兔血铜锌超氧化物歧化酶的纯化及其性质

用乙醇－氯仿处理，丙酮分级沉淀，ＤＥＡＥ－纤维层析等方法，从兔血红细胞中纯化出铜锌超氧化物歧化酶，产率为５１％，比活力为１２４３０ｕ／ｍｇ．该酶经冷冻干燥后呈淡蓝色，天然状态，下该酶的分子量约为３００００，由相同的两个亚基组成，紫外扫描表明纯酶在２６５ｎｍ处有最大光吸收值，经聚丙烯酰胺凝胶电泳后，用蛋白染色及ＮＢＴ活性染色均显示出三条带，结果表明用该纯化方法得到的ＳＯＤ为均一性纯酶，氨基酸组成显示     

用铜盐法纯化牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶

牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶（Ｃｕ·Ｚｎ－ＳＯＤ），经溶血，ＣｕＣｌ２处理及离子交换柱层析等步骤被纯化到高度均一程度．纯化酶在聚丙烯酰胺梯度凝胶图谱上的活性染色带与蛋白染色带相对应，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上呈现单一区带．元素分析表明该酶含有２个锌原子和多于２个的铜原子．分子量和亚基分子量分别为３３５００和１７８００．在紫外区酶有４个明显吸收峰，分别为２７４．６ｎｍ，２６６．２ｎｍ，２５８．８ｎｍ和２４５．４ｎｍ．该酶对热稳定，纯化后酶比活性为１４５２５ｕ／ｍｇ，活力回收率为４５％．本文对经ＣｕＣｌ２处理与氯仿－乙醇处理纯化的牛血Ｃｕ·Ｚｎ－ＳＯＤ进行比较，结果表明，氯仿－乙醇对酶的某些性质有影响     

芦荟超氧化物歧化酶同工酶Ⅱ的分离纯化及部分性质

从芦荟叶中提取的SOD溶液，通过丙酮沉淀、热变性、DEAE-琼脂糖柱层析、Sephacryl S-9200凝胶过滤，获得芦荟超氧化物歧化酶同工酶Ⅱ电泳纯产品．该同工酶经凝胶过滤测定全分子量为35kD及SDS-PAGA测得亚基分子量为17kD，由2个亚基组成．经等电点聚焦电泳测得该SOD的等电点为pH7．6．     

双孢蘑菇子实体超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化及部分性质

采用硫酸铵分级盐析、DEAE-Cellulose-52离子交换柱层析、Sephadex G-150分子筛柱层析分离纯化了双孢蘑菇(Agaricus bisporus)子实体超氧化物歧化酶.纯化了31倍,回收率为10.51%,纯酶比活力为5 512.6 u/mg,酶的最适作用温度为25 ℃,最适pH值为8.0,酶在25 ℃以下比较稳定,亚基分子质量为21 kD,全酶分子质量为43 kD, 该酶由2个相同的亚基组成.     

牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶的纯化及性质

牛血红细胞铜锌超氧物歧化酶经氯仿－乙醇混合液处理，丙酮沉淀，凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析等步骤提取和纯化．纯化酶在聚丙烯酰胺凝胶电脉（ＰＡＧＥ）图谱上的两条蛋白染色带和活性染色带相互对应，在ＳＤＳ—ＰＡＧＥ聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上呈现单一区单一区带，说明该酶已纯化到均一程度．此酶分子量为３４０００，亚基分予量为１７０００，在紫外区最大吸收值为２５８ｎｍ．该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２均敏感，在０～７５℃温度范围内对热稳定．纯化酶的比活性为７４６３Ｕ／ｍｇ，纯化１００９倍，酶的回收率为７９％．     

