基因工程菌株产生的含人类绒毛膜促性腺激素抗原的研究 Ⅲ.β—Galactosidase—hCG 免疫和生物活性的初步探讨

基因工程菌株产生的含人类绒毛膜促性腺激素(hCG)β亚单位 C 末端36肽的β-半乳糖苷酶杂交蛋白(简称:β-Galactosidasc-hCG),主动免疫昆明种小白鼠,能诱发特异抗 hCG 抗体的产生。其抗体滴度的高低与免疫原用量有关。通过对小鼠子宫增重抑制试验,表明其抗血清能中和 hCG 的生物活性。     

基因工程菌株产生含人类绒毛膜促性腺激素抗原的研究 Ⅱ.β—galactosidase—hCG聚体蛋白免疫原性

基因工程菌株产生的含人类绒毛膜促性腺激素(hCG)β亚单位C末端36肽的β-半乳糖苷酶杂交蛋白(简称β-galaclosidase-hCG),在未经解聚处理前免疫新西兰种白兔和昆明种小白鼠,其抗血清在免疫双扩散试验和对流免疫电泳中对hCG没有形成沉淀线作用。而此杂交蛋白经解聚处理后,其抗血清与hCG相作用,在对流免疫电泳和免疫双扩散试验中都出现抗原抗体反应的免疫沉淀线。从多种蛋白质解聚系统中,经过反复试验,筛选出对β-galactosidase-hCG杂交蛋白有良好解聚作用的解聚剂为2M脲、0.9MSDS、0.005M巯基乙醇;解聚作用最适温度是60℃,最适时间为40分钟。     

117β-雌二醇对小鼠脾脏CD11c阳性树突状细胞白细胞介素和TNF-α表达的影响

在mRNA水平上研究17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对小鼠脾脏CD11c阳性树突状细胞(spleenCD11c-positive dendritic cells,SDCs)合成的细胞因子IL-6,IL-10,IL-12和TNF-α的调节作用.方法:免疫磁珠法纯化小鼠CD11c阳性SDCs,用不同浓度的...     

(λ,μ)-模糊子群性质的研究

研究了(λ,μ)-模糊子群基本性质,讨论了(λ,μ)-模糊子群与其水平子群链的关系。得到了(λ,μ)-模糊子群能表示为另外两个非等价的(λ,μ)-模糊子群的并的条件。     

重组质粒βhCG-pPIC9K的构建及嗜甲醇酵母(Pichia pastoris)的转化

目的 :为用基因重组技术表达hCG避孕疫苗抗原 ,构建在酵母细胞中表达的重组质粒βhCG -pPIC9K ,转化嗜甲醇酵母 .方法 :根据βhCG的cDNA序列设计两条引物 ,使上游带EcoRI酶切位点 ,下游带NotI酶切位点 ,以质粒 βhCG -PBSKS为模板 ,进行PCR扩增反应 ;将所得的DNA片段经EcoRI和NotI双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接 ,然后导入大肠杆菌DH5α ,用PCR筛选阳性克隆并用双酶切鉴定重组子βhCG -pPIC9K .再用电打孔法转化酵母 (Pichiapastoris) ,用缺组氨酸MD平板筛选阳性株并在含G4 18的YPD培养基中筛选多拷贝插入菌株 .结果 :用所设计的引物扩增出两端分别带EcoRI和NotI酶切位点的βhCGDNA片段 ,插入pPIC9K并导入DH5α获得阳性克隆 ,经PCR反应和双酶切鉴定表明重组质粒是 βhCG -pPIC9K ,并转化嗜甲醇酵母获得耐受 4mg/mLG4 18的菌株 .结论 :构建了重组质粒 βhCG -pPIC9K并获得插入重组质粒 βhCG -pPIC9K的嗜甲醇酵母     

一类解析函数族的扩展及其 Fekete-Szeg(o)问题

仿照函数类B(λ,α,σ,β)的定义,用从属的定义引入了一个新的函数类A(λ,α,σ,β),利用Tuneski的研究成果和复分析中的一些方法得到它们在区间|z|＜r1=√2-1的包含关系B(λ,α,σ,β)(∩)A(λ,α,σ,β).利用刘名生的研究中关于从属的性质,讨论了函数类A(λ,α,σ,β)的Fekete-Szeg(o)不等式,通过计算得到了它分别在μ≤μ1,μ1≤μ≤μ2和μ2≤μ≤μ3的Fekete-Szeg(o)不等式,找到了μ2≤μ≤μ3时的极值函数,推广了相关结果.     

