铜绿假单胞菌外膜亚蛋白质组图谱的建立

铜绿假单胞菌是人类重要的病原菌,容易造成免疫缺陷患者如烧伤、艾滋病、癌症或囊性纤维化感染,对该菌外膜蛋白的研究有助于了解该菌的致病机制,为进一步疫苗研制奠定基础.采用月桂酰基氨酸钠的方法提取了铜绿假单胞菌的外膜蛋白,首次建立了外膜亚蛋白质组学表达图谱,鉴定了23个外膜蛋白,占所鉴定蛋白的82.1%.然后对其中的一个外膜蛋白基因PA3988进行了克隆及原核表达与纯化,经免疫小鼠获得抗血清后对外膜蛋白进行双向Western blotting分析,验证了质谱的结果.这些研究结果对铜绿假单胞菌外膜蛋白的深入研究具有积极作用.     

反应型双特异性免疫复合物的免疫生物学

在国内外首创双特异性循环免疫复合物（TCIC）的新概念,提出了一种检测循环免疫复合物的新分类方法,并在科研中实际应用,获国家教委科技进步（甲类）三等奖。在对抗原/Ig和抗原/补体-TCIC的研究中,发现了抗原/IgA-TCIC是有关疾病慢性化及其程度的重要指标,论证了抗原/补体-TCIC的免疫病理作用,获江西省科技进步二等奖。在对Ig/补体-TCIC的研究中,阐明了免疫复合物病理生理意义的Ig类型决定性和临床病型相关性等免疫生物学规律,获江西省科技进步二等奖。     

大黄鱼血清抗病功能蛋白分析

利用蛋白质组学技术筛选大黄鱼(Pseudosciaena crocea)血清中的抗病功能蛋白,通过对比两组抗病能力差异大的大黄鱼血清的双向电泳图谱,得到了21个显著的差异点,并用质谱获得上述差异点肽质量指纹图谱.进一步检索发现10号差异点是诱导型一氧化氮合成酶(iNOS),其催化产物NO可结合病原体的特定靶点,协助大黄鱼体内的免疫系统共同抵御病原体入侵,显著提高了大黄鱼的抗病能力,所以iNOS与大黄鱼抵抗病原体入侵密切相关.     

小鼠腹水瘤巨噬细胞对大肠杆菌O157免疫应答的膜蛋白质组学研究

采用膜亚蛋白质组学方法研究小鼠腹水瘤巨噬细胞Raw 264.7对致病性大肠杆菌O157的免疫应答反应,筛选并鉴定到24个差异表达的膜蛋白质.这些膜蛋白质与细胞免疫、细胞周期、细胞发育、细胞骨架、细胞生长等有关.在蛋白质水平上对巨噬细胞与大肠杆菌间的相互作用关系进行了一些探索性研究,为进一步揭示机体对病原反应的作用机制提供理论基础.     

WP2深海细菌基因组文库的构建和克隆子测序比对分析

以pUC19质粒DNA作为载体,用BamH1酶切、碱性磷酸酶处理后,分别与Sau3AⅠ部分酶切的Shewanella sp.(WP2) 基因组DNA 2-6kb的DNA片段连接,电击转化大肠杆菌DH5 α感受态,在含有Amp的LB平板上筛选重组子,得到转化子约5～6×103;随机挑取100个克隆子,经DNA测序,通过在网络数据库中进行BLASTX分析,得到一系列相对保守蛋白的比对结果.这些结果为遗传背景不清楚的细菌的研究,提供了一条从分子水平上探讨的技术路线.     

锯缘青蟹感染副溶血弧菌后血淋巴中差异蛋白的初步研究

采用蛋白质组学技术对锯缘青蟹受细菌感染后血淋巴中蛋白表达变化的情况进行初步研究.试验中以未感染锯缘青蟹为对照,用密度为每毫升5.0×107个副溶血弧菌的菌液感染锯缘青蟹,于注射后18 h分别抽取活菌注射组、灭活菌注射组、空白对照组的锯缘青蟹的血淋巴,进行蛋白差异分析.结果发现,与对照相比,锯缘青蟹感染细菌后,血淋巴中出现1条明显差异条带.肽质量指纹图谱及生物信息分析表明,该蛋白为cryptocyanin,是血蓝蛋白基因家族中的重要成员,提示cryptocyanin与免疫反应有关.     

