枯草芽孢杆菌工程菌产耐酸性高温α-淀粉酶发酵条件的优化

利用基因工程手段获得的产耐酸性高温α-淀粉酶基因枯草芽孢杆菌工程菌株pWB-amyd/WB600,通过单因素筛选及正交实验进行发酵培养基优化,得到的最佳配方为(g/L):玉米粉20,蛋白胨30,CaCl20.5,Na2HPO48.同时对实验室摇瓶条件下液体发酵的主要影响因素初始pH、接种量、装液量、转速、温度等进行探讨,确定了最佳培养条件:37,℃、pH 6.5、200,r/min摇床培养36,h,接种量为2%,装液量为30,mL/250,mL.在此优化条件下,耐酸性高温α-淀粉酶活力达到3,980,U/mL,是未优化条件下的2.1倍.     

苏云金芽孢杆菌MS7培养条件的优化

通过单因子试验对苏云金芽孢杆菌MS7菌株的培养条件进行优化．研究表明,该菌株的最佳培养基组成和发酵条件为：蔗糖10．0g／L、牛肉膏10．0g／L、K2HPO42．0g／L,初始发酵pH7．0,装液量25mL,培养温度35℃,培养时间36h,优化后细菌总数可达1．2×10^8CFU／mL．     

安络小皮伞菌液体发酵条件的优化

以提高安络小皮伞菌生物量为目的,通过单因素实验和正交优化实验对安络小皮伞菌液体发酵条件进行优化.结果表明,液体发酵最佳培养基为:玉米粉30g/L,麸皮30g/L,MgSO41g/L,KH2PO43g/L,VB110mg/L.最佳发酵条件为:培养基初始pH为5,装液量为90mL/250mL三角瓶,接种量为9%,25℃下150r/min摇床发酵培养6d.在此发酵条件下,安络小皮伞菌丝体产量达5.88g/L,比优化前产量提高了44.47%,优化后菌丝体产量显著增加.     

一株产低温碱性淀粉酶蕈状芽孢杆菌的分离筛选和发酵优化

本研究的目的是从生态环境独特而复杂的西藏林芝地区的土壤样品中挖掘所蕴藏的特殊淀粉酶微生物资源.采用淀粉酶功能筛选的方法获得一株低温碱性淀粉酶生产菌株,编号为3F1.其酶活最适条件为10℃、pH 10.2.通过16S rDNA序列分析法鉴定该菌株为蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides),并将其命名为Bm3F1.通过发酵条件的逐步优化,最终确定其最佳发酵条件为：发酵培养基中添加1.5%可溶性淀粉,培养基初始pH 7.2,装液量10 mL/250 mL,菌体接种量9.0%,发酵温度30℃,发酵时间18 h,经优化后可将菌株的酶活提升至13.58 U/mL.表明从西藏林芝地区分离的Bm3F1具有在低温和碱性条件下产较高酶活淀粉酶的特性.     

产辅酶Q10热带假丝酵母菌株C-1发酵过程优化

该文以热带假丝酵母（candida tropicalis）C-1为CoQ10的生产菌,通过发酵过程的优化,重点考察了碳源、氮源、接种量、酸碱度和装液量等对生物量和CoQ10产量的影响。发现氮源对产物合成影响最大,其次分别是酸碱度、装液量和碳源。优化后的发酵条件是：碳源,葡萄糖26g／L＋蔗糖26g／L;氮源,酵母膏7．5g／L＋蛋白胨7．5g／L;pH为6．5,装液量为40mL,发酵时间为30h,培养温度为30℃,CoQ10的得率为10．8mg／L。此外,加入适量的维生素B1、烟酸和铁离子等有利于CoQ10微生物细胞的生长和CoQ10产量的提高。     

基于响应面法对枯草芽孢杆菌WB600-eg2发酵产内切葡聚糖苷酶条件的优化

出发菌株枯草芽孢杆菌WB600-eg2是通过分子生物学手段构建的重组菌,内切葡聚糖苷酶酶活为1.174IU/mL.本文通过响应面法对装液量、初始pH、接种量、转速、酵母粉添加量等发酵条件进行优化,得到最优发酵条件为装液量55mL/250mL、初始pH7.2、接种量10%、转速170r/min、酵母粉添加量0.4%.在此发酵条件下测得内切葡聚糖苷酶酶活为1.573IU/mL,比未优化条件下提高了33.9%.     

