脱细胞角膜基质制备方法研究进展

脱细胞角膜基质作为组织工程角膜的研究新热点,不仅保持了天然角膜的结构特征和力学性能,且含有人工合成支架所不具备的细胞生长因子等,为种子细胞生长提供了理想的环境,同时也去除了组织中可能引发免疫排斥反应的细胞成分。本文对最近几年异种脱细胞角膜基质的制备方法进行综述,并指出了各种方法的优缺点。     

猪血管脱细胞细胞外基质制备的初步探讨

采用高渗、低渗溶液,结合去污剂—酶联合处理猪腹主动脉,进行组织学检查,从而制备血管脱细胞细胞外基质。结果表明:经该法处理的猪血管细胞全部脱除,细胞外基质保持完好,未见胶原纤维、弹性纤维有断裂现象。作者认为,高渗、低渗溶液结合去污剂—酶联合处理,是制备血管脱细胞细胞外基质理想的方法。     

适用于不同尺寸血管的脱细胞方法研究

将胰酶消化与反复冻融相结合,旨在建立一种适用于各种类型血管的通用脱细胞方法,如隐静脉、颈动脉和主动脉。隐静脉、颈动脉和主动脉经胰酶消化和反复冻融脱细胞处理后,采用苏木精—伊红染色、Masson三色染色及弹性纤维染色来定性评价脱细胞效果和细胞外基质的保存效果,采用Image-Pro-Plus 5.1图像处理软件作进一步定量评价;扫描电子显微镜观察胞外基质的完整性。结果显示,组织染色及定量分析表明此胰酶消化与反复冻融相结合的方法完全脱除了隐静脉、颈动脉和主动脉得细胞,细胞外介质结构保存良好且完整。扫描电子显微镜观察亦表明细胞外基质保存良好,且基质纤维致密规整。表明胰酶消化与反复冻融相结合的脱细胞方法是一种很有前景的制备各种不同类型血管支架的方法。     

角膜组织工程支架壳聚糖-胶原复合膜的性能

制备了壳聚糖-胶原角膜组织工程支架，考察了复合膜支架的光学性能、力学强度、结晶性、吸水率、亲水性、微观形貌及细胞亲和性，发现支架内胶原与壳聚糖两种分子间存在较强的相互作用，且具有良好的相容性，支架表面平滑均一，内部呈现层状有序结构．壳聚糖-胶原复合膜具有优异的透光率和适宜的湿态力学强度．细胞培养实验中，人角膜缘上皮细胞能在支架上较好地粘附和增殖分化，显示复合膜支架具有良好的细胞亲和性．结果表明壳聚糖-胶原复合膜有望成为一种性能良好的角膜组织工程支架．     

酶法制备天然脱细胞血管支架

从不同类型的脱细胞方法中选取了4种有代表性的方法,分别是去垢剂处理法、酶法、去垢剂和酶共同处理法以及快速冻融法.之后分别对制备所得各组支架从HE染色、DAPI染色、DNA残留率和力学性能分析四个方面进行分析.力学性能及DNA残留率均采用平均值±标准差的方式表示,并进行t检验,取P<0.05.结果显示酶法制备脱细胞天然血管支架的方法对细胞的去除效果最显著,同时,产生了有规则的细胞质基质的孔隙以供新的细胞生长迁移,虽然力学性能有一定下降,但是通过进一步的处理,可以形成一种良好的组织工程血管支架.     

兔和牛角膜上皮、基质及内皮细胞体外培养和增殖的研究

目的：研究兔和牛角膜上皮、基质及内皮细胞等3种细胞体外培养的生物学特性，探索和改进这3种细胞体外培养的方法，为组织工程角膜奠定基础。方法：采用消化法分离培养兔和牛角膜上皮、内皮和基质细胞，观察细胞贴壁生长情况，同时对生长良好的原代细胞进行消化传代，进一步观察传代细胞的形态和生长情况。结果：角膜上皮、内皮和基质细胞均在培养48～72h贴壁生长，培养6～9d能形成良好单层，细胞形态典型，进行多次传代后细胞仍维持原有形态和功能，获得的细胞能进行长期培养。结论：为兔和牛角膜上皮、内皮和基质细胞体外培养，提供了简单高效经济的方法。     

