苏丹草种子醇溶蛋白提取和电泳条件优化

以苏丹草(Sorghum sudanense)种子为材料,以蛋白质提取率和电泳图谱效果为标准,分析不同提取剂、种子粉末质量(g)与提取剂体积(mL)的比例、还原剂二硫苏糖醇(dithiothreito,DTT)的浓度对种子醇溶蛋白提取效果的影响,同时研究上样量、不同胶浓度对SDS-PAGE检测蛋白的影响.结果表明,苏丹草的最佳提取剂为含有0.2%DTT的70%正丙醇,种子粉末质量与提取剂体积的最佳比例为1∶8.在上样量适当的情况下,12%分离胶电泳可以得到清晰的电泳图谱.以苏丹草种子为材料所建立的醇溶蛋白提取和电泳条件,也可应用于其他几种常见的禾本科种子醇溶蛋白的分析,并可得到较好的分辨率.     

4种花生蛋白的分级提取及其结构的扫描电镜观察

以花生粕为原料,采用超声辅助分级提取法研究花生清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白的提取工艺,并利用扫描电镜观察其表面结构.研究结果表明,花生清蛋白的较佳提取条件:提取温度为50℃,时间为12 min,料液比为1∶12,提取率为53.59％,清蛋白质量分数为72.14％;花生粕球蛋白较佳提取条件:提取温度为50℃,时间为10 min,NaCl溶液质量浓度为0.4 g/L,料液比为1∶10,提取率为9.03％,球蛋白质量分数为73.20％;花生醇溶蛋白较佳提取条件:乙醇溶液体积分数为70％,提取时间为12 min,料液比为1∶6,提取率为8.62％,醇溶蛋白质量分数为64.28％;花生粕谷蛋白较佳提取条件:提取温度为45℃,时间为15 min,pH值为8,料液比为1∶10,提取率为4.85％,谷蛋白质量分数为68.79％.通过扫描电镜观察,4种花生蛋白表面具有不同的结构.     

玉米淀粉渣中醇溶蛋白提取工艺优化

玉米淀粉渣中富含醇溶蛋白,醇溶蛋白具有广泛的应用价值,但不溶于水.因此,研究其提取工艺有重要意义.以玉米淀粉渣为原料,优化玉米醇溶蛋白的提取工艺,以物料比、提取温度和提取时间进行单因素实验,考察其对提取醇溶蛋白的影响.利用三因素三水平的正交试验,以吸光度为指标,确定了最优条件为物料比1:13、提取温度70℃、提取时间1.5 h.     

高粱醇溶蛋白对浓香型白酒窖泥味的消减机制

窖泥味在浓香型白酒中被视为一种异臭味,添加高粱醇溶蛋白对浓香型白酒中的窖泥味有消减作用,对高粱醇溶蛋白消减窖泥味的作用机制进行了研究。浓香型白酒中的3-甲基吲哚和4-甲基苯酚是使其产生窖泥味的关键气味物质。香气轮廓实验表明,高粱醇溶蛋白的加入可显著降低浓香型白酒中的窖泥味,而对其他风味无显著影响。采用顶空固相微萃取法分析发现,高粱醇溶蛋白可使模拟酒样中的3-甲基吲哚和4-甲基苯酚的挥发度分别降低38.99%和46.39%。且当添加200mg/L高粱醇溶蛋白后,3-甲基吲哚和4-甲基苯酚的气味阈值分别提高到1.50μg/L和0.31μg/L,气味阈值分别为添加高粱醇溶蛋白前的4.59和1.73倍。为进一步解释高粱醇溶蛋白对窖泥味物质消减作用机制,分别在25、45、65℃下进行紫外- 可见分光光度法分析,发现高粱醇溶蛋白与3-甲基吲哚、4-甲基苯酚可自发络合形成复合物,高粱醇溶蛋白与3-甲基吲哚络合物的生成反应为焓变驱动,高粱醇溶蛋白与4-甲基苯酚络合物的生成反应为吉布斯自由能驱动。研究应用分子对接模型实验表明:高粱醇溶蛋白分子表面的疏水口袋通过空间匹配和分子间作用力将3-甲基吲哚和4-甲基苯酚包裹或连接在内,主要的分子间相互作用力为氢键和疏水作用。希望研究结果可为降低浓香型白酒中的异臭味提供解决方案,为食品中异臭味成分的消减研究提供新思路。     

