产广谱高效多烯类抗真菌抗生素的纺锤链霉菌SD 07(Streptomyces netropsis)的分离及鉴定

从山东省济南市南部山区土壤中分离得到1株具有广谱抗真菌活性的链霉菌SD 07菌株。根据形态特征、生理生化反应和16S rDNA序列分析结果,链霉菌SD 07为定为纺锤链霉菌(Streptomyces netropsis)。分离纯化了SD 07?产生的抗真菌活性成分并获得其结晶CA SD07。抗真菌活性检测结果发现： CA SD07对酵母菌、担子菌、接合菌等多种真菌具有广谱抗菌作用。对CA SD07进行性质研究发现,抗真菌活性成分CA SD07抗菌谱广且抗菌活性高(约等于两倍的两性霉素B),是戊烯和七烯混合的多烯大环内酯类抗真菌抗生素。     

山东链霉菌产抗真菌物质的理化性质的初步研究

从土壤中筛选得到1株产广谱抗真菌物质山东链霉菌(Streptomyces shandongensissp．nov)，该菌代谢产物对多种植物病原真菌有很强的抗菌作用．研究了温度及pH变化、UV照射对该菌发酵液中抗菌物质的稳定性的影响；并利用pH纸层析等多种层析技术研究了该抗菌物质的水溶性、离子特性等一些理化性质，为这一农用抗生素的进一步纯化和结构测定提供依据．     

链霉菌NG-715抗真菌活性物质提取工艺的初步研究

为了探讨链霉菌NG-715所产抗真菌活性物质的存在部位,以及溶媒萃取法对活性物质进行分离的效果,以链霉菌NG-715发酵液为材料,那他霉素为对照抗生素,黑曲霉为指示菌进行生物活性测定.结果表明,链霉菌NG-715所产抗真菌活性物质主要存在于菌丝体中,酯类和醇类对其萃取效果较好.用乙酸乙酯对抗真菌活性物质进行两次萃取后,得率为94%.     

树脂法提取链霉菌NG-715发酵液中抗真菌组分的研究

探讨树脂法提取链霉菌NG—715发酵液中抗真菌组分的工艺条件。采用3种大孔树脂吸附链霉菌NG—715发酵液提取液中抗真菌活性物质,选取最佳树脂进行吸附条件优化,以黑曲霉为指示菌测定抗真菌活性物质含量。结果 HP—10树脂吸附效果较好,其工艺条件为:1吸附前调节pH值至8.0;2树脂静态吸附15 h为佳;3吸附容量为686.79μg/g湿树脂;4最佳上样量与树脂比例为10∶1;5可用无水乙醇洗脱;6上样量与洗脱液体积比为2∶1;7最佳吸附流速为1.5 mL/min;8树脂可重复使用5次;9终产物纯度为53%。本研究为该菌所产抗真菌活性物质单体的进一步高效分离提供了有益的实验数据。     

抗真菌抗生素F126—B

抗真菌抗生素F_(126-B)由有待鉴别的真菌F_(126)所产生,发酵液经乙酸乙酯提取、纯化后得到淡黄色粉末,用TLC和HPLC证实为含有三个组分的复合物,其中主要组分B由氧化铝柱层析分出,通过性质试验和~(13)CNMR,F_(AB-MS)测定,初步确定此组分为有一不饱和脂肪酸侧链的环肽化合物,其环肽由14种氨基酸和两种未知的氨基酸组成。在体外试验证实它对细菌无抗菌活性,对酵母、霉菌和真菌有良好的抗菌作用,LD_(50)(ⅳ)为10～20 mg/kg,与相关的抗真菌抗生素相比,均有差别,因此初步认为是一种新的抗真菌抗生素。     

不同荧光蛋白基因标记利迪链霉菌

 利迪链霉菌（Streptomyces lydicus）A01 是一株分离自北京郊区对植物病原真菌具有广谱抑制作用的放线菌,在植物真菌病害防治中具有良好的应用前景。为了检测红霉素启动子在利迪链霉菌A01 中的活性,为后期对菌株A01 进行遗传改造提供技术支持,同时对生防菌A01 进行遗传标记以研究和阐明其在生态环境中的生物学行为规律,本实验采用两亲本接合的方法,将增强绿色荧光蛋白（EGFP）和红色荧光蛋白（RFP）基因片段克隆到携带红霉素启动子（ermE^*）的链霉菌表达载体pIB139 中,成功构建了以egfp 和rfp 为报告基因的重组载体pIB139-EGFP 和pIB139-RFP,并转化利迪链霉菌A01,突变株在荧光显微镜下观察到较强的绿色荧光和红色荧光,同时PCR 鉴定结果正确。这表明重组载体pIB139-EGFP 和pIB139-RFP 成功转入菌株A01,并且ermE^*启动子成功启动egfp 和rfp 基因表达。     

