不同方法处理的角膜脱细胞基质组织学生物特性的比较

目的:比较不同的角膜脱细胞基质方法,旨在选择最适合的脱细胞基质方法,制备成为组织工程角膜支架材料和角膜替代物的脱细胞基质.方法:分别用胰酶-曲拉通法、SDS-戊二醛法、胰酶-冷冻法等方法对角膜进行脱细胞处理,并对脱细胞彻底的基质进行力学特性、透光率的分析.结果:用胰酶-冷冻法获得的兔角膜全层和分层基质脱细胞最彻底,基质的结构未见明显破坏,脱细胞基质在生物力学特性上与正常角膜接近,透光率低于新鲜角膜.结论:用胰酶-冷冻法获得的脱细胞基质与自然角膜接近,可作为组织工程角膜支架材料和角膜替代物.     

适用于不同尺寸血管的脱细胞方法研究

将胰酶消化与反复冻融相结合,旨在建立一种适用于各种类型血管的通用脱细胞方法,如隐静脉、颈动脉和主动脉。隐静脉、颈动脉和主动脉经胰酶消化和反复冻融脱细胞处理后,采用苏木精—伊红染色、Masson三色染色及弹性纤维染色来定性评价脱细胞效果和细胞外基质的保存效果,采用Image-Pro-Plus 5.1图像处理软件作进一步定量评价;扫描电子显微镜观察胞外基质的完整性。结果显示,组织染色及定量分析表明此胰酶消化与反复冻融相结合的方法完全脱除了隐静脉、颈动脉和主动脉得细胞,细胞外介质结构保存良好且完整。扫描电子显微镜观察亦表明细胞外基质保存良好,且基质纤维致密规整。表明胰酶消化与反复冻融相结合的脱细胞方法是一种很有前景的制备各种不同类型血管支架的方法。     

流体室温磷光法测定痕量钛（Ⅳ）

基于曲拉通X-100和HAc-NaAc(pH=5．9)存在，不除氧条件下，曲拉通X-100能增敏钛(Ⅳ)-4，5-二溴苯基荧光酮流体室温磷光信号的增强效应，建立了曲拉通X-100增敏4，5-二溴苯基荧光酮的超高灵敏度流体室温磷光增强法测定痕量钛(Ⅳ)的新方法。钛(Ⅳ)量为3．2-6．4pg／mL与△Ip值成线性关系，其工作曲线的回归方程△Ip=-31．12 147．2CTi (pg／mL)，r=0．9997，检出限为1．38pg／mL。该方法用于人发和茶叶中钛含量的测定，结果满意。     

浊点萃取-紫外测蛇床子中蛇床子素和欧前胡素的含量

采用浊点萃取法富集蛇床子中蛇床子素和欧前胡素,并用紫外分光光度法测定其含量。采用非离子表面活性剂曲拉通X-114(Triton X-114)作为萃取剂,得出最佳试验条件为:萃取蛇床子素和欧前胡素Triton X-114的质量浓度分别为0.05 g/mL和0.06 g/mL;液固比为100∶1;pH为4;平衡温度为40℃;超声时间为18 min。结果在最佳试验条件下,测得蛇床子素为1.35%左右,欧前胡素为0.45%左右。浊点萃取是一种安全、高效、简便的样品处理方法。     

油田污染土壤中石油回收的模拟研究

以华北油田原油和华北平原典型表层土壤为模拟原料，配制了石油污染土壤．在十余种表面活性剂中发现曲拉通、平平加、壬基酚聚氧乙烯醚和石油烷基苯磺酸钠四种洗油效果较好．根据单纯形格子点法设计了这四种表面活性剂的复配实验，并采用神经网络模型对复配实验结果进行了优化分析，确定了三组最佳洗油剂配方：(i)3(曲拉通)：1(石油烷基苯磺酸钠)；(ii)2(曲拉通)：1(平平加)：1(石油烷基苯磺酸钠)；(iii)3(曲拉通)：1(平平加)：2(壬基酚聚氧乙烯醚)：4(石油烷基苯磺酸钠)．三种配方的助剂为硅酸钠和碳酸钠，助剂量分别为30—50％．以此为基础，分别考察了搅拌温度、时间、强度、固液比和加药浓度的变化对石油污染土壤清洗效率的影响，并根据正交实验结果对工艺条件进行了优化．结果表明，当搅拌强度为150r／min、搅拌时间50min、搅拌温度75℃、固液比1：20、加药总浓度0．3g／L时，对含油13．42％，的污染土壤，脱油率为90．15％．清洗后污油无明显乳化现象，且浮于液面，只须简单刮油即可回收．若将药剂使用量增加到2．5g／L时，脱油率可达98％以上．     

猪血管脱细胞细胞外基质制备的初步探讨

采用高渗、低渗溶液,结合去污剂—酶联合处理猪腹主动脉,进行组织学检查,从而制备血管脱细胞细胞外基质。结果表明:经该法处理的猪血管细胞全部脱除,细胞外基质保持完好,未见胶原纤维、弹性纤维有断裂现象。作者认为,高渗、低渗溶液结合去污剂—酶联合处理,是制备血管脱细胞细胞外基质理想的方法。     