大麦醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳条件的探索

以栽培大麦和中国近缘野生大麦为材料，用复合提取剂(内含25％2-氯乙醇和1％2-巯基乙醇)对其种子醇溶蛋白过夜提取后制备的样本液，在保持凝胶浓度(18％)不变的基础上，通过改变交联度，催化剂用量，进样量以及电场强度和电泳时间所获得的不同电泳图谱，经比较分析可知，在酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系中，交联度为3．33％，催化剂(0．6％H2O2)用量在26μL～30μL之间，进样量控制在5μL～10μL之间，室温下500V稳压电泳90min左右对醇溶蛋白分离效果好，电泳图谱清晰，分辨率高。实验结果亦表明，适当提高交联度和H2O2用量，有助于增加凝胶硬度，加快凝胶聚合速度，缩短制胶时间。     

灵芝主要有效成分超声提取工艺的优化

目的研究灵芝三萜和灵芝多糖的超声提取工艺.方法采用超声波辅助法,探讨了提取剂的pH(碱醇)、提取剂用量、提取温度、超声时间4个因素对灵芝三萜提取效果的影响,并用无水乙醇做对照实验.探讨超声时间、提取温度、提取剂用量3个因素对灵芝多糖提取效果的影响.结果醇的pH和超声时间对灵芝三萜的提取效果有明显影响,其他两因素影响效果不大;提取时间和提取温度两个因素对灵芝多糖提取效果达到极显著水平.结论灵芝三萜最佳提取条件为:乙醇用量30倍+提取温度60℃+提取时间60 min+碱醇pH8.5,对无水乙醇调pH可以明显提高乙醇提取灵芝三萜的能力;灵芝多糖提取最佳条件为:超声提取时间55 min+提取温度55℃+提取剂用量50倍.     

小麦种子醇溶蛋白凝胶电泳及其在遗传上的应用

Zillmun等指出:“根据小麦种子醇溶蛋白的凝胶电泳谱带可以鉴定小麦品种”。我们经过试验认为,小麦种子醇溶蛋白凝胶电泳谱带清晰、稳定、重复性好。不同小麦种和品种间醇溶蛋白电泳谱带差异明显,能够反映出小麦基因型的某些特点。     

品种和发芽条件对高粱芽的蛋白质水解活性的影响

麦芽的蛋白酶在酿造上,尤其在发酵期间对酵母生长所必需的营养物质——游离氨基酸的形成十分重要,麦芽中蛋白质水解活性受许多内外因素,如品种、麦粒质量和发芽条件的影响.最近,本实验室建立了高粱芽的蛋白酶和羧肽酶活性的测量方法,这些检测方法包括应用新的酶提取剂,3.33mM二硫苏糖醇加0.6M碘化锂,并使用底物高粱醇溶谷蛋白.本文就品种和发芽条件对高粱芽的蛋白酶和羧肽酶活性的影响作一报导.     

利用两种电泳技术分析番茄品种醇溶蛋白及其亲缘关系

本文利用番茄种子醇溶蛋白电泳图谱鉴定番茄各个品种之间的亲缘关系,采用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳（A-PAGE）和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对枣庄市售10种番茄品种的醇溶蛋白电泳图谱的分析.结果表明：不同物种间的醇溶蛋白谱带存在一定差异且这种差异反映一定的关系.10种番茄醇溶蛋白分离谱带8条,大部分具有5条相同谱带,少部分谱带数量较少,最少谱带4条,经过遗传相似性与遗传多样性分析番茄的亲缘关系,经过遗传多样性聚类分析,将10种番茄在一定水平上,聚为5类.为枣庄番茄品种的亲缘关系分析以及遗传育种工作提供了依据.     

