甲醛滴定法测定牛血清白蛋白的酶解度

建立了一种测定蛋白质酶解度的方法,介绍了甲醛滴定法测定酶解度的四个关键环节：酚酞指示剂配制、基准液配制、碱液标定、甲醛滴定与酶解度计算。依据蛋白质酶解度的定义与相关计算公式,利用甲醛滴定法测定并计算出胰蛋白酶对底物BSA在本实验中的特定酶解条件下的酶解度为6.31。     

不同来源氨基移换酶等电点的预测

借助一个经过改进的可预测蛋白质及多肽等电点(pI)的数学模型,并辅以相应的计算机程序求解,我们已对多种蛋白质及酶的pI进行了计算或预测,计算结果和文献报道的pI实验测定值比较吻合。 氨基移换酶,又称转氨酶是一类催化转氨基反应的酶。本文以动物组织中天冬氨酸氨基移换酶(aspanate aminotransferasc)为重点,通过理论计算给出了12种天冬氨酸氨基移换酶及其他4种转氨酶的pI预测值,旨在为有关这些转氮酶的结构与功能研究及其分离、纯化工作提供有益的参考。     

构建杂化酶体系解析对羟基苯乙酸脱羧酶小亚基的功能

对羟基苯乙酸(HPA)脱羧酶是一类甘氨酸自由基脱羧酶,催化前体对羟基苯乙酸或吲哚乙酸的脱羧反应,形成终产物对羟基甲苯和对甲基吲哚。由于其蛋白质结构中小亚基(HpdC)的存在,使其显示了一些不同于其他已知的几种甘氨酸自由基体系的特性,被认为是一类新型的甘氨基自由基酶体系。前期的研究结果初步显示了HpdC在整个脱羧酶体系中的重要性,但缺乏系统的实验验证。通过构建系列杂化脱羧酶(包括组合杂化酶体系与嵌合杂化酶体系)高表达质粒,对相应的编码蛋白质进行分离纯化以及酶活性检测等,探究了小亚基在整个脱羧酶体系中的功能。研究结果证明,小亚基HpdC的存在,一方面直接影响整个编码蛋白质的溶解性及复合物的稳定性,另一方面则通过介导脱羧酶高级聚合状态的形成,决定着酶的催化活性。     

两种用于液质联用分析的蛋白质酶解处理效果比较

【目的】分析和评估两种蛋白质溶液酶解方法,为蛋白质组学研究中的大规模质谱鉴定分析建立一种稳定的样品制备技术。【方法】分别使用TEAB法(实验组A)和TFE法(实验组B)对牛血清白蛋白(BSA)进行还原、烷基化和溶液酶解,再用LTQ-Orbitrap高分辨率质谱仪采集BSA酶切肽段信息,比较两种方法得到的数据信息,分析肽段数目、可变修饰位点和蛋白质覆盖率。【结果】实验组A(TEAB法)获得36个肽段、39个修饰位点,蛋白质平均覆盖率为59.31%;实验组B(TFE法)获得27个肽段、27个修饰位点,蛋白质平均覆盖率为47.83%,实验组A的数据指标与实验组B差异显著。【结论】采用TEAB法酶切体系能实现蛋白质高效率酶切,达到获得较高肽段覆盖率的目的,可为蛋白质组学后期的质谱分析鉴定奠定实验基础。     

山楂单宁酶法降解工艺的研究

为改良山楂汁的色泽澄清度及口感,采用向山楂匀浆中加入不同比例的单宁酶以及控制不同的温度与时间酶解山楂中的单宁,测定酶解之后的单宁含量,通过单因素和正交实验优化工艺条件,得到酶解单宁的最佳条件.结果表明:酶解温度45℃、单宁酶在山楂匀浆中体积分数为0.4%、酶解时间为120 min时为最佳酶解组合.     

奶粉品质鉴定——FTIR光谱法和杜马斯燃烧法联用

我国现行国家标准GB 5009.5—2016《食品中蛋白质的测定》中的杜马斯(Dumas)燃烧法是先将样品燃烧测出含氮量,然后根据氮元素与蛋白质换算系数计算蛋白质的含量,如果添加含氮量高的物质,如三聚氰胺,就可以测出较高的"蛋白质含量".采用普通FTIR光谱定性鉴别出奶粉的主要组成成分,然后用杜马斯燃烧法准确测出奶粉中的氮元素和碳元素含量,通过蛋白质换算系数计算出蛋白质含量,可以避免上述由于添加违规化学物质造成测定蛋白质含量虚高的结果;同时通过C/N元素含量比,进一步印证奶粉中的营养成分组成.     