兔骨髓间充质干细胞复合脱细胞牛松质骨体外相容性研究

探讨脱细胞牛松质骨（Acellular Bovince Cancellous Bone，ABcB）生物衍生材料与骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）的生物相容性，为组织工程方法修复骨缺损提供依据。将兔骨髓间充质干细胞与ABCB复合并体外培养，然后进行形态学、细胞增殖、蛋白质含量测定。骨髓间充质干细胞能够贴附在ABCB孔隙内生长，细胞生长及蛋白合成功能不受ABCB的影响。ABCB生物相容性良好，可作为组织工程的支架材料应用于骨缺损的修复；BMSCs可以作为骨组织工程种子细胞。     

聚乙二醇修饰物混合曲拉通X100-硫酸盐-液-固萃取体系分离纯化基因重组蛋白的可行性研究

以工程菌中被绿色荧光蛋白修饰的基因重组蛋白为对象,构建了聚乙二醇天冬氨酸修饰物PEG-ASP-Cu(Ⅱ)混合曲拉通X-100-硫酸盐-水液-固萃取体系纯化该融合蛋白.探讨了在体系中适用的表征目标蛋白的荧光方法,通过实验确定了采用恒波长同步荧光法测定日标蛋白质,可排除萃取体系中其他因素,尤其曲拉通X-100对目标蛋白测定的影响,得出最件测定条件.通过验证可知该萃取体系对目标蛋白最佳正萃分离条件和最佳反萃条件.结果表明:未加入修饰物的单纯液-固萃取体系对目标蛋白萃取固相收得率在50％～89％;加入修饰物后,体系对目标蛋白的一次萃取固相收得率提升并稳定在97％以上,最高达100％,一次反萃取率达68％.     

大鼠骨髓基质细胞体外定向诱导成骨

将大鼠骨髓单细胞悬液静置培养36h，利用骨髓基质细胞贴壁能力强的特点对其进行纯化和扩增培养。采用爬片培养、HE染色、组化染色以及碱性磷酸酶活性和钙含量测定等手段研究培养骨髓基质细胞的形态、分化和分泌基质情况。结果表明，非诱导培养条件下骨髓基质细胞呈梭形，部分传代细胞中可观察到脂肪细胞和肌细胞。经成骨性诱导培养后，骨髓基质细胞发生明显的形态学变化，碱性磷酸酶活性上升，钙含量增加，最终形成典型的矿化结节。提示培养大鼠骨髓基质细胞具有分化成脂肪细胞和肌细胞的能力，但其分化成骨的潜能最为强大。本实验诱导骨髓基质细胞分化为成骨细胞的模式有可能适用于骨组织工程研究。     

蜚蠊壳聚糖的快速制备方法研究

研究微波方法快速制备蜚蠊壳聚糖的实验条件，运用L9(3^4)正交实验法，将碱浓度、时间、微波加热温度、料液比在三个不同水平上进行优选实验，得出最佳制备条件为45％的NaOH，温度100℃，时间30min，壳聚糖脱乙酰度可达84．9％．此工艺比常规方法时间短，得率较高．     

松质骨孔隙率的二维光电检测

采用二维光电检测方法研究松质骨孔隙率沿不同方向的分布规律。新鲜猪胫骨后肢松质骨制备成36张切片并均分成两组：一组为沿胫骨轴向的横切切片，另一组为垂真于胫骨轴向的纵切切片。经光镜观察和图像分析，计算出每张松质骨切片表面的总面积、骨基质的面积、孔隙的面积及该松质骨切片的孔隙率。测试结果表明：松质骨孔隙率在轴向沿靠近密质骨的方向逐渐减小，在垂直于胫骨轴向方向基本不变；松质骨可看作是横观各向同性材料；如果切片数据足够多，采用二维光电检测方法，能较为准确地测试出松质骨孔隙率沿不同方向的分布规律。     

利塞膦酸盐对磷硅酸钙理化及生物性能的影响

将利塞膦酸盐(0.5%和1.0%)与含有磷硅酸钙的骨水泥粉末混合后进行水化反应,测定骨水泥固化时间及抗压强度,并分析其载药前后的微观结构变化.通过细胞毒性与基因表达水平检测分析了骨水泥的生物性能.结果表明:在0.5%药物水平下,骨水泥促进成骨细胞增殖与分化效果最佳.药物可延缓骨水泥固化,但骨水泥的气孔率会随之降低且晶体结构会更加紧密.载有利塞膦酸的磷硅酸钙骨水泥具有与松质骨相似的力学强度及良好的生物相容性,作为骨组织修复材料具有很好的应用价值.     