绿色糖单孢菌麦芽糖α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的高效分泌表达

【目的】构建高产麦芽糖α-淀粉酶的工程菌株并实现高效分泌表达。【方法】PCR扩增麦芽糖α-淀粉酶基因sva,再与大肠杆菌-枯草芽孢杆菌麦芽糖诱导型穿梭载体pHCMCO4-Pglv连接,构建重组质粒pHCMCO4-Pglv-sva并转入枯草芽孢杆菌进行表达,对重组酶进行SDS-PAGE分析,然后对重组菌株的生长及发酵条件进行优化。【结果】成功构建重组质粒pHCMCO4-Pglv-sva并在枯草芽孢杆菌中实现分泌表达,SDS-PAGE分析发现,在55kDa处得到特异性蛋白条带。单因素试验结果显示,重组菌的最适诱导温度为35℃,最适接种量为4%(V/V),最适装液量为30mL。正交实验结果显示,重组菌的最佳发酵条件组合是诱导温度37℃、接种量5%(V/V)、装液量25mL,在此条件下发酵液粗酶活力达到257.3698U/mL。装液量对重组菌的产酶量影响显著。【结论】成功构建能高效分泌表达麦芽糖α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌株,经发酵条件优化后,重组酶产量显著提高10倍左右。     

重组人粒细胞集落刺激因子的摇瓶发酵研究

目的 优化重组大肠杆菌生产人粒细胞集落刺激因子摇瓶发酵工艺条件。方法 利用摇瓶系统地考查rhG-CSF茵株培养温度、诱导时机、pH值、溶氧、种子茵龄、接种量等工艺条件，选择出最佳的摇瓶培养条件。结果 最佳条件为：培养温度30℃；初始pH值在7．0～7．2；装液量20％；摇床转速180r／min；种子菌龄在A600为1．0～1．5时接种，并在对数生长前期(A600=1．0)时诱导4h。在此优化的培养条件下，在摇瓶中使用优化后的M9培养基时，rhG-CSF的表达量占茵体总蛋白的36．5％，光密度达5．85。结论 构建的rhG-CSF工程菌发酵的稳定性和重复性良好，可作为rhp-CSF的大规模生产提供可靠的放大依据。     

金针菇液体发酵培养工艺的优化研究

为了分析不同营养成分及培养条件对金针菇菌丝体生物量的影响及为金针菇液体发酵工业化生产提供参考依据,采用单因子及正交试验,分别测定不同培养基组合及培养条件下的金针菇菌丝体生物量．研究结果表明,金针菇液体发酵培养基的最优组合为：40g／L黄豆粉、20g/L可溶性淀粉、2g/L KH2PO4和1g／L MgSO4·7H2O．最优培养条件是：起始pH值6．0、接种量200mL／L、装液量400mL／L、摇床转速160r／min、培养温度25℃和恒温培养8d．     

一株磷细菌发酵条件的研究

对一株磷细菌的发酵条件进行了研究。其中，单因素发酵试验表明，碳源以2％的淀粉最佳，氮源以0．1％的NH4CI最好。最适培养温度为37℃，最适初始pH为7．0，最佳振荡频率为200r/min，装液量为30／250mL，并进行了中试罐发酵分析，测定了罐发酵过程中的菌量、pH、还原糖及总氮的变化情况。     

平菇液体菌种发酵条件的研究

对平菇液体菌种的碳氮营养需求及培养条件进行了研究．结果表明：黑平王（平菇）菌株能利用多种碳氮源，其中碳源以玉米粉为最好，有机氮优于无机氮，豆饼粉为最佳氮源．培养基最佳组合为玉米粉2％，豆饼粉1.5％，KH2PO4 0．15％，MgSO4 0．1％，pH6．最适培养条件为25℃，摇床转速140r／min，接种量8％，装液量为100mL发酵液／300mL三角瓶，发酵时间为4d．     

荧光假单胞菌株SE-6产铁载体的发酵条件

在摇瓶发酵条件下，研究了荧光假单胞菌SE-6在各种培养条件下的铁载体分泌量，确定了适合铁载体分泌的最佳培养条件：起始pH6．5，装瓶量200／500（mL），接种量2％，最佳培养时间为46h左右，Fe^3＋浓度为0．8mg／L．在此条件下，铁载体在发酵液中含量最高，为大规模的发酵提供了有价值的数据．     

重组枯草芽孢杆菌产碱性蛋白酶发酵条件优化

碱性蛋白酶作为一种重要的工业用酶,广泛应用于食品、洗涤及制革等行业。文章对实验室构建的产碱性蛋白酶的重组枯草芽孢杆菌工程菌WB600/pBE2R-AP发酵条件进行筛选。采用液体摇瓶的方式,考察了碳源、氮源、金属离子等营养条件,以及初始pH值、装液量、接种量等发酵条件对产碱性蛋白酶活性的影响。在单因素基础上设计了4因素3水平的正交实验,确定发酵的最佳条件为:糊精5%(质量百分数,下同)、花生饼粉3%、酵母提取物1%、MgSO_4 0.28%、NaCl 0.5%,起始pH 7.0、装液量12%、接种量4%,此条件下37℃,200 r/min培养60 h,碱性蛋白酶活力可达2 605.91 U/mL,比未优化前提高了10倍。     

乳牛肝菌发酵条件的优化

探究乳牛肝菌在液态培养基中的发酵生长曲线,采用单因素实验对乳牛肝菌的发酵条件进行优化.实验结果表明,乳牛肝菌发酵培养可分为四个时期:第3⁵d为延滞期,第55d为延滞期,第5¹2d为快速生长期,第1212d为快速生长期,第12¹4d为稳定期,第14d后进入衰亡期.适宜的发酵条件为:最适接种量为6%14d为稳定期,第14d后进入衰亡期.适宜的发酵条件为:最适接种量为6%⁸%,最适乳牛肝菌种子液种龄为58%,最适乳牛肝菌种子液种龄为5⁷d,最适初始pH值为6.0,最适装液量为100mL/250mL,最适摇床转速为140r/min,适宜的封口材料为封口膜,最适培养温度范围为247d,最适初始pH值为6.0,最适装液量为100mL/250mL,最适摇床转速为140r/min,适宜的封口材料为封口膜,最适培养温度范围为24²6℃.在优化条件下,乳牛肝菌的菌丝体干重生物量可达3.26g/L,是初始干重的20倍左右,比优化前提高了33.1%.     