棉铃虫雌性成虫脂肪体cDNA文库的构建

用异硫氰酸胍 酚 氯仿 步法从棉铃虫雌性成虫脂肪体中提取总RNA ,经过Oligo(dT)纤维柱分离出mRNA .以mRNA为模板 ,Oligo(dT)为引物 ,在逆转录酶催化下合成单链cDNA(sscDNA) .然后在E .coliDNA聚合酶Ⅰ与RNaseH共同作用下 ,进一步合成双链cDNA(dscDNA) .平末端dscDNA与EcoRI/NotI接头连接 ,插入λgt11表达载体 ,经体外包装后转染Y10 90 r 宿主菌 ,构建成棉铃虫脂肪体cDNA文库 .该文库的滴度为 3.5× 10 5pfu/mL ,重组率为 10 0 % ,该文库适合于筛选低丰度mRNA的cDNA克隆 .     

β,β’—双(4—氧代安替比林)乙醚的合成及其结构鉴定

关于开链王冠类似物的研究,近年来15起了人们的兴趣。在此类化合物的结构与性能研究方面,Vogtle等提出了“末端基概念”(terminal group concept),但已经报道的适用的末端基尚不多。本文报道以4—羟基安替比林(Ⅰ)为端基合成β,β’—双(4—     

一类解析函数族的扩展及其Fekete-Szeg问题

仿照函数类B(λ,α,σ,β)的定义,用从属的定义引入了一个新的函数类A(λ,α,σ,β),利用Tuneski的研究成果和复分析中的一些方法得到它们在区间|z|相似文献   

中国明对虾ALFFc基因的原核表达与抗血清制备

利用聚合酶链式反应(PCR)技术和基因重组技术克隆了中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)抗脂多糖因子(ALFFc)基因的成熟肽编码序列并构建了pET-DsbA-ALFFc原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3)后,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)筛选法获得了1株高表达量重组菌,并通过实验确定其最佳诱导条件为:菌液初始OD6000.7,IPTG终浓度0.8 mmol/L,培养温度37℃,诱导时间3 h.重组蛋白经纯化后免疫新西兰大白兔制备了抗血清,为进一步研究ALFFc的功能奠定了基础.     

中国明对虾CrusFc-2基因的重组表达及抗血清制备

利用PCR和DNA重组技术克隆了中国明对虾CrusFc-2基因的成熟肽编码序列并构建了pET-DsbA-CrusFc-2原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3)后,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导得到了重组蛋白.重组蛋白经纯化后免疫新西兰大白兔制备了抗血清,Western Blot分析表明Crus...     

β-琼脂糖酶(AgaA7)基因的克隆与表达

为研究重组β琼脂糖酶(AgaA7)基因的表达产物及其生物活性,根据GeneBank中β琼脂糖酶(AgaA7)基因的编码序列合成此基因后,将其克隆到表达载体PQE30中,测序结果证明合成基因序列正确,未改变读码框.然后将此表达载体转入E.coli M15中进行诱导表达.纯化后的表达产物经SDS-PAGE检测其相对分子质量并鉴定其生物活性.结果表明:其相对分子质量约为5.0×104,与预期相符,具有生物活性.     

某类解析函数的Fekete-Szego不等式

作者引入一个新的解析函数类D(λ,α,δ,β),我们讨论了D(λ,α,δ,β)的Fekete-Szego不等式,得到了准确的结果,从而推广了一些作者的相关结果.     

某类解析函数的Fekete-Szeg不等式

作者引入一个新的解析函数类D(λ,α,δ,β),我们讨论了D(λ,α,δ,β)的Fekete-Szeg 不等式,得到了准确的结果,从而推广了一些作者的相关结果.     

