实验用五指山小型猪胚胎生殖细胞的分离培养

目的对从猪的原始生殖细胞分离获得胚胎干细胞的方法进行初步研究。方法胎儿取自怀孕26～28d的实验用五指山母猪。分离胎儿生殖嵴获得PGCs,接种于STO饲养层上,以DMEM+2mmol/L谷氨酰胺+0.1mmol/L非必需氨基酸+0.1mmol/Lβ-巯基乙醇+100IU/mL青霉素+100μg/mL链霉素+15%FCS作为培养基,对细胞进行培养传代。结果培养的细胞传至4～5代,形态多样,经AKP染色、SSEA-1免疫荧光染色、Oct-4免疫荧光标记等方法鉴定为阳性,具有胚胎干细胞的特征。     

利用四倍体胚胎补偿法克隆ES猪技术

胚胎干细胞（ES）是从附植前胚胎内细胞团（ICM）或胎儿原始生殖细胞（PGCS）分离而来的经过体外长期培养、具有多方向分化潜能和种系嵌合能力的全能性或多能性细胞,通常我们又把从原始生殖细胞分离而来的胚胎干细胞称谓胚胎生殖细胞（EG）。由于胚胎干细胞具有特殊生物学特性,     

Laron综合症的研究进展

Laron综合症又称原发性生长激素（GH）不敏感综合症,是由Laron等在1966年首先报道的以色列一种血清生长激素（hGH）水平正常或高,胰岛素样生长因子（IGF-1）水平低下的家族性侏儒而被命名的。迄今报道的Laron综合症病例大多来自地中海和中东地区（阿拉伯、西班牙、意大利、伊朗、巴基斯坦、印度）,欧洲、北美、日本和中国也有报道,也有涉及鼠、猪和鸡等方面的报道。有关Laron综合症的研究近十多年来一直是一个十分活跃的研究领域,并已取得了显著的进展。现将该研究领域的一些进展情况做一概述。     

中国小型猪实验动物化培育及种质特异性研究

1　小型猪品系繁多 ,各具特色我国地形、生态条件多样 ,经历代人工和自然选择 ,使我国小型猪品种具有得天独厚的资源和条件。主要的品种有 :海南五指山小型猪 (WZSP)、云南小耳猪、贵州香猪、广西巴马香猪、甘肃合作猪、青海藏猪等。五指山小型猪具有体型小、性成熟早、遗传稳定、可近亲繁殖的特点 ;云南小耳猪具有体型较小、性成熟早、体为黑色等特点 ,通过近亲繁殖 ,已获得近交 2 0代仔猪 ,已分化为体重大小、毛色、体态不一的 8个家系 ;香猪、巴马香猪具有性成熟早、遗传比较稳定、产仔率较高、体毛分别为黑色和白色占 90 %左右等特征…     

实验用小型猪胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞为核供体生产转基因克隆胚胎

目的比较不同类型体细胞对生产转基因克隆胚胎效率的影响。方法利用脂质体介导的方法将质粒pEGFP-N1转染到五指山小型猪胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞,经过G418筛选后均获得了阳性细胞株。然后分别以两种类型转基因细胞以及未转基因细胞为核供体进行体细胞核移植,比较不同类型供体细胞克隆胚胎的囊胚发育率。结果胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞克隆胚的囊胚发育率差异不显著(P>0.05,8.3%vs.7.1%);转基因胎儿成纤维细胞(9.6%)和转基因骨髓间充质细胞(9.9%)克隆胚胎的囊胚发育率差异不显著(P>0.05,9.6%vs.9.9%);每一种类型供体细胞转基因与否对克隆胚的囊胚发育率无影响(P>0.05)。结论通过体细胞核移植技术,小型猪骨髓间充质细胞与胎儿成纤维细胞均可有效地生产转基因囊胚。     

全国首次小型猪实验动物化与开发利用研讨会在北京召开

早在 19世纪 ,科学家就发现猪在解剖、生理和代谢等方面与人类十分接近 ,是极为理想的实验动物 ,因而 ,猪的实验动物化工作一直受到国际科学界的普遍重视。特别是近年来 ,猪作为人类器官移植的供体研究成为学术界关注的焦点。但由于实验动物化的工作一直未能突破近交系的瓶颈 ,致使相关领域的研究受阻。我国小型猪资源得天独厚 ,早在七十年代 ,我国科学工作者就开始了小型猪近交系的选育工作 ,科学工作者对小型猪资源的开发利用研究也给予了高度重视。目前 ,云南的西双版纳小耳猪、中国农业科学院培育的五指山小型猪、广西的广西巴马小型猪…     