植物苯丙氨酸解氨酶的研究——Ⅱ 鹰嘴豆、无壳葫芦籽苯丙氨酸解氨酶的亲和层析纯化及其部分性质研究

鹰嘴豆和无壳葫芦籽黄化苗中苯丙氨酸银氨酶(PAL)经亲和层析纯化,聚丙烯酸胺凝胶电泳和SDS—FAGE鉴定均为一条蛋白带,用SDS-PAGE测得鹰嘴豆和无壳葫芦籽PAL亚基分子量分别为55000和74000。Sephadex G—200凝胶过滤法测得鹰嘴豆和无壳葫芦籽PAL分子量分别为205 000和280 000。表明这2科植物PAL均由分子量相同的4个亚基构成。     

黄鳝超氧化物歧化酶的纯化和部分性质研究

黄鳝超氧化物歧化酶粗酶液，经过正丁醇脱脂，丙酮分级沉淀，DEAE-琼脂糖离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤，从黄鳝中分离纯化获得铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)，并对其性质进行研究，最终该酶的比活力为1500U／mg，提纯倍数为368．5．回收率为24．7％．该酶对KCN不敏感．而对H2O2敏感，对热较稳定，对酸碱有较强的耐受性，抗胃蛋白酶的破坏，聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电点聚焦电泳结果表明：纯化酶蛋白呈一条带，酶分子量约为85kD，亚基分子量约为16．5kD，等电点为7．15。     

限制性核酸内切酶Bsp63I的部分性质研究及与其同工酶的比较

纯化至电脉均一纯的限制性核酸内切酶Bsp63I经SephadexG-200测得相对分子质量约为113800,SDS－聚丙烯酰凝胶电泳测得其亚基相对分子质量约为56800,用DNS法测得该酶N－末端氨基酸为丙氨酸,表明该酶由2个相同的亚基组成,还对Bsp63I和它的同工酶PstI和Bsp78I之性质进行了比较。     

大熊猫肌肉肌酸激酶的纯化与性质

用改进的Ｋｕｂｙ等人方法从大熊猫骨骼肌中纯化了肌酸激酶，并对此酶的某些性质进行了研究。纯化倍数为 ３５．７；收率１７．３％；比活力为 ５５．３Ｕ／ｍｇ；等电点为 ６．６０。聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为一条带。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其亚基分子量为４２ ０００，总分子量为 ８４ ０００，该酶是由两个相同亚基组成的二聚体。酶对肌酸的Ｋｍ 为 ５．２６ｍｍｏｌ／Ｌ；对ＡＴＰ的 Ｋｍ为 ０．７４ｍｍｏｌ／Ｌ，酶的最适温度是 ３０～３６℃；酶的最适ｐＨ大于８．０。     

文昌鱼碱性磷酸酶的分子量及氨基酸组成的初步研究

经凝胶过滤法测得文昌鱼(Bronchiostoma belcheheri Gray)碱性磷酸酶的分子量为138,000,用等电聚焦电泳法测得其等电点为4.79,用氨基酸自动分析仪测得该酶的氨基酸组成共20种和1117个氨基酸残基。     

北京鸭血清IgM及其抗血清的提纯和腔上囊中B淋巴细胞IgM表达的初步研究

从未经超免的正常北京鸭血清中分离纯化鸭IgM,制备了兔抗鸭IgM抗血清,并进一步用鸭IgG进行了亲和纯化。本研究还试将此抗血清用于免疫荧光法对北京鸭胚胎后期腔上囊B淋巴细胞发育中IgM的表达进行了初步观察。     

硫酸软骨素酶的分离纯化及部分性质

通过细胞破碎、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose FF和Sephacryl S-200柱层析，首次从粘质沙雷氏菌中提取出硫酸软骨素酶.纯化倍数11.46,比活为81.23 U/mg蛋白.提取液经PAGE和SDS-PAGE检测，呈现一条带.该酶相对分子质量为71.2 KD,亚基分子质量为35 KD,该酶为2个相同亚基组成.等电点为7.19，最适pH值7.5，最适温度为40 ℃，以4-硫酸软骨素为底物测得Km值为3.98×10^-4 mol/L.     

