高粱种子醇溶蛋白的提取条件

以高粱种子为材料,研究了不同提取剂、提取剂用量、浓度和还原剂浓度对高粱种子醇溶蛋白提取的影响.蛋白浓度测定和SDS PAGE电泳表明,DDT浓度为4%的60％叔丁醇溶液,样品质量比提取剂用量为1∶8（g/mL）是提取高粱种子醇溶蛋白的最佳条件.该条件下,提取高粱属不同种的种子醇溶蛋白,得到的高粱属种子醇溶蛋白的“指纹”图谱,可以用来区分高粱属内的种间差异.     

大麦醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳条件的探索

以栽培大麦和中国近缘野生大麦为材料，用复合提取剂(内含25％2-氯乙醇和1％2-巯基乙醇)对其种子醇溶蛋白过夜提取后制备的样本液，在保持凝胶浓度(18％)不变的基础上，通过改变交联度，催化剂用量，进样量以及电场强度和电泳时间所获得的不同电泳图谱，经比较分析可知，在酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系中，交联度为3．33％，催化剂(0．6％H2O2)用量在26μL～30μL之间，进样量控制在5μL～10μL之间，室温下500V稳压电泳90min左右对醇溶蛋白分离效果好，电泳图谱清晰，分辨率高。实验结果亦表明，适当提高交联度和H2O2用量，有助于增加凝胶硬度，加快凝胶聚合速度，缩短制胶时间。     

小麦谷蛋白亚基的快速提取分离及SDS-PAGE分析

用70％乙醇和50％异丙醇除去醇溶蛋白，以二硫苏糖醇(DTT)为还原剂，在50％异丙醇，0．08mol／L Tris-HCl(pH为8．0)缓冲液中提取总麦谷蛋白亚基，加入丙酮至浓度为40％时，高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)沉淀析出；继续加入丙酮至80％时，析出低分子量麦谷蛋白亚基(LMW-GS)．在3．3％浓缩胶和10％分离胶的不连续体系中进行SDSPAGE电泳，结果表明，该方法可以有效地除去醇溶蛋白对麦谷蛋白亚基电泳分析的背景干扰，HMW-GS和IMW-GS的提取、分离一步完成，操作简便，时间短，对大量小麦样品的HMW-GS和LMW-GS可以快速分离、提纯和鉴定．     

利用两种电泳技术分析大麦品种的醇溶蛋白差异及亲缘关系

利用大麦醇溶蛋白电泳鉴定方法了解大麦各品种间的亲缘关系,采用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对国内18份大麦品种的醇溶蛋白电泳图谱进行了分析。结果表明:从18个供试大麦品种中分别分离出13条和18条迁移率不同的多态性醇溶蛋白谱带。利用各品种在迁移率Rf值不同的谱带存在的明显差异,可将供试18个大麦品种区分开。对醇溶蛋白电泳结果进行聚类分析,结果显示:18份大麦材料在遗传距离(GD)0.49处聚为4个大类,这表明醇溶蛋白电泳技术对大麦品种鉴定和亲缘关系的评价是一种有效的方法。     

小儿腹泻外敷膜提取工艺研究

研究小儿腹泻外敷膜剂的提取工艺.采用双提法(即水提挥发油,醇提生物碱),采用L9(3)4正交设计,以醇浓度、提取时间、提取次数和加醇量为考察因素,并以吴茱萸次碱的质量分数为指标,考察提取的最佳工艺.初步确定挥发油提取为10倍量水,提取6 h;生物碱提取为6倍量质量分数为90%乙醇提取2次,每次1 h.确定了小儿腹泻外敷膜的最佳提取工艺.     

利用两种电泳技术分析番茄品种醇溶蛋白及其亲缘关系

本文利用番茄种子醇溶蛋白电泳图谱鉴定番茄各个品种之间的亲缘关系,采用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳（A-PAGE）和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对枣庄市售10种番茄品种的醇溶蛋白电泳图谱的分析.结果表明：不同物种间的醇溶蛋白谱带存在一定差异且这种差异反映一定的关系.10种番茄醇溶蛋白分离谱带8条,大部分具有5条相同谱带,少部分谱带数量较少,最少谱带4条,经过遗传相似性与遗传多样性分析番茄的亲缘关系,经过遗传多样性聚类分析,将10种番茄在一定水平上,聚为5类.为枣庄番茄品种的亲缘关系分析以及遗传育种工作提供了依据.     