草果精油成分鉴定及其抗菌活性研究

Clevenger法萃取草果获得草果精油,采用GC-MS分析检测出38个成分,通过保留指数解析出占总成分9714%的30个成分,主要成分为1,8-桉树脑（4089%) , α-水芹烯（977%) , 4-丙基苯甲醛（699%）等. 与匹配度对照解析法比较,有24个成分一致,占总成分的9281%. 用外标法定量分析了主要成分1,8-桉树脑含量,其质量分数为480%. 然后,研究了草果精油和1,8-桉树脑的抗菌活性. 结果显示,精油具有明显的抗菌活性,而1,8-桉树脑几乎无抗菌活性. 精油对细菌的抗菌活性由大到小依次是枯草芽孢杆菌、白葡萄球菌、大肠杆菌;对霉菌的抑菌活性由大到小依次是米曲霉菌、根霉、青霉.     

农抗120活性成分四烯化合物的分离与鉴定

从农抗120产生菌刺孢吸水链霉菌北京变种的发酵产物中分离四烯类化合物,通过液相色谱与质谱联用仪测定其相对分子质量,采用核磁共振仪鉴定其结构.结果表明,所分离的四烯类化合物具有四烯大环内酯类抗生素的特征紫外吸收谱,并与四霉素B的结构相同.经体外活性测试结果表明,四烯类化合物对农抗120的活性指示菌清酒酵母具有明显的抑制作用.     

土壤放线菌分离及无抗菌活性株的激活

从广州的稻田土里分离出三支菌，其中一株（２０号）产生的抗生物质不仅可抑制多种细菌，而且也可抑制白色念珠菌，经初步鉴定为诺卡氏菌属放线菌；另外两支为天然无抗生活性的放线菌，属拟诺卡氏菌。对两株无活性的菌进行紫外照射，然后用四环素和盐酸羟胺复合诱变，经初筛后发现三支激活株，其中一支产生了较明显的抗真菌活力。最后对激活株和２０号菌所产生的抗生物质进行初步研究，证明可能是一种非多烯大环内酯类抗真菌抗生素。实验结果表明这几支天然无活性的供试菌中均含有可被激活的沉默基因，这些基因和抗生素合成有关。     

南昌链霉菌与放线菌噬菌体ΦC31相互关系的研究

经点滴法和平板法检测,放线菌噬菌体ΦC31及大部分衍生噬菌体能感染南昌链霉菌,但这些噬菌体的DNA却不能南昌链霉菌。通过比较来自不同宿主的KC515噬菌体悬液对为铅青链霉菌和南昌链霉菌的侵染效率,发现南昌链霉菌对ΦC31及衍生噬菌体具有很强的限制性。Southern杂交实验表明,ΦC31衍生噬菌体KC301（C^ attP^ ）可以整合到南昌链霉菌NS－32－26的染色体上形成溶源,其溶源菌自发释放KC301,但热激诱导后并没有提高释放频率。通过脉冲电泳技术和Southern杂交的方法定位了KC301在南昌链霉菌NS－32－26染色体上形成溶源的附着位点（attB)。这些结果均有利于利用以ΦC31为基础的载体对南昌链霉菌进行分子生物学的研究。     

转基因小球藻生长动力学、藻粉和油脂产量的研究

对3株导入外源基因的转基因小球藻(Chlorella ellipsoidea SD-0702,C.ellipsoidea SD-0705,C.ellipsoidea SD-0706)进行生长动力学、藻粉产量和产油脂能力的研究,并且与野生型小球藻(C.ellipsoidea SD-0701)进行比较.结果表明:(1)SD-0705的比生长速率最大,代时最短,与SD-0706的比生长速率均高于SD-0701,SD-0702则低于SD-0701;(2)SD-0705和SD-0706的藻粉得率均高于SD-0701,SD-0702则较野生型小球藻低;(3)SD-0705的油脂产量最高,为0.470 g/L,高于SD-0701,其他2株转基因小球藻的油脂产量均低于野生型小球藻.由此筛选出SD-0705作为藻粉和油脂的高产藻株.     

