降纤酶的分离纯化及其性质

蛇毒蛋白对抑制血栓形成和溶解血栓具有较好的疗效 ,但由于得不到性质稳定、组分单一的酶蛋白 ,影响了其临床效果。该研究通过亲和层析方法 ,从长白山白眉蝮蛇乌苏里种蛇毒中分离提纯到 SDS- PAGE图谱为单一组分糖蛋白——降纤酶 ,相对分子质量约 3.6× 10 4。该酶具有体外凝血、体内抗凝作用。等电点约为 4 .2 5。HPL C分析结果表明其纯度为 99%。最适温度为 70℃ ,最适 p H =8.0。动力学研究表明该酶为一 Michaelis- Menten酶 ,Michaelis常数为0 .32 0 mm ol/ L,最大反应速度为 0 .117μm ol/ m in。EDTA,Mg2 + ,Cu2 + 对其有抑制作用。测定该酶 N端 2 0个氨基酸的序列是 Val Ile Glu Glu Asp Glu Cys Asn Ile Asn Glu His Arg Phe L eu,与其他的蛇毒类凝血酶有高度同源性。     

吉林产蝮蛇(Agkistrodon halys brevicaudus Stejneger)蛇毒的柱层析分离及酶活性和凝血效应的测定

本文报告丁采用 DEAE—葡聚糖凝胶 A—50对吉林产蝮蛇(Agkistrodon halys brevicaudusStejn eger)蛇毒的柱层析分离,获得18个蛋白组份。测定了蛋白水解酶、精氨酸酯酶等5种酶及出血毒素组份、凝血酶样组份、抗凝血组份和纤溶组份的分布。结果表明,蛋白水解酶的分布范围较宽,精氨酸酯酶活性较高的组份分市比较集中,且与凝血酶样组份重迭。     

从黑曲霉发酵粉中分离纯化一种内切β-葡聚糖苷酶

通过硫酸铵分级沉淀 ,CM -SephadexC - 2 5 ,DEAE -SephadexA - 5 0 ,POROS 2 0HQ离子交换色谱分离方法 ,从黑曲霉发酵粉中分离纯化了一种新的内切 β -葡聚糖苷酶 .该酶在还原条件下分子量为 39.2kD ,最适pH为 4.0 ,最适温度为 5 5℃ ,Km 为 7.41mg mL .     

黑老虎醇提物对尖吻蝮蛇毒主要酶类的抑制作用

【目的】探究中草药黑老虎(Kadsura coccinea)醇提物对尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒中主要酶类的抑制作用。【方法】用体积分数为75%的乙醇溶液浸泡黑老虎后再进行超声波处理得到醇提物；通过体外酶活抑制实验分别检测醇提物对尖吻蝮蛇毒中磷脂酶A2、蛋白水解酶、透明质酸酶、类凝血酶的抑制作用。【结果】黑老虎醇提物对尖吻蝮蛇毒中的蛋白水解酶、磷脂酶A2和透明质酸酶具有明显的抑制作用。当蛇毒与醇提物的质量比分别为1∶100，1∶10和 1∶5时，后者能抑制蛇毒中98%磷脂酶A2活性、79%蛋白水解酶活性和65.14%透明质酸酶活性。同时，醇提物能够明显抑制尖吻蝮蛇毒水解纤维蛋白原和类凝血酶的活性。【结论】研究结果证实了黑老虎醇提物能有效抑制尖吻蝮蛇毒中的主要酶类，为深入研究黑老虎药材的抗蛇毒机制提供了理论依据。     

从黑曲霉发酵的果胶粗酶中分离纯化内切聚半乳糖醛酸酶

使用硫酸铵分级沉淀、CM -SephadexC - 5 0弱阳离子、POROSPE疏水层析和POROSHQ2 0强阴离子交换分离技术 ,从黑曲酶发酵的果胶酶粗品中纯化出一种电泳纯的果胶酶 .经SDS -PAGE电泳测定其相对分子量约 41.8kD ,最适pH和最适温度分别为 5 .0和 36℃ .     

尖吻蝮蛇凝血酶分离纯化新工艺研究

尖吻蝮蛇凝血酶是从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化得到的一种类凝血酶,属于止血一类新药。建立了尖吻蝮蛇凝血酶分离纯化新工艺,采用切向流过滤技术,用两步离子交换层析分离得到高纯度的尖吻蝮蛇凝血酶,再采用两步凝胶排阻层析去除热原和脱盐。该工艺具有简便高效的特点,适合大规模工业化生产。     

尖吻蝮蛇凝血酶在大鼠体内的药代动力学

尖吻蝮蛇凝血酶是从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化得到的一种类凝血酶,是本团队研发的止血一类新药。采用125Ⅰ-标记的放射性同位素法和三氯醋酸沉淀结合放射性检测法研究尖吻蝮蛇凝血酶在大鼠体内的药代动力学。结果表明两种方法测定的AUC值与剂量均呈正相关,相关系数分别为0.999 8和0.999 0;肝、脾、心在给药后5 min药物含量最高,其他绝大部分组织在给药后30 min药物含量最高,以后逐渐降低;在各时间点,肝组织含药量显著高于其他组织;此外,尖吻蝮蛇凝血酶排泄较完全,主要由尿排泄。     

