甘糖酯对大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物活性的诱导作用

为了研究甘糖酯对大鼠体内尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase Plasminogen Activator,uPA)活性的影响,采用溶解圈中和抑制法和发色底物法检测了大鼠口服甘糖酯后体内uPA活性的变化情况。结果表明：甘糖酯可提高大鼠体内血液的纤溶活性,主要表现为uPA活性升高。以不同剂量的甘糖酯连续喂药10d后,发现喂药组大鼠uPA活性明显高于对照组,喂药组大鼠血浆uPA活性升高同喂药剂量正相关,在0－100mg/kd的剂量范围内,随喂药剂量增加而升高。提示在一定的剂量范围内甘糖酯可提高大鼠体内uPA活性,激活纤溶系统,提高血液纤溶活性,表现出良好的抗栓作用。     

大鼠口服古糖酯后尿液中糖胺聚糖的变化及其对一水草酸钙晶 …

通过对尿液总糖胺聚糖的含量测定，尿液古型古糖酯的检测以及尿液对一水草酸钙晶体生长和聚集抑制率的变化，研究大鼠一次性口服古糖酯后，三天内尿液糖胺聚糖的变化，以及尿液对一水草酸钱晶体生长和聚集抑制率的变化。结果表明，大鼠口服古糖酯后，尿总糖胺聚糖含量在第一天和第二天显著升高，第三天恢复到原有水平。与之对应，尿古型古酯在第一、二天可以测到，第三天消失，尿液对一水草酸钙晶体聚集抑制活性显著增强，但对晶体的     

电针对佐剂性关节炎大鼠炎症局部阿片肽基因表达的影响

以佐剂性关节炎大鼠为炎症痛模型，选择悬钟，昆仑穴位，采用原位杂交组织化学方法，观察电针（ＥＡ）对大鼠炎症局部阿片肽前体物质前阿黑皮素（ＰＯＭＣ）和前脑啡肽原（ＰＥＮＫ）ｍＲＮＡ的表达，结果ＥＡ可以促进炎症局部免疫细胞中ＰＯＭＣ和ＰＥＮＫ ｍＲＮＡ的表达，使阿片肽的合成和释放增加，以实现外周炎症局部的镇痛作用。     

地高辛标记cRNA探针原位杂交检测大鼠脑NMDAR—L mRNA

采用地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｎ Ｄｉｇ）标记神经递质受体ＮＭＤＡＲ－Ｌ ｃＲＮＡ探针技术进行原位杂交，研究了Ｗｉｓｔａｒ新生大鼠脑神经细胞ＮＭＤＡＲ－Ｌ的基因表达。光学显微镜观察结果显示，大脑皮层、海马等区有明显的ＮＭＤＡＲ－Ｌ ｍＲＮＡ表达，胞浆着蓝色，胞核不着色，背景浅谈，反差显著。实验结果表明地高辛标记ｃＲＮＡ探针能快速、准确地检测出ＮＭＤＡＲ－Ｌ ｍＲＮＡ，为进一步研究这一拟受体在脑中表达和分     

赤子爱胜蚓纤溶酶活性的研究

研究了赤子爱胜蚓纤溶酶活性的提高条件及酶的最适作用条件。以纤维蛋白平板法测定赤子爱胜蚓纤溶酶活性。结果表明，纤溶酶在温度(57～59)℃，pH在8.0时，酶活性较稳定。赤子爱胜蚓纤溶酶干燥粉末浸泡在氯化钠等溶液中，可提高纤溶酶活性4-5倍。     

纳豆激酶纯化及性质研究

以蒸煮后的大豆为原料通过纳豆菌发酵,生产纳豆激酶.改进纯化工艺以酸法提取和凝胶过滤纯化出比活性为160.8IU/mg的酶制品.该酶制品不仅对纤维蛋白有很好的溶纤作用,而且对大鼠血纤维（拟血栓）也有很好的溶纤活性,实验还证明该酶制品对大鼠新鲜血液有很好的抗凝性能,尤其是该酶制品在pH值为2.45和经胃蛋白酶作用后仍保持较高的活力.同时,该方法制备工艺简便,有0.6%的高回收率,故本方法提取的纳豆激酶制品有望开发成为新型口服溶栓、防栓制剂,以供医疗和保健应用.     

