重组人卵ZP3肽段在毕赤酵母中的表达

目的:用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达人透明带hZP3片段,研究其抗生育作用.方法:设计特定引物从hZP3全长序列中PCR扩增794～1282nt基因片段,将扩增片段克隆到酵母表达载体pPICZα上, 构建成重组质粒pPICZα-hZP3CT,线性化后的重组质粒导入毕赤酵母中,筛选出高拷贝菌株,甲醇诱导目的蛋白表达.用SDS-PAGE 和Western blotting 分析表达产物.结果:成功构建酵母表达载体,并在酵母菌株X-33中诱导表达重组蛋白.重组蛋白可以与鼠抗重组人卵透明带hZP3融合肽段的抗血清发生特异结合,表明目的基因成功表达.结论:重组hZP3蛋白已在酵母中成功表达,目的蛋白能与相应的抗体结合.     

人ZP3B-细胞表位嵌合肽DNA的设计和合成

目的：设计和合成适合在昆虫细胞中表达的一个人ＺＰ３ Ｂ细胞表位的ＤＮＡ序列。方法：根据国外的研究基础，设计由人ＺＰ３的Ｂ细胞表位肽段和外源Ｔｈ细胞表位肽段串联而成的４５肽嵌合肽序列，并根据昆虫细胞对密码子的偏爱性设计出该嵌合肽的ＤＮＡ序列。然后人工合成该嵌合肽的ＤＮＡ链，并克隆到ＰＵＣ１８载体上。结果：通过酶切分析和测序证明，合成的ＤＮＡ与所设计的嵌合肽ＤＮＡ序列一致。结论：按设计合成了人ＺＰ３的     

染色质量组试管婴儿

日益发展的体外受精技术正广泛应用于临床不孕症的治疗，但可能造成缺陷基因下传。胚胎着床前遗传诊断技术可早期诊断胚胎遗传缺陷，减少遗传病胎儿的妊娠，但不能修正患儿的基因缺陷。在此，作者提出染色质量组试管婴儿的构想，即在体外受精时剔除有缺陷的染色体，再植入其他个体相应的正常染色体，从而达到修正胎儿遗传缺陷，改善胎儿遗传品质的目的。     

子宫内膜异位症大鼠子宫内膜白细胞介素-6 mRNA表达的变化

目的：探讨大鼠子宫内膜异位症（内异症）发生、发展过程中子宫内膜白细胞介素－6（IL－6）mRNA表达的变化。方法：利用大鼠内异症动物模型，采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术，检测子宫内膜白细胞介素－6（IL－6）mRNA表达情况。结果：正常对照组，各时间点间2、4、6和8周）IL－6mRNA表达无显著性差异（P＞0．05）。内异症模型组，在成模后2、4、6和8周其在位、异位子宫内膜IL－6mRNA的表达呈增高趋势（P＜0．01）。结论：IL－6mRNA可能与内异症的进展有关。     

小鼠胚胎低温生物学特性初探

NIH雌鼠腹腔注射5IU（83．35mol／s）的PMSG和5IU（83．35mol／s）HCG超排,一定发育时期的胚胎通过冲洗输卵管收集,在冷冻保护剂中的胚胎被吸入冷冻管后投入液氮中,以后用水浴解冻。用不同的冷冻保护剂冷冻保存胚胎后,体外培养能发育到囊胚的胚胎为具有功能活力的正常胚胎。平均发育率（X）和标准差（SD）根据表1－2中的基本数据所得。“A”代表冷冻管中的胚胎回收率,“B”代表回收的胚胎中发育到囊胚内的百分率。各组间的差异显著性通过t测验来评价。5种配方的保护剂CPI、Cpp、CP4、CPS和CPS用于冷冻保存多细胞期胚胎。3…     