角膜两种冷冻方法的比较研究

以免角膜为材料，比较了程序控制冷冻法和简易悬吊冷冻法的冷冻效果。结果表明，应用“二甲基亚砜—人血清白蛋白冷冻保护剂，两种方法都可获得较高的角膜内皮细胞存活率（＞９５％）。程序控制冷冻法能准确地控制实验条件，结果重复性好，易于分析冷冻效果。从冷冻角膜应用于临床考虑，应建立和发展程序控制冷冻法。     

牛松质骨脱细胞骨细胞外基质的制备

为寻找适合骨移植的骨组织替代物．脱细胞骨细胞外基质（Acellular bone extracellular matrix,ABECM）制备最佳方法。方法：根据析因设计原理用不同浓度曲拉通X-100液分别与高渗和低渗液联合后对牛肱骨上端松质骨组织进行适当的脱细胞处理．制成脱细胞牛松质骨,再进行HE染色,Massion染色及扫描电镜观察,寻求最佳的曲拉通X-100的浓度,脱细胞时间及最佳的制备脱细胞牛松质骨的方法。结果表明：10％氯化钠与0．5％曲拉通X-100联合处理48小时的脱细胞牛松质骨未见细胞成分,细胞外基质基本结构未被破坏。由此可见本方法可以成功的制备ABECM,曲拉通X-100是制备ABECM良好试剂,ABECM是一种新型的理想的骨替代物,有广泛的应用前景。     

纳米支架在组织工程中的研究进展

纳米纤维支架技术是组织工程中为了支持细胞形成受损组织生物替代物的新兴技术。纳米支架能模拟天然的细胞外基质,作为三维的模板供细胞吸附、增殖以及分化。主要介绍了纳米纤维支架的结构特性、构建技术以及生物学效应。     

异种异体脱细胞神经支架制备的实验研究

目的:探讨用化学方法制备异种异体脱细胞神经支架,为周围神经组织工程提供有效的神经支架.方法:A组,SD大鼠5只,体200～250g,取双侧坐骨神经;B组,家兔1只,体重500～600g,取周围神经10根,与A组等粗等长;C组,家犬1只,取周围神经10根,与A、B组等长等粗.三组神经均采用TritonX-100、脱氧胆酸钠等进行脱细胞处理.用HE染色对去细胞程度、脱髓鞘程度及神经管道完整性进行评价.结果:HE染色A、B、C组轴突及细胞核均消失,神经内膜形成不规则圆形空腔.结论:在TritonX-100、脱氧胆酸钠的处理下,A、B、C组的细胞均被脱净,可以作为组织工程神经的支架.     

花背蟾蜍角膜的发育和诱导

以花背蟾蜍的胚胎和变态期蝌蚪为材料,采用光镜、电镜、免疫荧光组织化学、放射自显曩、电镜细胞化学、皮肤片移植及类坏死处理等技术,研究：（１）在胚胎发育及变态期间角膜的发育过程;（２）细胞外基质的合成变化及其对角膜发育和诱导的作用;（３）角膜诱导期间的超微结构变化及类坏死对角膜诱导的影响;（４）在角膜下沉发育和诱导过程中的组织化学和视网膜感光细胞特异视蛋白的出现及二者间的可能关系。还提出角膜诱导的可能     

Measurement of corneal astigmatism

Cornea is the most important optical surface in the eye dioptric system. Three kinds of methods in measuring corneal astigmatism were used. Three hundred and sixty eyes suffered ametropia were selected on a random basis. Computer_assisted corneal topographic system was compared with keratometer and cycloplegic retinoscopy in measuring corneal curvature. There was no statistical difference in axes of astigmatism among the three groups. It is thought that ΔSim \%K\% could show the corneal regular astigmatism. As for diopters of astitigmatism, no difference was found between the groups of corneal topography and keratometer, but there was a significant difference between the group of cycloplegic retinoscopy and the other two groups. It was demonstrated that keratometer could function similarly as the corneal topography. However, it measured only four points from a small region of the cornea and was limited in measuring slight changes in corneal curvature. Some discussion was also made about the graphic patterns and ΔSim \%K\% in corneal topography.     

