非哺乳动物精子膜抗原的研究 Ⅱ.鲤鱼精子膜蛋白不同组分对小白鼠抗生育效应的比较研究及其组分Ⅲ的免疫特性

本文比较了鲤鱼精子膜蛋白不同组分对小白鼠的抗生育效应.以抗生育效应良好的组分III的抗血清在体外作精子凝集试验,可观察到其抗血清在体外有凝集精子的作用.将其抗血清与相应抗原作双扩散试验,出现单一沉淀线,而全膜溶液的抗血清与其相应抗原则出现复合沉淀线.组织切片观察受抑孕的小白鼠的卵巢、输卵管等生殖系统组织没有发现异常的病理变化.     

不明原因不育症的病因学研究

应用定时曝光显微摄影法(TEP)对32例有生育力的正常男性与50例不明原因不育症患者进行精子运动特征的客观评价与分析,并同时进行精子形态学检查、精子膜 WGA 受体值测定和血清、精浆、精子膜抗精子抗体的免疫学检测。病因学研究表明,单纯由免疫因素所致不育的患者所占比例很小;不育组在精子膜 WGA 受体值上与正常对照组无显著差异;而在精子形态与运动功能方面有显著差异;导致某些不明原因不育症患者不育的因素可能是单一因素,也可能是二种以上对生育有影响的因素。TEP 是客观.定量评价精子运幼功能的一种较理想的方法,可检测出用常规精子活力评价方法难以查出的精子运动功能缺陷。在14项精子运动特征指标中,有6项指标在对照与不育组间存在显著差异,其中2项与精子畸形率的增加存在显著的负相关性(P<0.01)。     

不明原因不育症的病因学研究

应用定时曝光摄影法（TEP）对32例有生育力的正常男性与50例不明原因不育症患者进行精子运动特征的客观评价与分析,并同时进行精子形态学检查,精子膜WGA受体值测定和血清、精浆、精子膜抗精子抗体的免疫学检测。病因学研究表明,单纯由免疫因素所致不育的患者所占比例很缩小;不育组在精子膜WGA受体值上与正常对照组无显著差异;而在精子形态与运动功能方面有显著差异;导致某些不明原因不育症患者的不育因素可能是单一因素,也可能是二种以上对生育有影响的因素。应用TEP进行精子活力评价,可获得许多精子运动特征方面的信息。这种…     

兔抗小鼠IgG-HRP酶标抗体的制备及应用

制备并纯化小鼠腹水IgG,鉴定IgG纯度;免疫新西兰大白兔制备兔抗小鼠IgG的抗血清并纯化血清IgG;用改良过碘酸钠法制备兔抗小鼠IgG酶标抗体,对其进行鉴定,并与市场上的同类产品对比。结果,纯化的小鼠腹水IgG,其纯度约为80%—90%;免疫新西兰大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价在1：32以上;用改良过碘酸钠法制备酶标兔抗小鼠IgG酶标结合物与市场同类产品相比质量优良,特异性较强,亲和力较好,并在较长时间内效价稳定。结果表明,制备的小鼠IgG抗血清和酶标抗体,适合于小鼠的血清学检测体系的建立。     

人血管能抑素免疫兔抗血清制备及其特性测定

纯化的人血管能抑素包涵体进行SDS-PAGE分离，切胶回收目的蛋白，与弗氏不完全佐剂充分乳化后，进行多点皮下注射免疫新西兰白兔，制备兔抗人血管能抑素抗血清，抗血清去除交叉反应抗体后，进行Western Blotting分析抗血清与人血管能抑素及其N端和C端片段的抗原抗体反应特性。结果表明，经过4次加强免疫后，获得了高效价的兔抗人血管能抑素抗血清。抗血清去除交叉反应抗体后，Western Blotting分析表明，它能与人血管能抑素发生特异的抗原抗体反应，同时还能与人血管能抑素的N端片段和C端片段发生特异性较弱的抗原抗体反应。证明制备的兔抗人血管能抑素抗血清能应用于人血管能抑素及其N端和C端片段免疫学研究中。     