赶黄草总黄酮类化合物的提取纯化工艺研究

以赶黄草为原料,选择单因素和正交试验筛选了赶黄草回流提取和超声提取总黄酮的最佳工艺条件,并对提取出的总黄酮利用聚酰胺树脂进行纯化,筛选出纯化最佳条件.结果显示最佳回流提取条件为:料液比1:15、提取温度60℃、乙醇体积分数60％、提取时间1 h.超声最佳提取条件分别为料液比1:25,提取温度50℃,乙醇体积分数60％,提取时间50 min.聚酰胺树脂的纯化最优条件为:选择60～80目聚酰胺树脂、溶液pH值为4、装柱比例1:15、拌样比例1:3、洗脱溶剂pH值为8、乙醇体积分数为70％,并且乙醇用量需大于3倍量保留体积.通过实验对比和筛选赶黄草黄酮的提取工艺条件和树脂最佳纯化条件,为赶黄草黄酮未来的提取纯化类实验研究提供实验数据参考.     

棉花根总蛋白双向电泳方法的优化

以陆地棉(Gossypium hirsutumL.)根为材料,比较分析了三种总蛋白提取方法及电泳参数和上样量等因素对双向电泳结果的影响.结果表明:选择pH 4⁷IPG胶条,采用丙酮沉淀/2-D Clean-up Kit法提取总蛋白,电泳时设置合适的电压,上样量为250μg蛋白进行双向电泳能够检测到1 000多个清晰的蛋白点,适合做质谱分析.     

蒙古沙冬青根蛋白的提取及双向电泳体系的建立

以蒙古沙冬青根为实验材料,采用TCA/丙酮沉淀法和Tris-饱和酚提取法分别提取根可溶性蛋白.用Bradford法测定蛋白质浓度,计算蛋白提取率,并对所提取的蛋白样品进行双向电泳检测及电泳体系优化.结果表明,选择Tris-饱和酚法提取蛋白,采用24cm、pH5～8的IPG胶条,上样量900μg,可获得分辨率高、重现性好的双向电泳凝胶图.     

小麦种子醇溶蛋白凝胶电泳及其在遗传上的应用

Zillmun等指出:“根据小麦种子醇溶蛋白的凝胶电泳谱带可以鉴定小麦品种”。我们经过试验认为,小麦种子醇溶蛋白凝胶电泳谱带清晰、稳定、重复性好。不同小麦种和品种间醇溶蛋白电泳谱带差异明显,能够反映出小麦基因型的某些特点。     

羊草和苏丹草种子结构的比较研究

采用石蜡切片法，对羊草和苏丹草种子的果皮、种皮、种子内含物、胚的形态结构进行了比较研究。结果表明，羊草和苏丹草种子的果皮和种皮结构有明显差别；营养成分差别不大；胚的形态主要表现为盾片的形态结构差异。     

从rbcL基因序列研究明福1号及其近似种苏丹草的亲缘关系

本实验通过对明福 1号及其近似种苏丹草的叶绿体 rbc L基因序列的测定和变异位点的分析 ,结果表明 :明福 1号 rbc L序列的 G+ C百分含量为 4 2 .93% ,而苏丹草 rbc L序列的 G+ C百分含量为 4 3.0 9% ;明福1号与苏丹草的 rbc L 序列的变异位点很少 ,仅为 4个 ,分别位于第 12 4 bp、6 41bp、84 9bp、880 bp位点上 ,总变异位点占总性状位点 (96 3bp)的 0 .4 1% ;同时 ,明福 1号与苏丹草的相似系数为 0 .997,表明明福 1号与苏丹草有极高的亲缘关系。     

家蚕卵蛋白的 SDS-PAGE 分析(动物科学)

本研究探讨了蛋白质提取方法、十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)条件对家蚕卵蛋白分离效果的影响。分别用裂解液提取法、TCA沉淀法、冷丙酮沉淀法和TCA-丙酮沉淀法制备蛋白质样品,然后进行6%～12%、6%～15%两种梯度胶的SDS-PAGE,获得了不同提取方法和电泳条件下的电泳图谱用以比较家蚕卵蛋白分离效果。结果表明用TCA-丙酮沉淀法除盐,再用含9 mol.L-1尿素、4%CHAPS、1%DTT的裂解液重悬,最适合家蚕卵蛋白提取;6%～12%梯度胶对家蚕卵蛋白的分离较为适宜。利用这一优化方法对家蚕感染微孢子虫的蚕卵和正常蚕卵进行了比较研究,在分子量66 kD和85 kD处找到了与感染微孢子虫相关的蛋白,为进一步进行正常蚕卵和感染微孢子虫蚕卵的蛋白质组学研究奠定了基础。     