细菌胞外多糖复合应用的免疫增强作用

提取4种细胞外多糖，研究其协同抗肿瘤作用。结果发现，4种多糖复合组的瘤重均明显低于各种多糖单独组，各种多糖间的免疫增强和抗瘤作用可以相互促进。这些结果说明，不仅要筛效果好的多糖物质，还要筛选最佳多糖配伍方案。     

OmpC高表达与大肠埃希氏菌四环素耐药的关系

大肠埃希氏菌(Escherichia coli)外膜蛋白OmpC与细菌耐药关系密切,但有关其高表达与大肠埃希氏菌耐药的关系研究尚不清楚.为深入探讨OmpC的耐药功能,将ompC克隆到pET-28a载体上进行诱导表达,采用MALDI-TOF质谱分析证明,重组OmpC能够在外膜上大量表达.以此高表达菌株进行四环素耐药试验发现,ompC-pET-28a-BL21的最低抑菌浓度(MIC)值是对照菌株pET-28a-BL21的64倍.研究结果从蛋白质水平进一步证明OmpC在大肠埃希氏菌耐药中的重要作用.     

三联疫苗对大黄鱼常见细菌性疾病免疫保护的实验研究

采用0.5%福尔马林4℃灭活和65℃热灭活2种不同的方法制备三联疫苗作为抗原,以多次腹腔注射或浸泡的方式免疫大黄鱼,通过测定受免大黄鱼血清中抗体凝集效价变化并进行攻毒实验以评估保护效果.结果表明:以福尔马林灭活疫苗注射免疫途径效果最佳,其血清抗体效价平均达1536,攻毒后1周内免疫保护率为88.9%;热灭活疫苗注射免疫途径效果也比较明显,其血清抗体效价平均达1024,攻毒后1周内免疫保护率为76.6%;福尔马林和热灭活疫苗浸泡免疫大黄鱼也有一定效果,免疫保护率分别为55.7%和44.6%.     

健康人C3/Ig双特异性免疫复合物与体液免疫的相关性

采用直线相关分析法,较系统地研究了健康人 Ｃ３／ Ｉｇ 双特异性循环免疫复合物（ Ｃ３／ Ｉｇ Ｍ  Ｔ Ｃ Ｉ Ｃ、 Ｃ３／ Ｉｇ Ｇ Ｔ Ｃ Ｉ Ｃ 和 Ｃ３／ Ｉｇ Ａ Ｔ Ｃ Ｉ Ｃ）与 Ｉｇ Ｍ 、 Ｉｇ Ｇ、 Ｉｇ Ａ 和 Ｃ３ 的相关性．结果发现, Ｃ３／ Ｉｇ Ｍ  Ｔ Ｃ Ｉ Ｃ 和 Ｃ３／ Ｉｇ Ｇ Ｔ Ｃ Ｉ Ｃ 含量主要取决于血清总 Ｉｇ Ｍ 和 Ｉｇ Ｇ 量; Ｃ３／ Ｉｇ Ｇ Ｔ Ｃ Ｉ Ｃ 与复合的 Ｉｇ Ｍ 、复合的 Ｉｇ Ｇ、总的 Ｃ３ 呈正相关,而与复合的 Ｃ３ 呈负相关．这些结果提示, Ｉｇ Ｇ 在健康人体液免疫中的重要作用．同时说明,健康人机体免疫反应是复杂多样的,深入研究 Ｃ３／ Ｉｇ Ｔ Ｃ Ｉ Ｃ 与体液免疫的相关性及其形成机理,将为揭示健康人的体液免疫机制提供重要参考．