应用比浊法测定凝血酶样酶活性

传统常用目测法观察血浆凝固时间来测定凝血酶样酶的活性,因无法微观地检测凝固过程的起始而导致灵敏度低．应用比浊法检测凝血酶样酶活性,以东菱克栓酶为标准凝血酶样酶,在血浆凝固过程中,浊度随时间基本呈直线变化直至浊度变化最终趋于恒定,表明此时血浆已完全凝固．酶活与浊度一时间变化曲线的直线斜率之间存在严格的线性关系．线性范围为０．０５～０．６５ｕ／ｍＬ．结果表明,比浊法是一种改进的凝血酶样酶测活方法．     

宇佐美曲霉Y—26纤维素酶的纯化及酶学性质

从宇佐美曲霉 (A .usamii)固态发酵物中提取纤维素酶。粗酶液经硫酸铵盐析除去大量杂蛋白 ,然后通过 2次SephadexG - 2 0 0柱层析纤维素酶中CMC酶 ,提纯倍数可达 5 72。酶学研究表明 ,纤维素酶中CMC酶最适作用温度为 6 0℃ ,最适作用pH为 4.0 ,30～ 6 0℃区间酶活力较稳定 ,在pH为 3 .0～ 5 .0范围内 ,5 0℃保温 30min ,能保持 90 %的酶活力。红外光谱分析表明 ,纤维素酶在O—H ,N—H ,C—H ,CO有吸收带。CMC酶的Km、vmax 值分别为 0 10 g/ml、0 40mg/(ml·min)。     

胆固醇氧化酶的三相分离及其血清总胆固醇的测定

对一株胞外胆固醇氧化酶高产菌COX4-8进行了三相分离,结果表明:最优分离条件为:硫酸铵-异丙醇沉淀,硫酸铵饱和度为70%,异丙醇与发酵上清液的体积比为0.8∶1时,pH值为9,在20℃下静置30min,12 000r/min离心10min,纯化倍数4.5倍,回收率高达95%.酶动力学方法检测胆固醇氧化酶测定血清总胆固醇含量,其线性回归方程为y=0.006 4x+0.002 7,R2=0.965 4,线性范围0~7.16mmol/L.结果表明了该酶具有作为临床诊断试剂的潜力,并为临床上利用酶动力学方法测定血清总胆固醇含量奠定了实验基础.     

峨嵋双蝴蝶植物提取物的抗五步蛇毒作用

研究峨嵋双蝴蝶植物水提物的抗五步蛇毒作用.建立小鼠五步蛇毒中毒模型,观察小鼠的中毒表现,并统计小鼠的死亡率,比较小鼠组织出血、组织坏死及组织溃疡状况.结果发现,峨嵋双蝴蝶植物水提物给药组动物的死亡率较模型组的明显下降,局部和全身症状较轻,而且随着剂量的增加症状显著减轻,尤其是对于组织的保护作用比较明显.峨嵋双蝴蝶植物水提物具有抗五步蛇毒作用,能降低蛇毒毒性.     

苍耳粗蛋白生物活性的研究

采用不同饱和度硫酸铵盐析法进行不同生长发育时期苍耳叶片和种子粗蛋白的提取及分级分离,测定其对酵母菌生长、ATPase活性和线粒体呼吸的抑制作用．结果表明：50％和80％饱和度硫酸铵环境中析出的成熟种子粗蛋白的抑制效应最为显著．     

扁核木叶蛋白的提取及分离和纯化研究

本实验主要对扁核木叶蛋白的提取、分离和纯化进行了研究。从扁核木叶片中提取叶蛋白,用20%～80%硫酸铵沉淀分级盐析叶蛋白,采用葡聚糖G-150凝胶层析对扁核木叶蛋白进行脱盐和分离,以除去硫酸铵以及其他盐类,最终得到较纯的叶蛋白。结果表明,经盐析沉淀后的叶蛋白提取率达66%,层析纯化后的扁核木叶蛋白提取率较高,达74%,实验基本达到了纯化效果。     

蚓激酶提取条件的优化与酶活性测定

蚯蚓纤溶酶是目前较为理想的溶栓药物之一,具有广泛的临床应用前景。采用盐析法从蚯蚓中提取蚓激酶,通过采用考马斯亮蓝G-250染色法间接地测定蚓激酶活性,优化出最佳的提取条件。结果显示,蚓激酶的提取最佳PH为7.5-8.0,二次盐析硫酸铵饱和度应在80%以上。     