一种适用于胡杨叶片非变性蛋白质提取的方法

为探索适用于胡杨叶片非变性蛋白质的提取方法,以采自内蒙古额济纳旗天然胡杨林中胡杨成熟叶片为材料,采用咪唑法、Bis-Tris法、Tris-HCl法和新构建的Tris-SSAD法4种非变性蛋白质提取策略,分别用于提取胡杨叶片蛋白质样品;随后进行第一维非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(1~(st)-DE:Native-PAGE)。相比之下,只有Tris-SSAD法获得了清晰、条带数目较多的Native-PAGE图谱,且结合第二维变性凝胶电泳(2~(nd)-DE:SDS-PAGE)可成功分离出较多蛋白质复合体亚基或相互作用蛋白质分子,证明了Tris-SSAD法非变性温和提取特性。研究建立并优化了适用于胡杨叶片的非变性蛋白质提取方法,为后续进一步分析蛋白质与蛋白质相互作用及蛋白质复合体功能提供了实验基础。     

适合杨树叶片蛋白质组学样品制备方法的比较

【目的】为了提高植物叶片中低丰度蛋白质的检测效率,建立有效的杨树叶片蛋白质组学分析的蛋白质提取方法。【方法】利用三氯乙酸-丙酮结合PEG分级提取方法和SDS-酚结合PEG分级提取方法对杨树叶片蛋白质进行提取,并采用SDS-PAGE和双向凝胶电泳(2-DE)对提取结果进行评价。【结果】SDS-PAGE实验结果显示,三氯乙酸-丙酮结合PEG方法优于SDS-酚结合PEG分级方法。三氯乙酸-丙酮结合PEG分级和非结合PEG分级提取蛋白质的双向电泳结果表明,PEG分级能有效地去除高丰度蛋白质Rubisco,提高低丰度蛋白质的检测。三氯乙酸-丙酮结合PEG分级法检测的蛋白质比非结合PEG分级法多90个蛋白质点。【结论】以LTQ-Orbitrap XL分析三氯乙酸-丙酮结合PEG分级分离的一些蛋白质显示,三氯乙酸-丙酮结合PEG分级对于2-DE和MS鉴定低丰度蛋白质是一种有效的分离方法。     

蜀黍属Soughum种子细胞结构研究

蜀黍属Soughum的假高梁Sorghum halepense是世界上十大恶性杂草之一,也是我国对外植物检疫的对象,在对外检疫中,常见其外部形态特征破损,也常与其同属不同种,检疫地位截然不同的近似种混淆,而难以鉴认。本研究通过对同属的假高梁及其近似种苏丹草Sorghum sudanense、拟高梁Sorghum propin quum等同属不同种种子,采用形态解剖方法,对它们表皮、上皮细胞、胚体与胚乳等组织细胞结构进行比较研究,以区别种间差异,为检疫鉴定提供依据。     

两种冬凌草种子的生物学特性及蛋白质电泳的比较研究

为确定冬凌草优质种子,并揭示其种子发育成熟的内在机制,采用常规方法和SDS-PAGE蛋白电泳技术,对两种不同类型的冬凌草种子生物学特性及其蛋白质进行了研究.结果表明,两种类型的种子种皮颜色明显不同,主要分为褐色具花纹种子和褐色种子;且褐色花纹种子的千粒重、发芽率、活力等性能明显高于褐色种子;种子蛋白研究表明,褐色花纹种子较褐色种子蛋白表达量丰富,这可能是冬凌草种子发育过程中是由于营养物质积累或蛋白质表达的不同而导致其出现两种不同程度的发育类型,从而导致其生物学特性的差异。     

葡萄籽中活性成分的提取及性能研究

用乙酸乙酯/水作提取剂从葡萄籽中提取活性成分。研究了原料处理方式对产物提取率的影响,探讨了适宜的沉淀条件,考察了产物结构和性能。结果表明:原料粉碎浸泡后提取,可获得更高的提取率(0.475%);为获得正常的结晶产物,浓缩液应充分脱水干燥。     

影响南瓜种子蛋白溶出率几种因素的初步探讨

探讨了料液比、pH值、温度、时间以及介质等因素对南瓜种子蛋白质溶出率的影响 .结果表明 :蛋白质的溶出率受pH值、介质的影响较大 ,其次为料液比、浸提温度和浸提时间 .初步确定南瓜种子蛋白质提取的较佳条件为 :料液比 1∶1 0 0 ,pH值 1 2 0的碱性条件下 ,37℃浸提 1 0h .