鼠源抗AFB1噬菌体单链抗体库的构建与鉴定

研究以AFB1-BSA免疫的小鼠脾脏细胞为试验材料,利用RT-PCR技术,克隆了抗AFB1抗体重链和轻链可变区基因VH和VL,利用连接肽(Gly4Ser)3将VH和VL链接成单链抗体基因scFv,通过噬菌体展示载体pCANTAB-5E携带将其电转化E.coli TG1,经氨苄青霉素平板筛选,构建了库容为2.13×109 cfu/μg DNA的噬菌体单链抗体库,抗体库的克隆阳性率达到100%,且多样性良好,为高活性抗AFB1单链抗体的筛选提供了材料基础。     

4种11-脱氧甘草次酸3,30一双糖链皂苷的合成

合成4种11-脱氧甘草次酸3,30双糖链皂苷。以苯甲酰基保护的糖基三氯乙酰亚胺酯为供体,在TMSOTf的催化作用下与11-脱氧甘草次酸C3位羟基和C30位羧基进行偶联,以较好的收率制备得11-脱氧甘草次酸3,30双糖链皂苷(6a,6b,6c,6d)。化合物均未见报道,结构经核磁共振(~1H NMR)确证,均为1,2反式构型糖苷键。     

纳米β-硅酸钙/硒的制备及其抗菌性能

为进一步提高β-硅酸钙(β-CaSiO_3)的抗菌活性,在通过油水界面法合成纳米β-CaSiO_3的基础上,结合氧化还原法引入红色纳米硒(Se),制备出纳米β-硅酸钙/硒(β-CaSiO_3/Se)复合物。采用X射线电子能谱(EDS)和X射线衍射(XRD)对β-CaSiO_3/Se的成分和物相进行表征,进一步采用透射电子显微镜(TEM)观察样品微观形貌。选用大肠杆菌(E.coli)和金黄色葡萄球菌(S.aureus)测试纳米β-CaSiO_3和β-CaSiO_3/Se的抗菌性能。结果表明,本方法成功制得纳米β-CaSiO_3/Se复合物,其中纳米Se晶型为六方晶型。体外抗菌测试表明,纳米β-CaSiO_3/Se对E.coli和S.aureus均具有优良的抗菌性能。纳米β-CaSiO_3/Se与E.coli和S.aureus接触培养24h的抑菌率分别达到(92±4)%和(95±4)%。纳米β-CaSiO_3/Se有望作为新型多功效生物材料在生物医学领域获得应用。     

细菌产生人绒毛膜促性腺激素(hCG)类似物的初步研究——菌株分离及其含量检测

从江苏省肿瘤研究所获得九例手术后的恶性肿瘤组织块中分离到十株细菌,它们属人体内正常饭生物区系。这些细菌按照常规的细菌学鉴定法鉴定,纯化和鉴定后,每一株茵培养在含100ml大豆胰化蛋白胨液的三角烧瓶中,置37℃下振荡培养(180rpm)3天,培养液以4500转/分离心15分钟,去除菌体,上清液用放射免疫法测定,其中有八株细茵能产生hCG类似物。对照茵株(E.Coli)和培养液在测定方法敏感性范围之内皆呈阴性。我们的实验结果指出,细菌与癌之问可能有相关性,这与其他研究者的结果是一致的。     

RO_4~(n-)中R—O键强度(A_(R-o)~λ)与性质的关系

为了求得RO_4~(n-)(R=Si,P,S,Se,Te,Cl)离子中R—O键强度(A_(R-O)~λ)参数与H_nRO_4,RO_4~(n-)或其盐性质之间的定量关系,采用线性回归计算,得到(A_(R-O)~λ)对RO_4~(n-)中R—O之间重叠积分,R--O键长,RO_4~(n-)的热化学半径,水合热,钾盐热稳定性,H_nRO_4一级电离常数(pKa_1)等性质之间的六个线性方程,其相关系数绝对值范围为0.9662≤|R|≤0.9988。这表明(A_(R-O)~λ)与RO_4~(n-)离子性质之间存在着良好的线性关系,计算结果与实验值相一致。     

环氧合酶-2单克隆抗体的制备和初步应用

以合成肽COX-2-KLH为完全抗原免疫BALB/c 小鼠,通过脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合的杂交瘤技术,筛选获得4株(1E10、3D6、5B11、6G4)稳定分泌抗COX-2单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株.采用ELISA的方法鉴定McAb效价、亚型及特异性.各株McAb均属IgG1 亚型,其中1E10腹水纯化后MCAb效价在1∶107以上,SDS-PAGE电泳为单一条带,与同源异构体蛋白不发生交叉反应.获得的McAb被成功应用于COX-2生物学研究中的免疫组织化学(IHC)和Western Blot试验中.本研究获得的单抗具有特异、高效的特点,为COX-2生物学相关研究提供理论依据.