对生玉米5-氨基酮戊酸脱水酶的简单快速纯化

以聚乙二醇６０００分级沉淀、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ,ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ层析和制备电泳初步纯化了对生玉米的５－氨基酮戊酸脱水酶,它在ｐＨ８．５时比活为３１Ｕ／ｍｇ蛋白,酶纯化了１１２倍,得率为１２％,其亚基分子量为４１ＫＤ,它可以用于酶促合成胆色素原,也可用于联合法测定胆色素原脱氨酶的酶活     

一种大规模、快速的幽门螺杆菌脲酶分离纯化方法研究

幽门螺杆菌定植于人胃黏膜并产生大量的脲酶,报道一种大规模、快速的脲酶纯化方法.脲酶用去离子水振荡及冻融法抽提,采用Q Sepharose FF阴离子交换层析,Phenyl Sepharose HP疏水相互作用和SOURCE30S阳离子交换层析等方法纯化得到脲酶,通过酚红脲酶试剂检测酶活.总蛋白回收率为2.58%,纯化后脲酶纯度大于95%,SDS-PAGE电泳显示脲酶是由相对分子质量66 000的A亚基和30 000的B亚基组成.     

Purification and Partial Characterization of a Collagenolytic Enzyme Produced by Pseudomonas aeraginosa SCU Screened from Rotten Hides

Strain Pseudomonas Aeraginosa SCU isolated from rotten hides is shown to produce various gelatinolytic enzymes with molecular masses ranging from - 50 to - 200 kD. A gelatinolytic enzyme called PAC exhibiting collagenolytic activity is purified by SP sepharose fast flow, Sephadex G-200 gel filtration and native PAGE cutting method. The purified enzyme has an apparent molecular weight of about 110 kD by SDS PAGE without β-mercaptoethanol. Treatment withtβ-Me suggests that PAC is dissociated into three subunits approximately 33 kD, 25 kD and 20 kD with a ratio of 2:1:1, named sub A, sub B and sub C repectively. EDFA and EGTA display a significant inhibitory effect on the enzyme activity while PMSF, leupeptin and pepstain do not appreciably inhibit it. The first 15 amino acid residues of the major subunit (subA) are determined and the sequence is Ala-Glu-Ala-Gly-Gly-Pro-Gly-Gly-Asn-Gln-Lys-Ile-Gly -Lys-Tyr. This sequence is identical to that of elastase of P. aeruginosa. The fragment of encoding mature sub A is cloned and its sequence is determined, which has a high homology with the gene of elastase. These results indicate that PAC is a novel collagenolytic metalloprotease composed of three kinds of subunits, of which elastase is the major one.     

芥篮叶超氧化物歧化酶的分离提纯

本文建立硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100层析,DEAE 纤维素(DE-52)拄层析方法从芥篮(B.alboglabra Baileg)叶肉中提纯超氧化物歧化酶,纯化倍数45.2,比活力97.3u/mg-pr(肾上腺素测定).南 DEAE-DE52层折获得的 SOD 活性部分,按 Weber与 Osborn 法作 SDS-PAGE,呈现单一斑带,分子量为13,000.此酶对热稳定性不高,70℃保温90min,活力全部丧失.纯酶液的最大吸收波长为204nm,芥篮叶中有四种 SOD同工酶.     

猪肝胆绿素还原酶的纯化及某些性质的研究

通过高速离心(105,000×g),硫酸铵分级分离、NADP—agaxose层析和SephadexG—100层析,从猪肝的胞浆中分离获得胆绿素还原酶.经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,该酶达到均一程度,分子量约为47,000道尔顿.酶被纯化4200倍,回收率为38%.这种酶利用NADPH和NADH作为电子供体,对巯基试剂特别敏感.如DTNB、NEM、pCMB及IDA等,都能不同程度地抑制该酶的活性.由HgCl_2处理,该酶活性的抑制是不可逆的.该酶用NADPH或NADH作电子供体时的最适pH分别是pH7.4和pH7.0.