生防菌株A-29的鉴定及其活性成分分析

生防菌株A-29分离自山东省科学院中试基地内的番茄根际土中。利用通用引物27f和1492r扩增A-29的基因组DNA获得1492bp的16SrDNA序列片段,登录号为EU430264,同源性与直丝紫链霉菌（Strep-tomyces viridocyaneus）YIM30997（AF513223）达98.9%。生理生化特性测定中,除吲哚反应和木糖利用2项不同外,其它指标A-29与S.viridocyaneus完全相同,故将菌株A-29鉴定为S.viridocyaneus。菌株A-29的无菌发酵滤液具有广谱抗性,在PDA平板上对供试的8种植物病原真菌均有不同程度的抑制作用,其中对黑斑链格孢的抑制效果最好,抑菌圈半径为7.0mm。分别利用二氯甲烷和乙酸乙酯浸提法提取发酵上清液中的活性成分,采用气相色谱-质谱联用仪对提取液进行定性分析,菌株A-29各提取液中可检测到的化学成分种类主要有：有机酸类、酯类、苯及其衍生物、烷烃、酮类、杂环化合物等,结合文献报道：上清乙酸乙酯提取液中可能的活性成分为：（S）-（＋）-2′,3′-Dideoxyribonolactone、2-Vinyl-9-[3-deoxy-.beta.-d-ribofuranosyl]hypoxan-thine;上清二氯甲烷提取液中可能的活性成分为：2-（Phenyl-piperidin-1-yl-methyl）-cyclohexanol、10-Methoxy-nb-.alpha.-Methylcorynantheol。     

对氨基苯甲酸生物合成基因pabAB的缺失对抗生素FR-008生物合成的影响

抗生素FR-008是由链霉菌FR-008产生的一种七烯大环内酯类抗真菌抗生素,它以对氨基苯甲酸(PABA)为起始单位,在I型聚酮合酶(PKS)的催化下合成聚酮内酯环.前期生物合成基因簇序列测定发现了可能的对氨基苯甲酸生物合成基因(pabAB),编码4-氨基-4-脱氧-分支酸(ADC)合成酶.通过同框缺失实验获得pabAB发生缺失的基因置换突变株BLQ-1并通过聚合酶链式反应(PCR)扩增进行了验证.高效液相色谱(HPLC)分析和生物测定证实突变菌株BLQ-1丧失了合成抗生素FR-008的能力.这种产量的丧失可以通过回补克隆的pabAB基因或喂养外源PABA得到回复.实验证明,pabAB负责对氨基苯甲酸的合成,是抗生素FR-008生物合成的必需基因.     

XM16菌株及其抗菌物质对数种植物病原真菌的作用范围

以苹果腐烂病菌等14种植物病原菌为供试菌,研究了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis(Ehrenberg)Cohn)XM16菌株及其代谢物的抑菌活性.结果表明,该菌对供试植物病原菌均表现出强烈的拮抗作用,其代谢物对供试的苹果炭疽病菌等11种病原菌具有较强的抑制作用.分泌物滤液和粗蛋白的抑菌试验进一步证实了XM16菌株抗生物质的存在,这表明XM16在培养过程中的确产生了某种对病原真菌具有强抑菌活性的抗生物质.     

一株产淀粉酶的克雷伯氏菌株的分离鉴定及其产酶条件优化

从酒酿、酒曲样品中,采用透明圈法对淀粉酶产生菌株进行初筛,并通过测定酶活对其进行复筛.对所筛选出的产淀粉酶能力较高的菌株进行形态特征观察、生理生化鉴定及16S rDNA序列测定.经鉴定是克雷伯氏菌属,将其命名为Klebsiella sp.ZSY-I.通过正交实验对该菌株产酶的影响因素进行优化,结果表明：对菌株产酶影响较大的因素依次为KNO3、温度、淀粉和pH.该菌株在淀粉含量为2.5%,KNO3含量为1.25%的培养基上,30℃和初始pH为7.5,培养24 h后,酶活力达到最高为14.66 U/mL.     

壳聚糖酶产生菌筛选及产酶培养优化

以胶体壳聚糖为唯一碳源和DNS酶活鉴定法从烟台近海土壤中分离得到一株高产壳聚糖酶菌株,初步鉴定为白色链霉菌.经发酵培养组分与条件优化,获得最佳培养组分(g.L-1):葡萄糖55,壳聚糖0.5,胰蛋白胨1,尿素8,(NH4)2SO42,NH4Cl 1,KH2PO43,FeSO4·7H2O 1,ZnSO4·7H2O 2,CaCl2·6H2O2,MnSO4·H2O2,NaCl2.最适产酶pH 7.0,温度28℃,装液量50 mL,接种量2%.优化后菌株培养48 h时产酶量为51.65 U.mL-1.     

红曲霉固态发酵产糖化酶及酸性蛋白酶条件的优化

从8株红曲霉中筛选出红曲霉MQ7作为高产糖化酶和酸性蛋白酶的供试菌株,采用固态发酵方法测定在不同发酵温度、底物料液比、大米和麸皮比例条件下的产酶情况.利用正交实验优化固态发酵产酶过程,确定该菌株产酶最佳发酵条件为:发酵温度30,℃,底物料液比(g∶mL)20∶25,大米麸皮比例(g∶g)17∶3.在此条件下,糖化酶活力达1,641.69,U/g,酸性蛋白酶活力达151.09,U/g.同时研究了NaCl含量对红曲霉酶活力的抑制作用,当NaCl质量分数达到18.92%时,红曲霉MQ7产糖化酶活力下降64.8%,酸性蛋白酶活力下降85.6%.