魚卵透明带分离纯化方法及其对小白鼠抗生育效应的比较研究

前言早在1928年前曾有人证实卵组织皮下移殖可以引起不妊,但未引起人们重视。直到五十年代初期perlmann和他的同事对受精卵、精子和胶质的匀浆注射兔子所获得的抗血清的作用进行了广泛的研究,证明其中存在着一系列的抗原抗体反应,指出卵子的皮层具有一系列高度复杂而又与胶膜不同的抗原结构。到六、七十年代由于免疫技术的突破性进展,先后发现这些抗原位于卵的表面、卵泡的内膜和闭锁卵泡之中。1976年国外已报导应用哺乳类透明带作兽用抗生育疫苗专利。近年来,对非哺乳动物中的鱼卵透明带在哺乳类的抗生育效应开展了研究,并初步从透明带中分离提取出有抗生育作用的热溶性蛋白组分。国外对哺乳动物卵透明带的分离提取多用热溶解法,日本有报导应用植物凝集素作亲和层析分离提纯,1980年美国有报导用物理和化学相结合的分离提纯方法。鱼卵透明带的分离纯化方法及其理化性质一直未有报导。     

王瓜根抗癌糖蛋白的生理生化特征及其对肺腺癌细胞杀伤作用初步研究

经电泳分析,王瓜根活性蛋白可分为两种:其一是酸性蛋白,具细胞毒作用,等电点测定 P~I 为3.2,PAGE 电泳测定分子量为6.76×10~4道尔顿;其二是碱性蛋白,等电点为9.3,PAGE 电泳测定分子量为1.58×10~4道尔顿;微具细胞毒作用。王瓜根活性蛋白属糖蛋白,经纸层析和薄层硅胶 H 层析证实含半乳糖和木糖。扫描电镜观察和光镜连续观察,显示酸性蛋白对肺腺癌细胞的体外培齐有杀伤作用,当培养液含120μg/ml 时杀伤率达58%,对正常肺细胞作用弱;碱性蛋白对肺腺癌细胞杀伤作用较差,在同样剂量时只有47.6%杀伤率。新鲜王瓜根原汁有很强的杀伤肺腺癌细胞作用,剂量在26g/ml 时,杀伤率达60%;当提高到105g/ml 时,杀伤率达74%。试验结果提示:王瓜根活性抗癌物质,除指三萜—葫芦素之外,可能还存在另一种活性物质。这种活性抗癌物质对肺腺癌细胞表面微绒毛无作用,经处理24小时后,癌细胞开始变形,表现为不同程度内陷,32小时癌细胞膜开始溶解,48小时癌细胞溶成团块。     

基因工程菌株产生人类绒毛膜促性腺激素抗原的研究——Ⅰ.β-Galactosidase-hCG的分离纯化与鉴定

通过寡核苷酸合成仪,用化学方法合成相当于hcGβ链C末端36肽基因的片段,成功地克隆到噬菌体载体λgt11中,并在宿主菌株E. coli y_(1089)中得到表达。含λgt11 hCG重组体的E. coli y_(1089)所合成的含人类绒毛膜促性腺激素β链c末36肽的杂交蛋白(下称:β—galactosidase—hCG),通过硫酸铵沉淀、亲和层析和制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳,可得电泳纯单一色带的β—gaIactosidase—hCG。蛋白质转印(Western Blot)技术证实β—galactasidase—hCG具有hCGβ链c末端36肽的免疫特性。对流免疫电泳和免疫双扩散试验结果表明β—galactosidase—hCG具免疫原性。从一立升培养液的菌体中可分离纯化约3.8毫克的β—galaetosidase—hCG。     

基因工程菌株产生含人类绒毛膜促性腺激素抗原的研究 Ⅱ.β—galactosidase—hCG聚体蛋白免疫原性

基因工程菌株产生的含人类绒毛膜促性腺激素(hCG)β亚单位C末端36肽的β-半乳糖苷酶杂交蛋白(简称β-galaclosidase-hCG),在未经解聚处理前免疫新西兰种白兔和昆明种小白鼠,其抗血清在免疫双扩散试验和对流免疫电泳中对hCG没有形成沉淀线作用。而此杂交蛋白经解聚处理后,其抗血清与hCG相作用,在对流免疫电泳和免疫双扩散试验中都出现抗原抗体反应的免疫沉淀线。从多种蛋白质解聚系统中,经过反复试验,筛选出对β-galactosidase-hCG杂交蛋白有良好解聚作用的解聚剂为2M脲、0.9MSDS、0.005M巯基乙醇;解聚作用最适温度是60℃,最适时间为40分钟。     

