两种东方系百合组织培养快繁技术

以东方系百合索邦和西伯利亚的种球鳞片为外植体,以MS为基本培养基,添加NAA、6-BA、TDZ、KT、IBA、2,4-D等不同植物生长调节剂,筛选鳞片愈伤组织诱导、增殖、分化及再生苗生根的最佳培养基,为百合种质保存、组培快繁及脱毒奠定基础.结果表明,索邦百合在MS+IBA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L培养基中愈伤组织诱导效果最好,在MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L培养基中愈伤组织增殖最好,在MS+NAA 0.3 mg/L+TDZ 0.1 mg/L+KT 0.2 mg/L培养基中分化最好;西伯利亚百合在MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L培养基中愈伤组织的诱导和增殖最好,在MS+IBA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L培养基中分化效果最好.二者均在1/2 MS+NAA 0.1 mg/L+IBA 0.01 mg/L培养基中生根最好.     

铁线莲'Multi-Blue'体细胞胚诱导和植株再生

以铁线莲品种'Multi-Blue'的茎尖为外植体,1/2MS为基本培养基,进行胚性愈伤组织和体细胞胚的诱导及植株再生条件的选择.结果表明:茎尖外植体在1/2MS+TDZ(1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L)+2%蔗糖+0.7%琼脂的固体培养基中培养时可形成淡黄色块状至颗粒状愈伤组织,经继代培养后可逐渐形成胚性愈伤组织;体细胞胚诱导以1/2MS+TDZ(0.2mg/L)+IBA(0.1mg/L)+ABA(0.3mg/L)+CH(0.5g/L)为佳,诱导率可达96%;而适宜的体细胞胚萌发培养基为1/2MS+6-BA(0.2mg/L)+IBA(0.05mg/L).体胚再生植株经驯化后,移栽成活率可达80%以上.     

铁线莲‘Multi Blue’体细胞胚诱导和植株再生

以铁线莲品种‘Multi Blue’的茎尖为外植体,1/2MS为基本培养基,进行胚性愈伤组织和体细胞胚的诱导及植株再生条件的选择。结果表明：茎尖外植体在1/2MS+TDZ(1.0 mg/L)+NAA(0.5 mg/L)+2 %蔗糖+0.7 %琼脂的固体培养基中培养时可形成淡黄色块状至颗粒状愈伤组织,经继代培养后可逐渐形成胚性愈伤组织;体细胞胚诱导以1/2MS+TDZ(0.2 mg/L)+IBA(0.1 mg/L)+ABA(0.3 mg/L)+CH(0.5 g/L)为佳,诱导率可达96 %;而适宜的体细胞胚萌发培养基为1/2MS+6-BA(0.2 mg/L)+IBA(0.05 mg/L)。体胚再生植株经驯化后,移 栽成活率可达80 %以上。     

铁线莲‘朱卡’组织培养技术及再生体系的建立

【目的】以铁线莲‘朱卡’(Clematis ‘Julka’)的带芽茎段为起始材料,通过组织培养方法建立再生体系。【方法】利用腋芽诱导—不定芽增殖—生根和愈伤组织诱导—增殖—分化—生根两种途径,建立该品种的组织培养再生体系,形成铁线莲‘朱卡’完整植株。【结果】铁线莲‘朱卡’组织培养最适宜灭菌条件为质量分数10%次氯酸钠溶液灭菌12min;带芽茎段诱导腋芽最适培养基为MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,不定芽增殖最适培养基为MS+IBA 0.20 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+GA₃ 0.2 mg/L;带芽茎段诱导愈伤组织最适培养基为MS+NAA 0.05 mg/L+6-BA 2.0 mg/L,愈伤组织增殖最适培养基为MS+NAA 0.20 mg/L +6-BA 2.0 mg/L,愈伤组织分化最适培养基为MS+NAA 0.03 mg/L+6-BA 3.0 mg/L;最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.3 mg/L。【结论】首次用两种器官发生方法建立了稳定高效的铁线莲‘朱卡’再生体系。直接形成不定芽时增殖倍数可达5.52。诱导愈伤组织途径的器官发生中,愈伤组织分化率可达76.7%,分化不定芽平均数超过3。两种途径诱导生根率都在90%以上。     

