad2基因敲除杂合子母鼠的超排数量明显低于野生型母鼠的超排数量,而二者胚胎解冻后的复苏率和囊胚发育率没有显著差异。因此我们主要通过对野生型小鼠超数排卵,然后与Smad2基因敲除杂合子雄鼠交配的方法获取胚胎,进行玻璃化冷冻保存,现已冻存胚胎1256枚。结论 成功建立了Smad2基因敲除小鼠胚胎库。     

澳大利亚产湾鳄(Crocodylus prosus)背部皮肤的胚胎发生

本文用光镜观察了湾鳄在胚胎不同时期的皮肤发生．发现有以下几个主要特点：（１）胚胎４２．３天出现压力感受器；（２）胚胎４６．８天出现背腺及鳞间沟；（３）胚胎５６．８天出现纵嵴；（４）胚胎６５天表皮已发育成熟，由内向外可分为：生发层、中间层、α角质层和β角质层；（５）胚胎７３天（孵出）背腺成熟为无分枝的泡状腺，鳞间沟高度卷曲与折叠．最后对湾鳄皮肤发生与其他动物的异同点及背腺在系统演化中的意义进行了讨论．     

5．51亿年前的动物胚胎细胞和亚细胞结构研究取得新突破

近日,国际著名刊物Science发表了关于中国贵州瓮安生物群的最新科研成果——“新元古代动物胚胎的细胞和亚细胞结构”．这项成果采用光学显微镜、扫描电子显微镜和透射电子显微镜等研究手段,特别是利用了X射线断层扫描摄影(X-ray computed tomography)这一最新技术,对产自中国贵州瓮安距今约5．51亿年前的磷酸盐化动物胚胎化石进行了深入研究,揭示了胚胎细胞中的肾形亚细胞结构可能代表了细胞核、纺锤体或其他细胞器,而胚胎细胞中分散的球状体结构可能代表了一些有膜包裹的细胞质泡、脂质或卵黄粒．同时,利用传统的技术手段,我们不可能数清超过8个细胞阶段的胚胎化石的细胞个数,而新技术手段的应用使这项工作变得非常简单．需要特别提出的是,这项成果是由来自美国、英国、瑞典、澳大利亚、中国和瑞士6个国家的15位科学家共同完成的,是古生物学研究领域国际合作的又一结晶．中国地质科学院地质研究所尹崇玉研究员、中国科学院南京地质古生物研究所的周传明、袁训来研究员参加了该项研究工作．     

小鼠早期胚胎体外培养技术中几种化学因素的影响

与胚胎体外培养有关的一些化学物质，如液体石蜡、ＣＯ２、乙醇和水质等，对小鼠早期胚胎发育有明显的影响．有的液体石蜡对胚胎有毒害作用，这种毒害作用与其比重和所含的硝基萘杂质无关．有的国产液体石蜡适合于做早期胚胎培养之用．培养液中混入乙醇对胚胎发育危害很大，浓度达到０．８％时，胚胎完全不发育，而浓度低于０．０５％时，则无明显影响．酒精厂生产的ＣＯ２粗制品，乙醇含量约为～０．１８％，完全适合于做胚胎培养的ＣＯ２气源．用三蒸水配制的培养液进行胚胎体外培养，可获得良好效果．