氮肥用量对啤酒大麦籽粒蛋白质和醇溶蛋白组分含量的影响及其与β-淀粉酶活性的关系

氮肥用量显著影响籽粒蛋白质含量、B醇溶蛋白和C醇溶蛋白组分含量，而对D醇溶蛋白组分含量的影响不显著；随着氮肥用量增加，籽粒蛋白质含量、B醇溶蛋白和C醇溶蛋白组分含量显著增加，D醇溶蛋白组分含量增加相对较少。品种对籽粒蛋白质含量、C和D醇溶蛋白组分含量的影响要比氮肥用量大，而B醇溶蛋白组分含量的差异主要是由氮肥用量的差异引起的。氮肥用量显著影响千粒重和β-淀粉酶活性，而对产量的影响不显著；随着氮肥用量增加，千粒重和β-淀粉酶活性显著增加，而产量的变化相对较小。品种对千粒重和β-淀粉酶活性的影响要比氮肥用量大。本研究中未发现β-淀粉酶活性和籽粒蛋白质含量之间的正相关关系，     

超声波辅助萃取高粱红色素的研究

从高粱壳中提取高粱红色素,通过超声波预处理,采用单因素试验和L9（34）正交试验,考察固液比,提取温度,提取时间,乙醇浓度对高粱红色素提取率的影响。确定最佳提取工艺为：超声波频率20-25 kHz,功率100 W,每次30 s,间隔10 s,超声波输出总时间20 min,固液比1：8,提取温度60℃,提取时间1 h,乙醇浓度75%,最大提取率为15.36%。较传统的乙醇提取法高6.83%。     

不同盐胁迫对高粱种子萌发及胚根胚芽的影响

试验研究了不同浓度(0,50,100,150,200,300mmol.L-1)NaCl和Na2CO3胁迫对高粱种子萌发和幼苗生长的影响。结果表明,高粱种子的发芽率随着盐碱浓度的增加呈下降趋势,其中Na2CO3处理下的高粱种子萌发率下降幅度明显大于NaCl。高粱幼苗生长势均与盐碱浓度呈极显著的负相关,但表现不同:随着NaCl浓度的增加,高粱的胚根长和胚芽长逐渐下降,而Na2CO3胁迫下,下降速率更快,在50mmol.L-1浓度下胚根停止伸长。实验结果表明碱性盐胁迫对高粱生长的抑制作用大于中性盐胁迫。     

家蚕卵蛋白的 SDS-PAGE 分析(动物科学)

本研究探讨了蛋白质提取方法、十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)条件对家蚕卵蛋白分离效果的影响。分别用裂解液提取法、TCA沉淀法、冷丙酮沉淀法和TCA-丙酮沉淀法制备蛋白质样品,然后进行6%～12%、6%～15%两种梯度胶的SDS-PAGE,获得了不同提取方法和电泳条件下的电泳图谱用以比较家蚕卵蛋白分离效果。结果表明用TCA-丙酮沉淀法除盐,再用含9 mol.L-1尿素、4%CHAPS、1%DTT的裂解液重悬,最适合家蚕卵蛋白提取;6%～12%梯度胶对家蚕卵蛋白的分离较为适宜。利用这一优化方法对家蚕感染微孢子虫的蚕卵和正常蚕卵进行了比较研究,在分子量66 kD和85 kD处找到了与感染微孢子虫相关的蛋白,为进一步进行正常蚕卵和感染微孢子虫蚕卵的蛋白质组学研究奠定了基础。     

高粱3853-1与高粱3801-2生理指标及抗性分析

在正常及低温胁迫条件下，对高粱3853—1与高粱3801—2苗期超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）及游离脯氨酸、可溶性糖、丙二醛（MDA）等指标进行了测定与分析，结果表明：在正常生长环境下，高粱3853—1的SOD与CAT的活性以及游离脯氨酸和可溶性糖的含量均大于高粱3801-2，MDA的含量低于高粱3801—2；在低温胁迫下，高粱3853—1与高粱3801—2叶片中MDA的含量增高．其余4项指标都比正常环境下低；高粱3853-1叶片中SOD与CAT的活性、可溶性糖及游离脯氨酸的含量均高于高粱3801—2；与高粱3801—2相比较，高粱3853—1有较强的抗性．     