一品红离体培养及体细胞胚高频率发生的研究

一品红苞片为外植体进行离体培养,以MS+2,4-D 2.0 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1固体培养基愈伤诱导率及相对生长量最高。此培养基中继代的愈伤组织转入MS+2,4-D 1.0 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1+水解酪蛋白80 mg.L-1固体培养基时体细胞胚分化率最高。加入活性碳1 g.L-1有利于高频率体细胞胚发生。MS培养基优于N6和B5培养基,有利于高频率体细胞胚发生。胚性愈伤组织及时转入液体培养基中悬浮振荡培养有利于高频率体细胞胚发生。     

多变小冠花的组织培养和植株再生

本试验利用未完全展开的多变小冠花(Coronilla varia L.)子叶诱导成愈伤组织,通过体细胞胚胎发生和器官发生两条途径获得了再生植株。愈伤组织在含6-BA 0.5mg/L,KT 0.5mg/L,2,4-D2.0mg/L,CH400mg/L和Gln 225mg/L的MS培养基上培养2—3周后,转移到含6-BA 1.5mg/L,NAA 0.7mg/L,CH 400mg/L,Gln225mg/L的MS培养基上培养4周,再转到6-BA 0.5mg/L,KT 0.5mg/L,椰乳20ml/L,CH 400mg/L和Gln 150mg/L的MS培养基上,5周内形成胚状体。在1/2MS培养基上,胚状体萌发长成植株。愈伤组织在附加6-BA 1.0mg/L,NAA 0.5mg/L,KT 0.5mg/L,CH 400mg/L和Gln 225mg/L的MS培养基上,形成绿色瘤状组织。后者在含6-BA0.7mg/L,NAA 0.2mg/L,椰乳20ml/L,CH 400mg/L和Gln150mg/L的MS培养基上,诱导产生丛状不定芽,不定芽在生根培养基上诱导成完整植株。     

高羊茅高频再生体系的建立

目的建立高频再生体系,为相关基因的转化提供良好的受体系统。方法以高羊茅(Fes-tuca.arundinacea)成熟种子为外植体,以MS为基本培养基,进行高羊茅胚性愈伤组织诱导、继代、分化及生根培养。结果初生愈伤组织在MS 2,4-D5 mg/L CH400 mg/L 蔗糖60 g/L 琼脂12 g/L的继代培养基诱导出体细胞胚后,在含6-BA2.0 mg/L NAA0.5 mg/L的MS培养基上分化形成丛生苗,分化率达78.9%;再生苗在1/2 MS NAA0.5 mg/L生根培养基上生根,生根率达100%。结论MS 2,4-D 9 mg/L为最佳愈伤组织诱导培养基,MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.5mg/L为最佳分化培养基,1/2 MS NAA0.5 mg/L为最佳生根培养基。     

两种补血草属植物愈伤组织诱导的比较

以黄花补血草和大叶补血草无菌苗叶片为外植体,采用不同激素配比诱导愈伤组织,并分化获得不定芽,以建立两种补血草无性系,为植株快繁和细胞悬浮培养提供理论依据.结果表明:以补血草无菌苗叶片为外植体进行愈伤组织诱导和分化,可实现补血草快速繁殖,黄花补血草愈伤组织的诱导和分化较大叶补血草的容易.黄花补血草最适愈伤组织诱导培养基为MS 6-BA(0.3～0.5 mg/L) NAA(1.0～2.0 mg/L),最适分化培养基为MS 6-BA(0.3～1.0 mg/L) NAA(0.5～1.0mg/L);大叶补血草最适愈伤组织诱导培养基为MS 6-BA(0.3～0.5 mg/L) NAA 2.0 mg/L,最适分化培养基为MS 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.5 mg/L.     