Sr^2＋诱导尖吻蝮蛇毒中抗凝血因子I的结构稳定性及重新折叠

尖吻蝮蛇毒抗凝血因子I（ACFI）是活化凝血因子X（FXa）结合蛋白，具有显著的抗凝血活性．用荧光光谱研究了Sr^＋诱导ACF I的结构稳定性及重新折叠．结果表明，脱钙ACF I（apo-ACFI）可结合两个Sr^＋．ACF I与FXa的结合反应不是绝对依赖于Ca^2＋，Sr^2＋也可以诱导ACF I与FXa的结合反应．盐酸胍诱导的Sr^2＋重组ACFI（Sr^2＋-ACF I）去折叠过程是一个三态过程，有一个稳定的中间态．像Ca^2＋一样，Sr^2＋不仅能显著增加ACF I的结构稳定性，而且在不改变变性剂浓度条件下，能诱导去折叠的脱钙ACF I重新折叠成Sr^2＋-ACF I的中间态．Sr^2＋诱导apo-ACF I重新折叠过程包含快慢两步反应，Sr^2＋取代Ca^2＋只降低快折叠反应速度，而不影响慢折叠反应速度．这说明，金属离子影响快折叠过程，而慢折叠过程只决定于蛋白质本身性质．     

一株硫酸铵耐性菌株的分离鉴定及其特征研究

本研究以赣州稀土矿区尾矿土壤微生物为研究对象,利用限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)技术,获得一株硫酸铵耐性菌株。通过16 S rDNA序列测定,鉴定该菌株属于短波单胞菌属(Brevundimonas sp.),命名为Brevundimonas sp. LNa,该菌株对硫酸铵的最高耐受浓度可达0.9 mol/L。进一步研究了环境因素对菌株LNa生长的影响,并表征其生理生化特性。结果表明:菌株LNa对硫酸链霉素不敏感,在低于1 mol/L硫酸铵处理,pH在6-7.5之间,菌株均能正常生长。菌株LNa能不同程度地降低培养基中氨氮和硫酸盐浓度,在0.7 mol/L硫酸铵胁迫下降解效果最好,氨氮浓度能降低约29%,硫酸盐浓度降低约36.7%;随着硫酸铵胁迫浓度的升高,菌株LNa的FDA水解酶(Fluorescein diacetate, FDA)、蛋白酶、脱氢酶和过氧化氢酶的活性都有不同程度的降低,当浓度上高到0.6 mol/L后,菌株的过氧化氢酶活性将不再发生变化。LNa菌株对氨氮和硫酸盐的降解能力,可能与细菌FDA水解酶和蛋白酶活性的分泌有关。     

响应面法优化小刺猴头菌寡糖的纯化工艺研究

采用盐析法对小刺猴头菌寡糖进行纯化,在pH值、硫酸铵饱和度和溶液浓度3个单因素试验的基础上,根据中心组合(Box-Benhnken)试验设计原理,以粗多糖中的蛋白去除率为指标响应值作响应面和等高线,分析各个因素的显著性和交互作用,得出利用硫酸铵盐析法去除寡糖中杂蛋白的工艺条件为:pH值为5.91,硫酸铵饱和度为57%,溶液浓度为4%。     

蕲蛇毒中抑制ACE活性组分的分离纯化与表征

蕲蛇粗毒流经强阴离子交换色谱POROS 2 0HQ柱 ,经毛细管电泳仪检测 ,5个蛋白峰具有ACE抑制活性 ,对最强的活性峰进行PAGE切割电泳的分离 ,得到 3条带 ,经检测只有第三条带 (AI - 3)具有ACE抑制活性 .该组分的分子量为 2 0 2 0 0 (非还原 ) ,加DTT处理后 ,分子量为 2 590 0 .其IC50 为 0 .10mmol/L .     

秦岭蝮蛇毒的急性毒性实验研究

秦岭蝮蛇毒的急性毒性实验研究杨章民，王德林，王子浩，方荣盛（陕西师范大学实验中心陕西师范大学生物学系西安７１００６２１第一作者，男，２８岁，硕士）蜂蛇毒是以血循毒为主的混合毒，其成分非常复杂，为酶类、毒素及非蛋白物质构成的混合物，能够使动物出现一系列...     

Myotoxic activity of a Gln-49 phospholipase A_2 from Agkistrodon blomhoffii ussurensis snake venom

A novel myotoxic protein phospholipase A2(PLA2), denoted as Gln49-PLA2, has been isolated from snake venom of Agkistrodon blomhoffii ussurensis, which has weak lethal effect and apparent anticoagulant activity, but lacks the PLA2 and hemorrha-genic activity. Gln49-PLA2 obviously increases of plasma creatine-kinase (CK) upon intramuscular injection in mice, suggesting that it may induce a dose-dependent myonecrosis. Histological studies also reveal morphological changes in mouse skeletal muscles, including extensive myonecrosis, hemorrhage and neutrophil infiltration in the treated animals. The myotoxic ability induced by Gln49-PLA2 can be partially inhibited by heparin.