VP—16诱导的鼻咽癌细胞亚系多药耐受表型的研究

经ＶＰ－１６大剂量短暂冲击加递增低浓度诱导方法建立了鼻咽癌耐药细胞亚纱ＬＣＥ／ＶＥ,用ＲＴ－ＰＣＲ和ＰＣＭ免疫荧光法检测了耐药基因ＭＲＰ和ｍｄｒ１在ｍＲＮＡ水平和蛋白质水平的表达,并用ＭＴＴ法测定了ＬＣＥ／ＶＰ对９种化疗药物的敏感试验,结果发现ＬＣＥ／ＶＰ细胞几ｍｄｒ１在ｍＲＮＡ水平均有表达,且前明显高于后,蛋白质水平的表达情况与ｍＲＮＡ水平相一致,ＬＣＥ／ＶＰ对９种化疗药物中的６种药物敏感程     

电针对大脑中动脉阻塞大鼠一氧化氮合酶mRNA表达的影响

本课题旨在探讨电针对动物急性脑缺血时神经保护作用的可能机制，由于ＮＯ的作用在脑缺血不同阶段及细胞来源而有所不同，因此，观察了电针对脑缺血后各型ＮＯＳｍＲＮＡ表达的影响，结果表明，针刺可能通过抑制脑缺血后ｎＮＯＳｍＲＮＡ，ｉＮＯＳｍＲＡＮ的过量表达而起到对神经元的保护作用     

钙离子拮抗剂治疗高血压病患者过程中细胞内外钙调素水平的变化

从分子水平研究钙离子拮抗剂治疗高血压病的机制。用反转录聚合酶链反应法测定淋巴细胞内钙调素（ＣａＭ）基因的ｍＲＮＡ转录水平以及用ＲＩＡ法测定细胞外（即血清）ＣａＭ浓度,借以观察在用钙离子拮抗剂治疗高血压的过程中,细胞内外ＣａＭ水平的改变。发现随着正规服用钙拮抗剂治疗时间的延长,高血压患者淋巴细胞内ＣａＭ基因ｍＲＮＡ的转录水平亦受到抑制。服用钙拮抗剂时间长于３个月者,ｍＲＮＡ的转录水平显著降低（Ｐ＜０．０１）,而治疗时间在１个月之内者,ＣａＭ基因的转录水平无明显变化（Ｐ＞０．０５）。对于细胞外ＣａＭ的水平,在服用钙拮抗剂治疗时间＜１个月者,血清ＣａＭ浓度下降,而长期服用钙拮抗剂的患者则相对增高,但均无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。在用钙拮抗剂治疗高血压的过程中,细胞内和细胞外ＣａＭ的水平均发生变化。用钙离子拮抗剂治疗高血压病长于３个月者,细胞内ＣａＭ基因的ｍＲＮＡ转录水平明显受到抑制,而细胞外ＣａＭ浓度则无论服用钙离子拮抗剂时间长短,变化均不显著     

LPS致大鼠肺泡Ⅱ型细胞凋亡及对Fas抗原表达的影响

探讨Ｆａｓ信号通路在肺泡Ⅱ型细胞损伤作用的可能机制及意义．建立大鼠肺泡Ⅱ型细胞体外培养，采用流式细胞术、原位杂交、逆转录、多聚酶链式反应等方法，观察大肠杆菌内毒素（ＬＰＳ）对肺泡Ⅱ型细胞ＦａｓｍＲＮＡ、蛋白质及细胞凋亡的影响．成功建立大鼠肺泡Ⅱ型细胞体外培养技术，ＬＰＳ刺激后，肺泡Ⅱ型细胞ＦａｓｍＲＮＡ、蛋白质表达均显著增加（Ｐ＜０．０１），ＬＰＳ可诱导肺泡Ⅱ型细胞凋亡，并在一定范围内呈量－效关系，表明ＬＰＳ对肺泡上皮的损伤效应，除直接损伤作用外，还可能通过诱导Ｆａｓ抗原表达增加，而致细胞凋亡的方式进行     

体外反搏对冠心病患者纤溶状态的影响

通过观察20例冠心病患者体外反搏前后的纤溶状态,显示冠心病患者的血浆组型纤溶酶原激活物(t-PA)水平与血管壁释放t-PA能力均降低。纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)则活性升高。说明体外反搏能使冠心病患者纤溶状态得到改善,t-PA释放能力反搏后得到提高(P<0.05)。     

枯草杆菌纤溶酶基因的克隆及表达

为了提高豆豉纤溶酶(DFE)的表达产量,采用PCR方法从高纤溶活性的枯草芽孢杆菌DC12的基因组中扩增获得DFE基因,将含有启动子至3非翻译区的全长1400 bp基因插入大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE3,构建了DFE基因的表达质粒,化学转化枯草杆菌WB800获得了DFE的重组表达菌.试验结果表明:DFE基因在自身启动子驱动下,在蛋白酶缺陷型的枯草杆菌中获得了高活性的分泌表达;重组表达菌株培养30 h后,培养物上清液中的纤溶酶活性最高可达690U/mL.     