A study of chitosan blend film as a carrier of corneal endothelial cells

In order to evaluate the cytocompatibility and biocompatibility of a new kind of chitosan blend film as a carrier of corneal endothelial cell, rabbit corneal endothelial cells cultured in vitro were breeded onto the film. After a cell monolayer formed, the scanning electron micrography was performed. After inplanted into anterior chamber, slit lamp observation, thickness metering, specular microscopy and HE staining were performed at random time after operation to evaluate the biocompatibility. Inflammation in anterior, thickness of cornea, cell density, hexagonality and cell size of the surgical cornea were taken as the indexes of biocompatibility. The cultured cells exhibited a confluent monolayer 10 days after incubation, which proved the satisfactory cytocompatibility of this film. Biocompatibility assay results suggested the implantation feasibility of the film as a carrier of corneal endothelial cells.     

正常兔角膜的光镜及电镜下所见

兔是研究角膜病最常选用的实验动物。研究其正常组织学结构,可为了解其病理状况打下基础。本文报告了正常兔角膜的光镜、扫描电镜和透射电镜的组织学观察结果。发现兔角膜由上皮层、实层、后弹力层和内皮层等部分构成。其组织学结构除了前弹力层不明显外,与正常人角膜的结构大致相同。并讨论了兔角膜的上皮微绒毛、实质层的胶原纤维排列、内皮细胞的细胞器等结构特点,认为这些结构特点是与正常兔角膜的生理功能密切相关的。利用兔角膜材料研究各种角膜疾病是适宜的。     

软性角膜接触镜在角膜病变中的临床应用

目的:探讨软性角膜接触镜在角膜病变中的治疗效果。方法:各种病因所至的角膜病变67例,其中角膜溃疡30例,外伤性角膜上皮剥脱13例,化学性烧伤(酸碱烧伤)12例,大型翼状胬肉切除术后12例。经配戴软性角膜接触镜,再辅以药物治疗。结果:65例患者刺激症状立即减轻,角膜上皮于1周内愈合,角膜溃疡于2周内愈合或溃疡病灶减小。结论:软性角膜接触镜在角膜病变中运用是一种具有临床价值、经济实惠的治疗方法。     

花背蟾蜍蝌蚪视神经再生与角膜诱导间关系的研究

以花背蟾蜍（Bufo raddei Srauch)后肢芽期蝌蚪为材料,切断其左眼视神经并进行角膜移植,在角膜诱导的不同时期取眼球固定,用环氧树脂Epon812包埋,制成兰薄切片,用次甲蓝、天青Ⅱ、硼砂染色后,在光学显微镜下观察切断视神经后视网膜的退化过程及在视神经再生的情况下视网膜诱导皮肤移植片转化为角膜的作用。结果表明,切断视神经,引起视网膜逐渐退化,移植的皮肤片与正常的皮肤其本相似;在分断的视神经发生再生并恢复其正常的生理功能的情况下,退化的视网膜逐渐恢复,同时被移植的皮肤片也出现表皮的去分化及表皮变薄等被诱导为角膜的过程,并对视神经的完整性与其诱导皮肤移植片转化为角膜之间的可能关系进行了讨论。     

自制鑽取供给角膜片的固定器

本文介绍了一种新的钻取角膜的固定器。本器械的优点是;①可以调正眼内压。②眼球固定牢固,操作过程中眼球不会前、后、左右移动。③底座平稳,不需用手扶持。④固定器可自由折卸,消毒方便。此器械不但可供动物实验,初年眼科医生利用离体眼球作手术练习以及示教之用,在临床上也有一定的实用价值。     

激光原位角膜磨镶术生物的力学特性

依据角膜的生物力学特点和结构特性,构造了角膜几何模型,以可视化模拟为原则、以有限元技术为基本方法,对激光原位角膜磨镶术进行了计算机模拟计算分析.探讨了角膜基质切削深度、切削光区直径以及眼内压值等重要手术参数对手术效果的影响.结果表明,眼压较大而角膜较薄的人不宜做LASIK手术,切削光区直径较小的矫正效果较好;采用现代工程分析知识及相关软件对激光原位角膜磨镶术生物力学特性进行分析,其结果对手术有很大的实际意义和一定的参考价值.