我国小型猪资源实验化培育及开发利用

小型猪在解剖学、生理学、疾病发生机理等方面与人有较大的相似性,是理想的实验动物模型。国外小型猪的培育开展较早,自第二次世界大战以来先后已培育出20多个品系或品种,如美国、苏联、捷克、日本等,尤其是德国Gottingen小型猪,60年代初开始培育,80年代已畅销到多个国家和地区     

实验用五指山小型猪正常生理值测定

目的建立中国实验用五指山小型猪正常生理参考值。方法选用24头中国实验用五指山小型猪,雌雄各半,对其体重、体温2、0项血液学指标2、1项血清生化指标、4项心电图指标、尿常规、主要脏器重量和脏器系数进行了测定,并选用同一批动物对其血液学、血清生化、心电图等生理指标进行了为期4个月的连续测定。结果五指山小型猪部分指标如血液学的WBC、LYM%、GRAN%、PCT,血清生化指标如ALP、P、Na、Cl雌雄动物相差显著,其他指标较一致。心电图指标、体重、主要脏器系数雌雄较一致,部分生化指标如GGT等与临床人正常值较接近。动态测定结果提示各项主要指标测定结果较稳定,随着饲养时间的延长,少数血液生化指标如WBC、GOT有一定的改变,但幅度较小。结论初步建立了中国实验用五指山小型猪正常生理参考值,这些生理数据的采集为其进一步开发和应用提供了有益的参考。     

促减数分裂甾醇（MAS）对猪卵母细胞体外成熟及其胚胎发育能力的影响

利用促减数分裂甾醇(MAS)合成代谢过程中的抑制剂AY9944累积FF-MAS的原理,在猪卵母细胞体外成熟过程中添加AY9944,间接地研究了内源性MAS对猪卵母细胞体外成熟质量的影响.猪卵丘卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes,COCs)培养在NCSU23成熟培养液中,并添加不同浓度(0,10,20,40μmol/L)的AY9944培养44h.培养结束后,成熟的卵母细胞进行孤雌激活和以胎儿成纤维细胞为核供体重构胚胎,分别于48和144h观察胚胎发育情况,统计卵裂率和囊胚率及囊胚/2-细胞胚比率.结果如下:(1)随着AY9944添加浓度的增加,退化的卵母细胞增多,40μmol/L AY9944处理的退化卵显著,卵母细胞成熟率显著下降.(2)成熟培养液添加20和40μmol/L AY9944处理的孤雌激活胚胎的囊胚形成率和2-细胞胚发育到囊胚的比率显著增加(P<0.05).(3)以对照组(0μmol/L AY9944)和20μmol/L AY9944处理的卵母细胞为胞质受体,发现20μmol/L AY9944处理的克隆胚的发育能力囊胚率和2-细胞胚发育到囊胚的比率有所提高,但无显著差异(P>0.05).以上结果表明,猪卵母细胞体外成熟过程中添加AY9944提高了猪卵母细胞体外成熟的胞质质量,胚胎的发育能力提高.     

实验用近交系小型猪WZSP表皮干细胞建系的初步研究

目的将五指山猪(Wuzhi Shan Pigs,WZSP)表皮干细胞传至15代以上,初步建立实验用近交系小型猪WZSP表皮干细胞系。方法采集WZSP耳组织,通过中性蛋白酶消化获得表皮细胞,再通过0.25%胰酶 0.02?TA消化制成单个表皮细胞悬液,接种在Ⅳ型胶原包被的培养瓶内,采用无血清条件培养基培养,0.25%胰酶消化传代。对所培养表皮干细胞进行AKP染色鉴定。结果表皮干细胞能够快速粘附在Ⅳ型胶原上,呈克隆状生长,已传至15代以上,传代间隔为7 d左右;取第5代细胞进行AKP染色呈阳性。结论在本实验条件下,建立ESCs细胞系是可能的,经鉴定,所培养细胞具有干细胞基本特性。