脉冲磁场对Kluyveromces fragilis生长及菊糖酶合成的 …

研究了脉冲电磁场对ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ细胞生长和菊糖酶生物合成的影响,结果发现：９４Ｈｚ,１４ｍＴ,脉宽为１３００μｓ,间歇时间为８７００μｓ,上升和下降时间为２００μｓ的矩形脉冲磁场的作用使菊糖酶活力提高了２３％,这种脉冲电磁场对酶的诱导合成作用使菊糖酶的合成总量是对照样的１３６％,同时发现这种作用使对应菊糖酶ｍＲＮＡ合成量增大,而且菊糖酶ｍＲＮＡ合成量增大与菊糖酶生成量     

束缚应激引起小鼠脾内TrKC mRNA水平变化

用地高辛标遍的寡核苷酸探针进行ＲＮＡ缝隙杂交，观察了束缚应激不同阶段的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾内ＴｒｋＣｍＲＮＡ表达水平的变化。结果显示脾内ＴｒｋＣｍＲＮＡ于应激８ｈ时表达明显增加，而于４和１２ｈ时均有不同程度的降低，提示ＮＴ－３／ＴｒｋＣ系统在应激引起的神经－免疫系统相互调节中起一定作用。     

蚯蚓纤溶酶同工酶的分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）分析了赤子爱胜蚓和秉氏环毛蚓的两个不同部位的纤溶酶同工酶酶谱。表明纤溶酶主要存在于蚯蚓的内容物中，秉氏环毛蚓内容物中的纤溶酶种类多于赤子爱胜蚓。提示用秉氏环毛蚓内容物提取蚯蚓纤溶酶，效果较好。     

糖尿病大鼠肾、胰基因组DNA甲基化状态的变化

从正常大鼠，糖尿病大鼠，中药糖微康治疗的糖尿病大鼠，西药开搏通治疗的糖尿病大鼠的肾，胰等组织中提取出其基因组DNA，应用对DNA甲基化作用敏感的限制性核酸内切酶HpaⅡ和MspⅠ（为一组同裂酶（进行了限制性酶切图谱分析，结果表明，DNA化作用的主要位点在CpG二核苷酸处，且“糖微康”在关闭患糖尿病后肾组织中被异常活化的基因的同时，还能活化糖尿病动物胰组织中处于静息状态的基因，由此可见糖尿病的发病和治疗都与DNA甲基化作用密切相关。     

黄杞总黄酮的抗血栓作用及其机理研究

【目的】探讨黄杞总黄酮(TFER)的抗血栓形成作用及其机理,为进一步评估和研发黄杞的抗血栓形成作用提供实验依据。【方法】建立3种实验性血栓形成模型:大鼠腹主动脉血栓模型、大鼠体内静脉血栓模型、大鼠"衰老加血瘀证"血栓模型,观察TFER的抗血栓作用,研究其机理。【结果】TFER能延长腹主动脉血栓形成大鼠血浆凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT),降低纤维蛋白原(Fib)含量,同时能缩短血栓长度,降低血栓形成率;能减轻体内静脉血栓形成大鼠的血栓湿重;能降低大鼠血清血栓素(TXB2)、内皮素1(ET-1)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)、丙二醛(MDA)含量以及脑组织MDA和脂褐质(Lf)含量,同时提高大鼠血清前列环素(PGI2)、纤溶酶原激活物(t-PA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。【结论】TFER具有抗血栓作用,其作用可能是通过调节凝血功能,调节血小板聚集反应,改善纤溶平衡异常,抑制脂质过氧化反应从而达到抗血栓作用。     

缺氧对脑星状细胞GAPDH和β—Actin基因表达的影响

目的：样本ＲＮＡ加样量的差异是影响Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交ＲＮＡ分析和反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）半定量分析的重要因素。因５－磷酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）和β肌动蛋白（β－ａｃｔｉｎ）ｍＲＮＡ水平一般相对恒定,常用于基因表达研究时样本加样量的校正。但有报道表明某些因素对ＧＡＰＤＨ和β－ａｃｔｉｎ的ｍＲＮＡ水平有一定影响。脑星状细胞（ＡＣ）是近年来神经科学的研究热点之一,有关其基因的研究得到广泛的重视     

在大肠杆菌中利用反义RNA抑制乙肝病毒（HBV）X基因的表达

将乙肝病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ株完整的Ｘ基因正向重组到原核表达质粒ｐＢＶ－２２１的ＰＬ启动子下游，得到能表达Ｘ蛋白的重组质粒ｐＢＶ－ＨＢＶ（＋）；同时将Ｘ基因反向重组到原核表达质粒ｐＢＶ－２２０的ＰＬ启动子下游，得到能转录Ｘ基因反义ＲＮＡ的重组质粒ｐＢＶ－ＨＢＸ（－）。利用这两个质粒，构建出能同时转录Ｘ基因ｍＲＮＡ和反义ＲＮＡ的重组质粒ｐＥＸ。ＡＮ－ＨＢＸ，并在原核水平上，证实了反义ＲＮＡ对Ｘ基因的表     

克隆胃粘膜细胞癌变相关基因的思路

采用ｍＲＮＡ和ＡＰ－ＰＣＲ等技术克隆胃粘膜细胞癌变相关基因在技术上是可行的。胃粘膜细胞癌变相关基因的获得，在阐明胃癌发生机制及胃癌的早期诊断和临床治疗方面，具有重要意义和广阔的应用前景。