| 重组质粒βhCG-pPIC9K的构建及嗜甲醇酵母(Pichia pastoris)的转化 |
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| 引用本文： | 陈晓丽,潘善培,芦春斌,谢琪璇,肖銮娟.重组质粒βhCG-pPIC9K的构建及嗜甲醇酵母(Pichia pastoris)的转化[J].暨南大学学报,2000,21(5). |
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| 作者姓名： | 陈晓丽 潘善培 芦春斌 谢琪璇 肖銮娟 |
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| 作者单位： | 暨南大学生殖免疫研究中心,广东,广州,510632 |
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| 基金项目： | 广东省自然科学基金!(940 36 5 ) |
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| 摘 要： | 目的 :为用基因重组技术表达hCG避孕疫苗抗原 ,构建在酵母细胞中表达的重组质粒βhCG -pPIC9K ,转化嗜甲醇酵母 .方法 :根据βhCG的cDNA序列设计两条引物 ,使上游带EcoRI酶切位点 ,下游带NotI酶切位点 ,以质粒 βhCG -PBSKS为模板 ,进行PCR扩增反应 ;将所得的DNA片段经EcoRI和NotI双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接 ,然后导入大肠杆菌DH5α ,用PCR筛选阳性克隆并用双酶切鉴定重组子βhCG -pPIC9K .再用电打孔法转化酵母 (Pichiapastoris) ,用缺组氨酸MD平板筛选阳性株并在含G4 18的YPD培养基中筛选多拷贝插入菌株 .结果 :用所设计的引物扩增出两端分别带EcoRI和NotI酶切位点的βhCGDNA片段 ,插入pPIC9K并导入DH5α获得阳性克隆 ,经PCR反应和双酶切鉴定表明重组质粒是 βhCG -pPIC9K ,并转化嗜甲醇酵母获得耐受 4mg/mLG4 18的菌株 .结论 :构建了重组质粒 βhCG -pPIC9K并获得插入重组质粒 βhCG -pPIC9K的嗜甲醇酵母
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| 关 键 词： | βhCG PCR扩增反应 质粒pPIC9K |
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