小柴胡汤治疗大鼠子宫内膜异位症的实验研究

目的:采用大鼠子宫内膜异位症(EMS)动物模型,探讨中药制剂小柴胡汤(XCHT)对EMS异位内膜的作用。方法:通过透射电镜技术观察XCHT对异位内膜细胞形态结构的影响。结果:中、高剂量XCHT10、15g/kg·d-1组对异位内膜有明显抑制作用,异位内膜体积明显减小(P<0 01),低剂量XCHT5g/kg·d-1组体积也有减小(P<0 05),而对照组体积无明显减小(P>0 05)。透射电镜下可见中、高剂量XCHT组治疗后较多腺上皮细胞出现凋亡的特征,表现为细胞体积变小、核固缩、胞浆和核染色质凝集、密度增高,细胞见凋亡小体,同时间质细胞中也可见一些坏死细胞。结论:XCHT对EMS大鼠异位内膜有明显抑制作用,其作用机制可能是通过调整宿主局部环境中的免疫状态和功能,而诱导细胞的凋亡和坏死。     

精子和酒精对小鼠卵母细胞激活的比较

对不同卵龄的小鼠卵母细胞被精子和酒精激活后的激活率进行了比较。结果显示,卵母细胞对常规的体外受精和酒精的人工激活的激活率存在卵龄的差异。注射hCG后15～24h的卵母细胞容易被酒精的人工刺激所激活,20h卵龄的卵母细胞激活率最高,平均为81．6％,且速即卵裂率也最高,平均为48％,卵龄更大的卵母细胞激活率降低,而13h的卵母细胞难以被酒精激活。另一方面,13～15h的卵母细胞容易被精子激活而受精,卵龄较大的卵母细胞在体外难以被精子激活受精。这表明,精子和酒精对卵母细胞的激活机制有所不同。     

冷藏于4℃的小鼠卵母细胞的受精能力研究

本研究探讨了冷藏于4℃的小鼠卵母细胞的受精能力，NIH雌鼠用10单位的PMSG和10单位的HCG进行超排。卵母细胞和卵丘细胞复合物（OCC）从小鼠输卵管收集，然后，OCC团块转移到Whittingham’s液进行体外受精，或移入Whitten’s液进行冷藏。精子从成熟的雄性小鼠的附睾尾挤出并孵育在37℃中获能。用于体外受精的卵子分为3组。新鲜的卵子是注射HCG后13h收集而得。19h的卵子是注射HCG后19h收集的。冷藏的卵子是在注射HCG后13h收集，并藏存于4℃水浴中6h。授精后观察卵子的结构形态、极体和卵裂情况。授精后次日卵发生卵裂作为受精发生…     

β-hCG重组基因在几种哺乳类细胞中的表达

为探讨用哺乳类细胞表达β-hCG基因。将重组β-hCG基因导入L－1和CNE－2细胞，在L－1细胞中得到10ng／mL的β-hCG，在CNE－2细胞中有7ng／mL的β-hCG，而且β-hCG还能在传代培养的L－1和CNE－2细胞中产生。再将重组β-hCG基因和dhfr基因其导入CHO细胞，在培养液中得到6．85mg／mL的表达量，说明β-hCG重组基因在哺乳类细胞中有表达功能，但尚未获得能稳定表达β-hCG的单克隆CHO细胞株。     

杆状病毒表达的hZP3 B细胞表位嵌合肽的免疫活性研究

为研究杆状病毒系统表达的人透明带ZP3的B细胞表位嵌合肽(BCP)的免疫原性及其抗血清与人透明带的免疫交叉反应，重组z3bcp病毒用于感染sf9细胞以表达BCP。Tricine—SDS—PAGE用于分离感染液中的小相对分子质量表达产物，表达产物用于免疫小鼠制备抗血清，免疫细胞化学试验用于检验抗血清与人卵泡透明带的交叉反应性。结果显示，矽细胞被z3bcp病毒感染后，培养液中分离出一条相对分子质量约为6000的特异带，而正常矽细胞中没有等同的带。免疫细胞化学试验结果显示，该特异肽的抗血清能与人透明带特异结合，表明人透明带BCP嵌合肽在杆状病毒系统中成功表达，表达产物具有抗原性，抗血清能与人透明带特异结合。