小叶锦鸡儿的组织培养

小叶锦鸡儿是一种抗旱性强的落叶灌木,在防风固沙和水土保持方面功能显著。为了探索其组培扩繁的可行性,以茎段和无菌苗为外植体对小叶锦鸡儿进行了离体培养的初步研究。结果表明:相比于二年生木质化茎段,当年生未木质化的带节茎段具有更强的腋芽发生能力,在MS+0.5mg/L 6-BA+0.01mg/L IAA培养基上腋芽诱导率可以达到31.54%;无菌苗的子叶、真叶、茎段和下胚轴均有强的愈伤组织发生能力,在MS+2.0mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA培养基上愈伤组织诱导率均达到或接近100%,适合愈伤组织分化的培养基组合为MS+2.0mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA;无菌苗的带节茎段通过腋芽发生途径可以实现植株再生,芽丛诱导适合的培养基组合为MS+2.0mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA,在1/8MS+0.5mg/L NAA+0.5mg/L IBA培养基上诱导了不定根的发生。     

垂柳的组织培养及植株再生体系研究

对垂柳愈伤组织和植株再生体系进行了研究,结果显示茎段比较适合诱导愈伤组织,质量浓度为1.0mg/L和2.0mg/L的6-BA均能诱导垂柳茎段愈伤组织;MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+KT 0.5 mg/L的激素配比最为适合胚状体和芽的分化;MS+6-BA 1.0 mg/L+Ac 0.3%培养基能促使垂柳根的形成,且能促使芽生长,最终形成幼苗。     

大叶常绿杜鹃叶片离体培养及不定芽再生

以大叶常绿杜鹃无菌苗的嫩叶为试验起始材料,研究了其离体培养和不定芽再生的过程。结果表明:培养基为MS+ZT(1.0 mg/L)+ NAA(0.1 mg/L)时,大叶常绿杜鹃叶片可直接诱导再生不定芽,诱导率达70%; 也可以通过愈伤组织途径间接诱导出不定芽,愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D(2.0 mg/L)+KT(0.2 mg/L),增殖最佳培养基为MS+ZT(0.5 mg/L)+IBA(0.1 mg/L),愈伤组织分化的最佳培养基为MS+ZT(0.04 mg/L)+NAA(0.01 mg/L); 分化率最高为70%,分化苗数为6～10株; 生根培养基为MS+NAA(0.2 mg/L)+IBA(0.4 mg/L)时,生根率可达90%。腐殖土、黄沙、珍珠岩配比为4:1:1的混合基质较适合常绿杜鹃试管苗的炼苗移栽,成活率为90%。     

荞麦的组织培养及植株再生

荞麦（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ Ｍｏｅｎｃｈ．）无菌苗下胚轴切段在含不同激素配比的ＭＳ培养基上进行愈伤组织诱导,发现在 ２． ０ ｍｇ／Ｌ ２． ４－Ｄ与 １． ５ ｍｇ／Ｌ ６ ＢＡ组合时,可１００％地诱导出愈伤组织。愈伤组织在含 １．５ｍｇ／Ｌ ６ＢＡ和１．５ ｍｇ／Ｌ ２．４－Ｄ的激素条件下继代培养１代后转入含２ｍｇ／Ｌ ６ ＢＡ和１ｍｇ／Ｌ ＫＴ的 ＭＳ培养基上,计有８０％以上可分化出苗。转入０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ的 １／２ＭＳ培养基上则可诱导出根。研究建立了荞麦离体诱导高频率再生植株的实验体系。     

香龙血树和紫铁的组织培养与快速繁殖

香龙血树（Dracaena fragrans Ker-Gawl.)带腋茎茎段接种到MS＋BA 5mg/L（单位下同）＋IAA0．2培养基中诱导形成愈伤组织并在愈伤组织上发生不定芽的分化。紫铁（Cordy-line fruticosa var.“Compacta”）顶芽接种到MS＋BA2的培养基中可被大量扩增。两种植物的诱导芽接种到MS＋IAA0．2－0．4的培养基中,可直接发生不定根,所形成的试管苗移植后,生长正常,成活率90％－100％。     

2,4-D和6-BA对唐古特大黄愈伤组织诱导的影响

实验选用唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim.ex Regel.)种子萌发的无菌苗为外植体进行离体培养。结果表明,2mg/L的2,4-D最有利于愈伤组织的形成,但更高浓度的2,4-D会影响诱导效果;1mg/L的6-BA有利于愈伤组织的快速诱导,但单独的6-BA无诱导作用。     