非哺乳动物卵透明带的成熟度和其免疫小白鼠抗生育效应的关系

前言应用卵透明带免疫进行生育控制的研究,近年来取得了较大的进展。不仅发现这一层包被在卵子外层的非细胞性透明带物质,有强的抗原性,而且进一步发现由它诱发的抗透明带的抗血清,有组织特异性,可以阻止体外及体内的精卵结合,起到抗生育效应。其作用原理可能是在卵表面形成抗原抗体免疫复合物,改变了卵透明带的理化特性,这表现在透明带折光性的变化和抵抗蛋白酶的消化作用等方面,从而影响精子在卵表面的粘附,以及干扰精子的穿透,抑制精卵的结合。     

多头绒泡菌线粒体中肌动蛋白的免疫细胞化学鉴定

自多头绒泡菌(Physarum polycephalum Schw.)原质团中分离线粒体,以兔抗肌动蛋白抗体为一抗,荧光素标记的羊抗兔IgG和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG作二抗进行间接免疫荧光和蛋白质免疫印迹实验.结果显示,线粒体中含有与肌动蛋白抗体呈阳性反应的抗原.以兔抗肌动蛋白抗体作一抗,金颗粒标记的蛋白A作二抗进行的间接免疫电子显微镜实验结果进一步证明了肌动蛋白是多头绒泡菌线粒体的组成成分,并在线粒体中呈散在分布.     

比较免疫磁珠法与A蛋白亲和层析法纯化兔抗血清中的IgG

优化了免疫磁珠分离法纯化抗血清的实验条件,并与A蛋白亲和层析法比较纯化效果,以求得到一种简便、快速、高效的纯化IgG方法.结果表明:从5只新西兰兔获得210 mL试管凝集效价高达1∶5 120的兔抗鳗弧菌抗血清,磁珠与IgG结合10 min达到平衡,其最大结合量为0.227 mg/mL;免疫磁珠分离法与A蛋白亲和层析法...     

南美白对虾血蓝蛋白与抗人IgG相互作用的研究

以采自汕头的南美白对虾血清为研究对象, 运用Sephdex_75 柱层析、PAGE、Dot_ELISA、SDS_PAGE和Western_blotting等方法, 探索血蓝蛋白与抗人IgG之间的相互作用. 结果表明, 血蓝蛋白不仅可与兔抗虾血蓝蛋白抗血清发生特异性的结合, 也可与抗人IgG发生明显的交叉反应. 进一步研究显示, 血蓝蛋白表现为相对分子质量分别为75 kDa和73kDa的两个亚基, 其中75 kDa亚基与抗人IgG呈显著阳性, 表明, 血蓝蛋白75 kDa亚基与人Ig存在相似的抗原决定簇或高度同源的同源区域.     

广州地区132对不明原因不孕夫妇抗精子抗体测定

对广州地区132对(264例)不明原因不孕夫妇,进行血清抗精子抗体测定,采用精子凝集试验(Sperm-agglutination test,SAT)和精子制动试验(Spermimmobilization test,SIT)方法。精子凝集试验有两种,即试管玻片凝集试验(Tube-Slide agglutination test,TSAT)及明胶凝集试验(Gelatin agglutination test,GAT)。试验同时与正常孕妇,未婚少女各132例及兔抗人精子血清做阴性和阳性对照。SAT(TSAT和GAT)试验结果有3.30％(4/132)男性患者及7.58％(10/132)女性患者为阳性。SIT试验有3.30％(4/132)男性患者与6.81％(9/132)女性患者为阳性。试验结果提示:对不明原因不孕患者有必要先排除由抗精子抗体这一免疫因素所引起的不孕。     

免疫转印技术对人结肠Mr40KD蛋白粗提物中干扰成份的分析

目的：分析ELISA包被抗原在检测溃疡性结肠炎（UC）血清ACA的非特异性干扰物。方法：应用免疫转印技术，结合酶标抗人IgG抗体和荧光抗人IgG抗体对含Mr40KD蛋白包被抗原的人结肠提取物进行纯度和免疫学性质的分析。结果：包被抗原粗提物中除含有Mr40KD蛋白外，还含有过氧化物酶和人IgG活性成份。给论：过氧化物酶和人IgG活性成份是应用ELISA法检测UC血清ACA－IgG的非特异性干扰物，需进一步纯化处理。     