电流型酶电极生物传感器抗可逆抑制剂干扰的测定方法

电流型酶电极生物传感器在工业领域的应用中经常会遇到酶活性抑制剂干扰问题,在存在酶活性抑制剂的环境下,用酶电极生物传感检测,分析结果会显著偏低。根据电流型酶电极生物传感器的检测原理,设计了一种抗抑制剂干扰的测定方法,传感器正常定标完成后,先按正常方法进行测定,然后用样品加标样进行第二次测定,两次测定具有相同的酶抑制剂环境。通过两次测定结果比较,算出第二次测定所加标样的响应结果,计算出抑制剂对酶活的抑制系数,最终通过第一次测定结果和抑制系数计算出样品中待测物的浓度。这种测定方法能有效消除酶抑制剂对分析结果的影响,拓展酶电极生物传感器在工业领域中的应用范围。     

溶菌酶标准酶活曲线测定方法的改进

天然溶菌酶活性（标准酶活）的测定是蛋白质复性研究过程中的一个关键步骤。为了增加测定数据的准确性和可比性,改进了测定标准酶活的方法。在固定其他条件的前提下,对于影响标准酶活的重要因素-温度,采用空调控制室温的方法,使其规律性由低到高变化。同时将测活液放置在与所控制室温相同的水浴环境中保持温度,测出各种温度下曲线的斜率,用直线进行拟合。对于其他没有测定的温度点,可以从拟合曲线中求出。这样,通过一组实验便可以得到任意温度下的标准酶活。     

莲子蛋白酶解的扩散-反应动力学

为了探索莲子蛋白质的酶水解动力学特性,于温度为55℃和pH为5.0的条件下,用木瓜蛋白酶酶解莲子蛋白研究酶解莲子蛋白的拟态条件下的米氏常数Km,构建考虑底物抑制和无抑制等影响因素下的扩散-反应动力学模型.研究结果表明:酶和底物在反应体系中的扩散影响酶解反应;当底物初始质量浓度高于13.63 g/L时,反应底物对酶解产生抑制作用;建立的数学模型能够合理地描述和解释莲子蛋白降解的动力学过程,为确定酶解反应的各种参数提供依据.     

碱性蛋白酶对小麦麸皮中蛋白质的酶解作用

采用碱性蛋白酶降解小麦麸皮中的蛋白质成为可溶性组分,通过水洗过滤分离将其除去.以小麦麸皮中蛋白质残留量为考察指标,对酶解过程中的影响因素进行单因素和正交设计分析,优化工艺参数组合.通过比较分析后得到结论,采用碱性蛋白酶酶解分离小麦麸皮中蛋白质,酶解后小麦麸皮中蛋白质残留量仅为0.62%.     

复酶水解鹅血工艺条件的优化

研究了中性蛋白酶和木瓜蛋白酶对鹅血液的水解作用,并分析了酶用量、温度、时间、pH值等因素对鹅血酶水解的影响。结果表明,双酶水解效果较好,确定了其最适宜的酶解条件：中性蛋白酶,酶底物浓度比（E／S）为4000U／g,pH值为7．0,温度为55℃,时间为5h;木瓜蛋白酶,酶底物浓度比（E／S）为6000U／g,pH值为7．5,温度为50℃,时间为4h。     

中国毛虾木瓜蛋白酶水解的工艺条件

以水解度和总氮回收率为指标,研究了单酶水解中国毛虾的工艺条件,分析了酶解温度、加酶量、料水比、酶解时间四因素对中国毛虾蛋白水解的影响。通过正交试验,确定最佳水解条件。综合考虑,木瓜蛋白酶水解中国毛虾的最适条件为：温度55℃,加酶量0．5％,料水比1：4,水解时间3h。在此条件下,中国毛虾的水解度为30．69％,总氮回收率为68．82％。     

酶解法制备大豆低聚肽工艺的研究

以大豆分离蛋白为原料,采用酶解法对大豆分离蛋白进行水解制备大豆低聚肽.分别筛选出制备大豆低聚肽的最佳单酶、双酶复合.通过单因素和正交试验结果分析,确定了酶解温度55℃,水解时间2 h,酶的复配比例为2∶1,pH值为6.0,为最佳工艺条件.     