花鲢〔Aristichthys nobilis(Richardson)〕卵透明带大分子组成及其主要理化性质研究

自从发现以卵透明带免疫有抗生育效应以来,七十年代中期,国内外不少科学家对哺乳类透明带的分离提纯及其抗生育试验作了专门研究,在国外虽然已申请了专利权,但有关其理化性质的研究近几年才开始有所报导,而鱼类卵透明带的大分子组成和理化性质始终未见有这方面的研究.我国自证明鱼卵透明带免疫在哺乳动物有抗生育效应后,我们已成功地创造了分步沉淀法提取鱼类和两栖类卵透明带,并取得了大量透明带纯品,     

王瓜根蛋白的柱层析分离及其抗生育作用

应用Ambelie.IRC.50柱层析分离纯化王瓜根抗早孕蛋白,图谱显示抗早孕蛋白达到基线分离,用SDS.PAGE不连续电泳证实是电泳纯。应用本工艺生产的王瓜根抗早孕蛋白作小白鼠抗着床试验,其ED_(100)(100％抑制率)为1.5mg/kg,是结晶天花粉ED_(100)(10mg/kg)的6倍以上,提示这种蛋白有可能作妇女房事后避孕的新药。对应用王瓜抗早孕蛋白注射后的小白鼠子宫作组织学鉴定,由显微组织切片显示王瓜根抗早孕蛋白较天花粉蛋白作用强,子宫组织发生了变化。用王瓜根做抗早孕蛋白口服试验,也证实其效果好。这提示王瓜根蛋白可制成简便口服避孕片。     

兎化猪瘟病毒颗粒蛋白组分性质研究——兎化猪瘟弱毒亚单位成分疫苗研究之一

在羊肾细胞培养液中繁殖的兔化猪瘟弱毒,经10%～15%聚乙二醇沉淀后,置低温-20℃冰箱过夜,离心3000r·p·m×15分钟,弃上清,沉淀用磷酸缓冲液溶解,透析后再经过 Sephadex G-50层析柱纯化,可得兔化猪瘟弱毒浓缩液。此浓缩液经50000倍稀释后作抗原感染家兔,获得定型热升温曲线,在兔降温后,再攻标准兔毒40×1毫升不再升温,证明达到50000倍对兔最小感染量(m、i、d、)的疫苗要求,与原来疫苗感染力相似,即聚乙二醇(PEG-6000)的回收率达100%,而相应的上清液几乎没有感染力,与 SDS-PAGE 电泳检查结果一致.目前国外猪瘟病毒多用蓖麻籽凝集素(CBA)作沉淀剂,方法虽简,但成本较高,不合我国国情。本文提出的方法,既经济而有效,其组分经蛋白质化学和免疫学方法鉴定,证实可作为亚单位成分疫苗.     

基因工程菌株产生的含人类绒毛膜促性腺激素抗原的研究 Ⅲ.β—Galactosidase—hCG 免疫和生物活性的初步探讨

基因工程菌株产生的含人类绒毛膜促性腺激素(hCG)β亚单位 C 末端36肽的β-半乳糖苷酶杂交蛋白(简称:β-Galactosidasc-hCG),主动免疫昆明种小白鼠,能诱发特异抗 hCG 抗体的产生。其抗体滴度的高低与免疫原用量有关。通过对小鼠子宫增重抑制试验,表明其抗血清能中和 hCG 的生物活性。     

非哺乳动物精子膜抗原的研究 Ⅰ.鲤鱼精子膜蛋白组分Ⅲ的分离纯化及其理化性质的研究

本文用离子型去垢剂脱氧胆酸钠溶解鲤鱼精子膜蛋白,制备性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳进行分离,电泳洗脱结合葡聚糖凝胶柱层析纯化,得到对小白鼠具有良好抗生育效果的鲤鱼精子膜蛋白组分III,并对其理化性质进行了研究.