α-淀粉酶发酵条件的优化

利用米曲霉菌株液体发酵生产α-淀粉酶。产酶培养基优化试验表明：以面粉为碳源,黄豆饼粉为有机氮源,NaNO3为无机氮源。发酵配方如下（g/L）：面粉浓度为45,黄豆饼粉浓度为20,NaNO3 4,K2HPO4 3,MgSO4 1,FeSO4·7H20 0.01。产酶培养条件优化表明：最适发酵初始pH为7,装液量为40mL（250mL三角瓶）,接种量为10%,发酵温度为33.5℃,摇床转速为235rpm,培养时间为72h。此条件下,最终发酵水平达到1962.32U/mL,比初始时提高45%。     

活性干酵母富硒培养条件的研究

以安琪活性干酵母为出发菌种,分析了培养基初始硒浓度、接种量、装液量、温度、初始pH以及转速等发酵条件对酵母生物量及富硒量的影响,并通过正交试验设计初步确定了培养的最优方案.在最佳的摇瓶培养条件下(初始硒浓度25μg/mL,接种量10%,装液量60/250 mL,温度30℃,初始pH 5.0,摇床转速160 r/min,培养40 h后),该活性干酵母的生物量及富硒量分别达到9.89 g/L、954 μg/g.     

基因重组鲨鱼软骨血管生成抑制因子的发酵条件优化

采用三角摇瓶来优化基因工程菌表达重组鲨鱼软骨血管生成抑制因子(SCAIF)的最佳发酵条件,并以此为基础在Biotop CF-10L自动控制发酵罐进行发酵培养.基因工程菌BL21(DE3)/pET3c(SCAIF)诱导表达SCAIF蛋白的最佳摇瓶培养条件是:接种量为2%、装液量为75 mL/500 mL、加入IPTG的诱导时间为培养2 h后、IPTG浓度为0.25 mmol/L、诱导时间为2 h.BL21(DE3)/pET3c(SCAIF)菌种在Biotop CF-10L自动控制发酵罐中的条件为:以10%的接种量接种到10 L发酵培养基中,设定pH 7.0,温度37℃,培养4 h后,加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG,诱导2 h后终止发酵.发酵罐中获得的菌体量为10.2 g/L,蛋白表达率为25%左右.     

阿魏酸酯酶产生菌的培养条件优化

通过均匀设计法和二次多项式逐步回归,对产阿魏酸酯酶的培养基配方进行优化,得出优化的培养基配方(质量分数):0.30%KH2PO4,0.60%Na2HPO4.7H2O,0.01%NaCl,0.80%酵母粉,1.33%麦糟.在此基础上,用单因素法考察发酵条件对产酶的影响,确定最佳条件:初始pH值为6.0,培养温度为28℃,摇床转速为210 r.min-1,发酵时间为68 h,装液量为75 mL,接种量为5%,麦糟粒径为0.054 mm.采用优化的培养基组分进行最优发酵培养,优化后的阿魏酸酯酶酶活达到119.36μkat.L-1,比优化前提高了32倍.     

白蜡多年卧孔菌发酵培养条件优化的研究

对白蜡多年卧孔菌最佳发酵培养条件进行了探索,其摇床发酵最优培养条件为：葡萄糖37.7 g/L,酵母粉8.3g/L,磷酸二氢钾6.31 g/L;培养温度30℃,500 mL三角瓶装液量200 mL,初始pH值为6,摇床转速180r/min,10％接种量培养7d,最大产量达到15.46 g/L.发酵罐最优培养条件为：葡萄糖37.7 g/L,酵母粉8.3g/L,磷酸二氢钾6.31 g/L,培养温度30℃,装液量6L/10L,初始pH为6,搅拌速度380 r/min,10％接种量培养120h,最大产量达到19.47 g/L.     

一株产高温纤维素酶曲霉菌的发酵条件及培养基优化

对一株产高温纤维素酶的曲霉(Aspergillus sp.)F4菌株进行培养基及发酵条件的优化.最佳产酶液体培养基配方为:稻草粉40 g·L-1,(NH4)2SO43.5 g·L-1,NaCl 2 g·L-1,KH2PO42 g·L-1,MgSO4.7H2O 0.5g·L-1,甘油0.20%,pH 5.5;优化后CMC酶活力提高16.7倍.优化后产酶条件为:接种量4%,温度37℃,摇床转速150 r.min-1,装液量80 mL/250 mL.在此条件下发酵8 d,CMC酶活力达到了12.26 U.mL-1,比优化前提高了约2倍.