不同类型禾谷类作物幼芽中甜菜碱醛脱氢酶蛋白含量差异

用Western blot方法分析了甜菜碱生物合成酶之一甜菜碱醛脱氢酶（BADH）在同基因型禾谷类作物——小麦、玉米、水稻、高粱和大麦幼芽中蛋白含量的变化，结果表明BADH在禾谷类作物种子萌发早期（幼芽）中普遍存在，并有较高的含量．不同类型的作物BADH蛋白含量不同，在同一类型作物的不同品种间也表现出明显的差异．     

北沙参免疫活性多糖制备方法研究

为了确定北沙参免疫活性多糖的最佳制备方法,采用4种方法制备北沙参多糖样品,并进行体外小鼠脾淋巴细胞增殖实验,对各样品进行免疫活性比较。以提取率及体外小鼠脾淋巴细胞增殖率为指标,分析95%乙醇回流除去小分子、除蛋白及不同浓度醇沉等步骤的必要性,确定北沙参免疫活性多糖最佳制备方法。通过提取率及体外小鼠脾淋巴细胞增殖率比较,经沸水提取、浓缩和干燥后获得的北沙参免疫活性多糖样品提取率最高,达33.15%;且该样品对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用最强,在62.5 μg/mL浓度下增殖率达到33.93%。结果显示北沙参免疫活性多糖的最佳制备方法为沸水提取、浓缩并干燥即可,无需进行95%乙醇回流除去小分子、除蛋白及不同浓度醇沉等步骤。     

高粱黄酮的提取及其测定方法的建立

选用乙醇作为提取溶剂,对高粱中总黄酮进行提取,研究乙醇浓度、浸提温度、浸提时间、料液比对高粱黄酮提取率的影响.并通过单因素及正交试验,确定了高粱黄酮的最佳提取工艺:乙醇浓度为65%,80℃下浸提2 h,料液比为6∶100.此工艺下提取的高粱黄酮含量为0.54%.     

铁皮石斛原球茎多糖提取及脱蛋白工艺研究

研究了铁皮石斛原球茎培养物中多糖提取工艺并进行了不同脱蛋白方法的比较?以提取温度?提取时间和料液比三因素进行正交实验,得到多糖最佳提取工艺为提取温度90℃?提取时间60 min?料液比1∶40(g/mL),多糖提取率78.51%?通过一系列单因素实验和正交优化实验,分析比较Sevage法?盐酸法?三氯乙酸法和木瓜蛋白酶法脱蛋白工艺?结果显示,Sevage法第5次洗脱效果最好,多糖质量分数43.81%,蛋白质质量分数9.67%;盐酸在体积分数25%时效果最好,多糖质量分数52.17%,蛋白质质量分数为4.82%;三氯乙酸质量浓度为0.03 g/mL时,多糖质量分数最高35.50%,蛋白质质量分数7.34%;木瓜蛋白酶法反应时间90 min?温度70℃?酶含量30U时,多糖质量分数85.01%,蛋白质质量分数为5.89%,效果最为理想?     

藜(灰菜)叶蛋白提取试验研究

对藜的利用做了研究和探讨,试验采用加热絮凝的方法,从藜的地上部分提取叶蛋白,对不同生育期、不同收获时间、不同存放时间对藜叶蛋白提取率的影响进行了实验研究.结果表明:在开花期提取叶蛋白,效率较高(3.26%),提取物纯度较高(产品中CP为51.86%),有效成分含量大(8.867g/株);在开花期白天不同时间收获的藜,叶蛋白提取率差异不显著(P>0.05);采集物应在24h内及时进行提取,延长时间会降低叶蛋白提取量和品质.     

地锦草不同提取部位抗皮肤癣菌作用

为研究地锦草不同提取部位的体外抗皮肤癣菌作用。采用大孔吸附树脂梯度洗脱分离法对地锦草乙醇提取物进行洗脱分离,得到五个洗脱部位;根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的《产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案》(M38-A),测定地锦草5个提取部位对17株临床常见皮肤癣菌的最低抑菌浓度值(MIC)。结果表明地锦草5个提取部位均有显著的抗真菌作用,其抗真菌有效物质主要集中在20%乙醇和40%乙醇洗脱部分。由此可知,地锦草不同提取部位对试验菌株的生长具有明显地抑制作用。