兔抗PEB1多克隆抗体的制备及鉴定

摘要：【目的】利用纯化的空肠弯曲菌表面蛋白PEB1,制备其多克隆抗体。【方法】用PEB1蛋白作为抗原免疫兔,分离血清得到兔抗PEB1多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价,并用Western-Blotting验证。【结果】PEB1蛋白免疫兔后,得到了兔抗PEB1多克隆抗体,间接ELASA法检测表明兔抗PEB 1血清效价达到1：10 000,Western印记检测表明,该抗体能与PEB1蛋白发生特异性结合,其特异性与敏感性均较好。【结论】获得了高效价的PEB1多克隆抗体。     

VMP1基因的克隆及其抗体的制备与鉴定

为了得到效价高、特异性强、能用于检测内源性 VMP1 蛋白的抗体,采用RT-PCR 法,从L929细胞株中克隆鼠VMP1基因,重组入pCMV5载体,用 PCR 扩增与其氨基酸 132-239 区域对应的DNA片断,将该片段连接到原核表达载体 pGST parallel 中,在大肠杆菌 BL21 菌株中大量表达,经谷胱甘肽-琼脂糖树脂纯化后,得到高纯度的 VMP1抗原.免疫新西兰兔,获得抗 VMP1 蛋白的兔抗血清,将血清纯化后即得到抗 VMP1 的多克隆抗体.用 Western blot 分析手段检测了该抗体的特异性及效价.在用该抗体检测外源性和内源性 VMP1 蛋白的试验中,证实该抗体效价高,特异性强,效果很理想.此方法可用于获得大量廉价的抗 VMP1 蛋白的高滴度和高特异性的抗体,为进一步研究 VMP1 在细胞内,尤其是在信号转导通路中的功能和作用奠定了基础.     

VMP1基因的克隆及其抗体的制备与鉴定

为了得到效价高、特异性强、能用于检测内源性VMP1蛋白的抗体，采用RT-PCR法，从L929细胞株中克隆鼠VMP1基因，重组入pCMVS载体，用PCR扩增与其氨基酸132-239区域对应的DNA片断，将该片段连接到原核表达载体pGST parallel中，在大肠杆菌BL21菌株中大量表达，经谷胱甘肽-琼脂糖树脂纯化后，得到高纯度的VMP1抗原．免疫新西兰兔，获得抗VMP1蛋白的兔抗血清，将血清纯化后即得到抗VMP1的多克隆抗体．用Western blot分析手段检测了该抗体的特异性及效价．在用该抗体检测外源性和内源性VMP1蛋白的试验中，证实该抗体效价高，特异性强，效果很理想．此方法可用于获得大量廉价的抗VMP1蛋白的高滴度和高特异性的抗体，为进一步研究VMP1在细胞内，尤其是在信号转导通路中的功能和作用奠定了基础．     

用ELISA法测定SPA与多种动物IgG的结合特性

应用酶联免疫吸附试验对兔、大鼠、小鼠、小牛、绵羊、鲫鱼、鸭、蟾蜍和黄鳝9种动物血清IgG与SPA的结合特性进行了研究。酶标SPA浓度梯度,IgG包被浓度梯度及特异性自体和异体IgG阻断试验的结果表明:兔、大鼠、小鼠、小牛、绵羊及鲫鱼的IgG能与A蛋白结合,而鸭、蟾蜍及黄鳝的IgG不能与A蛋白结合。这些结果对进一步用葡萄球菌A蛋白作免疫测定和纯化IgG具有实用意义。     

GGPPS多克隆抗体的制备与鉴定

构建人香叶基香叶基二磷酸合成酶基因(GGPPS)原核表达载体,制备兔抗人GGPPS多克隆抗体.利用DNA重组技术构建原核表达载体pGEX-4T-GGPPS,诱导表达GGPPS融合蛋白,分离纯化该融合蛋白后,作为免疫原免疫家兔制备多克隆抗体.成功构建了pGEX-4T-1-GGPPS原核表达载体,转化Rosetta菌株后可高效表达GGPPS融合蛋白,成功制备GGPPS多克隆抗体,间接ELISA法测定抗体效价为1∶32000,并且抗体具有良好特异性.成功克隆GGPPS基因并制备了特异性的兔抗人GGPPS多克隆抗体,为进一步研究GGPPS的功能奠定了基础.     