玉米肽螯合硒元素的制备工艺及其保肝作用研究

研究玉米肽酶解、玉米肽螯合硒元素的工艺以及玉米肽螯合硒元素的保肝作用。通过单因素、正交试验法考察优化玉米肽的酶解工艺,响应面法优化玉米肽螯合硒元素的制备工艺,并通过四氯化碳肝损伤的小鼠模型考察玉米肽螯合前后对肝脏的保护作用。当玉米蛋白质量分数为10%,在适宜的条件下加入3%菠萝蛋白酶酶解再加入2%胰蛋白酶酶解,最佳酶解条件下玉米蛋白的水解度为38.15%。在80 ℃,pH 8.05和玉米肽与硒摩尔比为2:1的条件下螯合1.5 h,玉米肽与硒元素螯合率最高（49.08%）。在保肝作用研究中,当玉米肽螯合硒元素的使用剂量为200 mg/kg时,保肝作用显著。     

酶解核桃仁制备低分子肽

以核桃仁为原料, 采用酶解技术, 经蛋白质提取、 酶解、 分离等工序制备高质 量低分子肽制品. 蛋白酶水解核桃仁的最佳条件为： 温度40 ℃、 pH 9、 底物浓度40 mg/ mL、 酶量150 U/g, 反应时间2 h, 在此条件下核桃蛋白质的水解度约为20%.     

酶水解麦糟蛋白制备可溶性肽工艺研究

对碱性蛋白酶水解麦糟蛋白制备多肽的工艺条件进行了研究。通过单因素实验和正交实验,确定了较佳工艺条件：酶解pH10,加酶量3500u/g,酶解温度50℃,酶解时间20min。在此条件下,麦糟蛋白的水解度（DH）达22.18%,氮溶指数（NSI）达23.68%。     

玉米芯中木聚糖水解制备D-木糖的试验研究

研究了利用玉米芯为原料制备D-木糖的试验条件.经过详细的实验条件考察,得知玉米芯中木聚糖水解为D-木糖的最佳水解条件:硫酸质量分数为2.5%,反应温度为110℃,玉米芯质量(g)和硫酸体积(mL)的比值即固液比为1∶8,反应时间为3 h.木聚糖的水解率达到97.89%.水解液经过石灰水中和、活性炭脱色、乙醇洗涤等过程的脱毒处理,纯度可以达到97.8%,木糖的提纯率为57.6%.     

假交替单胞菌κ-卡拉胶酶的酶解工艺优化及产物分析

为探索假交替单胞菌κ-卡拉胶酶的酶解工艺,以κ-卡拉胶为底物,还原糖生成量为评价指标,对酶解工艺进行优化。采用3,5-二硝基水杨酸法和苯酚 硫酸法分别测定还原糖和总糖含量,计算酶解产物的平均聚合度,并利用质谱鉴定酶解产物。结果显示,假交替单胞菌κ-卡拉胶酶降解κ-卡拉胶的优化工艺条件为:加酶量为0.35 U（反应体系5 mL）,反应温度为40 ℃,反应pH=8.0,κ-卡拉胶底物质量浓度为9 g/L。在此条件下,酶解反应240 min后产生的还原糖质量浓度为1.531 g/L,酶解产物的平均聚合度为2。该κ-卡拉胶酶酶解反应的Km=2.07 g/L,Vmax=7.25 U/mg。质谱分析显示,假交替单胞菌κ-卡拉胶酶降解κ-卡拉胶的产物为κ-卡拉胶二糖和κ-卡拉胶四糖。     

膨化饲料中粗脂肪含量测定方法的研究

目的探讨膨化饲料中粗脂肪含量最适的测定方法。方法采用酸水解法和索氏抽提法分别测定膨化猴料、膨化犬料、颗粒鼠料和颗粒兔料的加工前粉料及其成品料中粗脂肪的含量。结果酸水解法测定的膨化猴料粗脂肪含量极显著高于索氏抽提法的测定结果(P<0.001),膨化犬料粗脂肪含量的测定值酸水解法显著高于索氏抽提法(P<0.05)。而对于膨化前的犬混合粉料和猴混合粉料,两种方法的脂肪含量测定结果均差异不显著(P>0.05)。索氏抽提法和酸水解法测定颗粒料加工前粉料及加工后成品料中粗脂肪含量值均差异不显著(P>0.05)。酸水解法测定的饲料加工前后粗脂肪损失率均低于索氏抽提法的测定值。结论酸水解法能更准确的测定膨化饲料中粗脂肪的含量。