裂叶秋海棠的离体快速繁殖

利用野生裂叶秋海棠叶片及叶柄培养，通过两种方式获得大量再生植株。(1)直接从外植体表面诱导出不定芽，最佳诱导培养基为MS 6-BA 3mg／L，不定芽在培养基MS NAA0．5mg／L 6-BA0．5mg／L增殖成丛生芽．(2)先诱导出愈伤组织，再由愈伤组织分化出大量不定芽．最佳愈伤组织诱导培养基为MS NAA0．5mg／L 2，4-D0．5mg／L 6-BA0．5mg／L,愈伤组织不定芽分化培养基为MS 6-BA 1mg／L,试管苗在含1／5MS无机盐的培养基上生根，之后移栽成活率达85％。     

2，4-D和6-BA对唐古特大黄愈伤组织诱导的影响

实验选用唐古特大黄(Rheum tanguticumMaxim.ex Regel.)种子萌发的无菌苗为外植体进行离体培养.结果表明,2mg/L的2,4-D最有利于愈伤组织的形成,但更高浓度的2,4-D会影响诱导效果;1mg/L的6-BA有利于愈伤组织的快速诱导,但单独的6-BA无诱导作用.     

水稻悬浮系细胞的建立及植株再生

水稻（辽盐9）种子在LS＋2,4－D（2,4-二氯苯氧乙酸）2．0～3．0mg/L的培养基上进行诱导培养,经3～4次继代后,即可得到淡黄色颗粒性愈伤组织;将该种愈伤组织在LS＋2,4－D2．0～3．0mg／L＋LH（水解乳蛋白）300mg/L的液体培养基上进行振荡培养,经4～5次继代后,即可建立起良好的细胞悬浮系;培养基中附加2．0～2．5mg／LKT,使愈伤组织和悬浮细胞均可再生,其再生率分别为15．9％～17．9％和18．1％～20．8％。     

山苦菜无性系建立的研究

以山苦菜无芽嫩茎为外植体诱导愈伤组织,经过继代培养后,以生长状态良好的愈伤组织进行分化培养,继续进行分化苗的生根培养,建立起山苦菜的无性系.结果表明:MS+BA(1.0mg/L)+NAA(0.1mg/L)+蔗糖(30g/L)是愈伤组织诱导和继代培养的最佳培养基;愈伤组织分化的最佳培养基为1/2MS+蔗糖(15g/L);诱导不定芽生根的最佳培养基是1/4MS+IAA(0.2mg/L)+蔗糖(20g/L);山苦菜试管苗移栽的最佳基质为1/2园土+1/2河沙.     

中华芦荟愈伤组织的诱导

以中华芦荟幼苗茎段为外植体,以MS为基本培养基,通过添加不同浓度的生长素、细胞分裂素或两者组合,以及添加Vc或活性炭(共350种组合),研究中华芦荟愈伤组织的诱导及生长情况.结果表明, 在单独使用不同种类的生长素时,不同浓度的生长素诱导的愈伤组织频率差异明显,且愈伤组织的生长状态也各异;单独使用细胞分裂素时,愈伤组织的诱导率极低.当组合不同浓度和种类的生长素和细胞分裂素时,愈伤组织诱导频率差异显著;同时发现在减轻愈伤组织褐化的效果上,Vc较活性炭好.通过对愈伤组织诱导结果的比较,MS 2.0 mg/L 6-BA 0.5 mg/L 2,4-D 10 mg/L Vc为中华芦荟愈伤组织诱导的较好培养基,愈伤组织诱导率达到91.4%,且愈伤组织生长较旺盛.     

红甜菜变异植株无性系建立的研究

以红甜菜变异植株的嫩茎为外植体成功获得再生植株，并建立快速无性繁殖系．嫩茎愈伤组织的诱导及不定芽分化的理想培养基是MS＋BA 1mg／L；不定芽的增殖生长理想培养基为MS＋BA0．1mg／L＋IAA0～0．5mg／L，理想的移栽基质是炉碳渣和河沙．