从单个兔B细胞获得抗人cGAS蛋白单克隆抗体

为研究环鸟苷酸-腺苷酸合成酶入核的机制,利用兔外周血B细胞筛选抗人cGAS蛋白单克隆抗体.针对已三次免疫人cGAS(161-522)蛋白的新西兰兔,运用流式细胞术得到阳性效应B细胞,在单管里对单细胞裂解,得到总RNA,逆转录生成cDNA,两步巢式PCR扩增同一个B细胞来源的抗体重链和轻链可变区序列,抗体基因扩增成功率高达80%以上.293T重组表达兔抗人cGAS蛋白单克隆抗体并鉴定,获得1个具有较好结合特异性的兔抗人cGAS蛋白单克隆抗体,ELISA检测结果显示抗体的效价达1∶10 000.     

胸腺淋巴细胞免疫血清制备的初步研究

试验研究以猪胸腺淋巴细胞为完全抗原,采用一定的免疫程序致敏兔,刺激兔产生抗猪胸腺淋巴细胞的特异性抗体,在30天后分离血清,免疫效价达到1：640,证明兔血清含有该特异抗体,免疫程序合理,抗体效价确实．     

抗巨片形吸虫同型抗体在动物巨片形吸虫感染所致的抗体依赖性细胞介导的细胞毒反应( ADCC )免疫应答作用的研究

以印尼短尾羊（ITT）和美利奴细毛羊（Merino）两种品系的绵羊为实验动物，研究动物感染巨片形吸虫后所产生的抗体依赖性细胞介导的细胞毒反应的免疫应答。结果显示：对巨片形吸虫感染具有抗性的印尼短尾羊不产生特异性的IgG2，而易感品系的美利奴细毛羊感染巨片形吸虫后体内产生高滴度特异性IgG2抗体、特异性IgG2抗体在免疫应答中起着封闭抗体的作用，抑制巨噬细胞抗体依赖性细胞介导的细胞毒反应。由于印尼短尾羊不产生特异性IgG2抗体，对巨噬细胞抗体依赖性细胞介导的细胞毒反应不产生抑制作用，因此印尼短尾羊对巨片形吸虫的感染具有一定的抵抗力。使用纯化的IgG1和IgG2进行体外杀虫试验，结果IgG1有很强的促进体外杀虫效果，而自感染巨片形吸虫的美利奴细毛羊血清标本纯化的IgG2没有体外杀虫作用。体外实验还显示嗜酸性粒细胞在免疫血清、补体和IL-5的共同参与下具有较强的杀虫作用。     

小鼠肥大细胞蛋白酶4的原核表达和多克隆抗体制备

文章构建小鼠肥大细胞蛋白酶4（mMCP-4）原核表达体系,获得原核表达蛋白,并制备兔抗mMCP-4多克隆抗体,提取小鼠脾细胞总 RNA ,运用 RT-PCR技术获得目的基因 mMCP-4,构建重组原核表达载体pET28a-mMCP-4,将其转化到大肠杆菌BL21中诱导表达。mMCP-4融合蛋白经Ni亲和层析法纯化后,作为抗原免疫兔子获得mMCP-4多克隆抗体。采用ELISA法测抗体效价,western blot检测抗体特异性。结果表明,构建重组表达质粒pET28a-mMCP-4,经大规模原核表达获得大量mMCP-4融合蛋白,制备的兔抗血清效价达1∶128000,并表现出较好特异性。研究结果为进一步研究mMCP-4生物学功能奠定了基础。