松质骨粘弹性的数值分析

引入基于连续介质力学框架基础之上的现代两相多孔介质模型来描述松质骨的力学行为,对松质骨在给定恒应力和变形下的蠕变和应力松驰等与时间相关的是性行为进行了研究,彩和Laplace变换技术,得到了松质骨蠕变和应力松驰的解析结果,研究表明,由于松质骨中流体组分的扩散和流动,松质骨呈现着一种强烈的表观粘弹性行为以能量耗散性质。     

松质骨拉伸破坏细观分析

在对松质骨力学性能实验及拉伸扫描电镜观察实验的基础上,从细观的角度探讨松质骨的变和破坏现象。在此基础上,运用细观力学模型对松质骨压缩及拉伸的力学行为进行了分析,得出了弹性模量与相对密度的关系,与实验结果基本吻合。     

基因重组人骨形成蛋白4成熟肽在大肠杆菌中的大规模发酵表达及纯化

含有编码人骨形成蛋白4成熟肽(Bone morphogenetic protein 4 mature peptide,hBMP-4m)cDNA表达质粒的菌株,经50代传代,质粒不丢失,仍然稳定高表达hBMP-4m。将此菌株导入15 L NBS发酵罐中进行恒溶氧高密度发酵、诱导表达,测定发酵菌液OD600值为43.5,离心收集菌体,PAGE电泳结果hBMP-4m占细菌总蛋白量的39％。悬浮所收集的菌体、裂菌,洗涤后的包涵体中hBMP-4m占蛋白量的85％。将少量包涵体用8 mol尿素缓冲液溶解分别上SP阳离子和Q阴离子交换柱,用连续盐浓度的洗脱液洗脱蛋白,收集各蛋白峰做蛋白电泳分析,找到洗脱液的最合适盐浓度。然后将全部包涵体用8 mol尿素缓冲液溶解,上阳离子交换柱SP柱,以最佳盐浓度洗脱液洗脱,获得纯度为91％的hBMP-4m。再上阴离子交换柱Q柱,最佳盐浓度洗脱液洗脱后,所得hBMP-4m纯度为98％。     

骨灰煅烧改性对骨质瓷性能的影响

骨灰是烧制骨质瓷的最重要的原料,提高骨灰的质量也是提高骨质瓷性能的关键.对骨胶厂提供的骨灰进行煅烧处理,通过红外、热分析、X射线衍射和扫描电镜等表征手段系统地研究了煅烧温度对骨灰的显微形貌和结构变化的影响规律,以及骨灰煅烧改性对坯体浆料流动性和坯体烧结工艺的影响规律.实验结果表明,在1 200℃下对骨灰进行煅烧,可获得轮廓清晰、圆球形和颗粒尺寸适中的煅烧骨灰,有利于提高骨质瓷坯体浆料的流动性,扩大坯体烧结温度范围,并且能提高坯体的白度.通过合理配方和工艺优化,骨质瓷坯体烧结后白度为92.97%,密度为2.70 g/cm3,收缩率为16.83%.     

三种仿生人工骨内部微细结构的对比研究

提出一种采用基于快速成形的立体编织技术来制造纤维增强复合材料仿生人工骨的方法，制造的三种仿生人工骨内部的纤维分别被铺设成螺旋、正交和同心结构，其中正交结构和同心结构人工骨的内部纤维可以被精确地安置在设计位置上，根据犬桡骨缺损修复实验过程中的X光片、组织切片和成分对比等内容，研究了人工骨内部不同的纤维结构对促进成骨和人工骨降解的影响，研究发现，在骨修复初期三种仿生人工骨都能提供一定的机械性能，但是随着时间的推移，螺旋结构人工骨的降解量最小，同心结构人工骨的成骨量最高，说明由壳聚糖、骨形态发生蛋白和磷酸钙盐等制成的纤维增强型人工骨具有良好的骨传导和骨诱导作用，其中同心结构人工骨具有最佳的成骨作用，其内部纤维结构相对最优。     

熟料粒度对骨粉/磷酸钙生物骨水泥结构与性能的影响

采用新方法首次将动物骨中的鱼骨引入到磷酸三钙和磷酸氢钙等原料体系中通过高温烧结制备磷酸钙基生物骨水泥(CPC),以柠檬酸和柠檬酸钠的缓冲液为固化液、按一定的液固比制备固化试样,通过扫描电子显微分析(SEM)和力学性能测试等方法,研究了熟料粒度对其固化试样结构与抗压强度的影响,结果表明:制备过程中骨水泥粉来的粒度对其固化试样的微观结构及其抗压强度有着较为显著的影响,通过调整骨水泥粉末的粒度可达到优化其固化试样的微观结构和改善其力学性能的目的.     

松质骨动电响应分析

通过对松质骨结构特征和力学行为的实验观察 ,引入基于混合物理论的现代两相多孔介质弹性模型和动电效应模型来描述松质骨固体骨质变形、孔间骨髓流动以及骨内流动电位间的耦合效应 .采用 Laplace变换技术得到了松质骨围限压缩下流动电位分布的解析结果 .结果表明 ,由于在外界作用下松质骨骨小梁结构产生变形 ,引起孔间骨髓流动 ,从而使带电粒子在孔隙间运动 ,引起流动电位 .