谷胱甘肽转硫酶多克隆抗体的制备及应用

将含有谷胱甘肽转硫酶 ( GST)基因的 p GEX质粒转入大肠杆菌 TG1后 ,在 0 .5 mmol/L异丙基硫代 - β- D-半乳糖苷 ( IPTG)诱导培养下表达了 GST,用亲和纯化得到的 GST免疫新西兰大白兔 ,获得了滴度 ( ELISA)在 2× 1 0 5以上的抗血清 ,纯化后的抗体已成功地应用于两种新的融合蛋白 GST- FLP和 GST- Pre S1的免疫印迹检测和亲和层析法纯化     

兔抗小鼠IgG-HRP酶标抗体的制备及应用

制备并纯化小鼠腹水IgG,鉴定IgG纯度;免疫新西兰大白兔制备兔抗小鼠IgG的抗血清并纯化血清IgG;用改良过碘酸钠法制备兔抗小鼠IgG酶标抗体,对其进行鉴定,并与市场上的同类产品对比。结果,纯化的小鼠腹水IgG,其纯度约为80%—90%;免疫新西兰大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价在1：32以上;用改良过碘酸钠法制备酶标兔抗小鼠IgG酶标结合物与市场同类产品相比质量优良,特异性较强,亲和力较好,并在较长时间内效价稳定。结果表明,制备的小鼠IgG抗血清和酶标抗体,适合于小鼠的血清学检测体系的建立。     

北京鸭血清IgM及其抗血清的提纯和腔上囊中B淋巴细胞IgM表达的初步研究

从未经超免的正常北京鸭血清中分离纯化鸭IgM,制备了兔抗鸭IgM抗血清,并进一步用鸭IgG进行了亲和纯化。本研究还试将此抗血清用于免疫荧光法对北京鸭胚胎后期腔上囊B淋巴细胞发育中IgM的表达进行了初步观察。     

人类精子膜抗原的生殖免疫学研究

用脱氧胆酸钠去垢剂溶解的人精子膜蛋白,经过Lens柱亲和层析后,洗脱得与Lens凝集素亲和性高的抗原蛋白,以此主动免疫雌兔可以诱发雌兔产生特异性抗体。因此抗体作体外精子凝集试验,精子制动试验和间接免疫荧光试验(以下简称免疫特性三项指标)均呈阳性反应,说明特异性精子膜蛋白可以诱发机体产生特异性抗体。从抗血清中用饱和硫酸铵沉淀和葡聚糖凝胶G—200柱层析纯化得到的IgG,在体外对人精子试验的免疫特性三项指标亦为阳性,表明这种兔抗人精子膜蛋白的抗体是免疫球蛋自G类。在原因不明的不育症者检查中,发现有些原因不明的不孕症病例具有抗精子抗体,因此,我们获得的抗血清有助于作免疫不育症的临床诊断。我们曾用兔抗鱼精子膜蛋白的抗血清和IgG对人精子作免疫特性三项指标试验,结果亦为阳性反应,说明此抗血清有种间交叉反应。     

用ELISA法测定SPA与多种动物IgG的结合特性

应用酶联免疫吸附试验对兔、大鼠、小鼠、小牛、绵羊、鲫鱼、鸭、蟾蜍和黄鳝9种动物血清IgG与SPA的结合特性进行了研究。酶标SPA浓度梯度,IgG包被浓度梯度及特异性自体和异体IgG阻断试验的结果表明:兔、大鼠、小鼠、小牛、绵羊及鲫鱼的IgG能与A蛋白结合,而鸭、蟾蜍及黄鳝的IgG不能与A蛋白结合。这些结果对进一步用葡萄球菌A蛋白作免疫测定和纯化IgG具有实用意义。     

小鼠肥大细胞蛋白酶4的原核表达和多克隆抗体制备

文章构建小鼠肥大细胞蛋白酶4（mMCP-4）原核表达体系,获得原核表达蛋白,并制备兔抗mMCP-4多克隆抗体,提取小鼠脾细胞总 RNA ,运用 RT-PCR技术获得目的基因 mMCP-4,构建重组原核表达载体pET28a-mMCP-4,将其转化到大肠杆菌BL21中诱导表达。mMCP-4融合蛋白经Ni亲和层析法纯化后,作为抗原免疫兔子获得mMCP-4多克隆抗体。采用ELISA法测抗体效价,western blot检测抗体特异性。结果表明,构建重组表达质粒pET28a-mMCP-4,经大规模原核表达获得大量mMCP-4融合蛋白,制备的兔抗血清效价达1∶128000,并表现出较好特异性。研究结果为进一步研究mMCP-4生物学功能奠定了基础。     

一种蛋白A的Z结构域衍生物的构建及对IgG亲和力的研究

蛋白A是金葡菌中一种重要的致病因子,有较强结合多种哺乳动物的IgG的能力,因此降低机体产生特异性SPA抗体的水平,使金葡菌具免疫逃逸功能.研究一种与IgG亲和力较弱的蛋白A衍生物,对金葡菌疫苗的开发具重要意义.研究表明,蛋白A的Z结构域中位于第13、14位的Phe,Tyr是两个与IgG结合的关键位点.本文首次通过PCR突变技术,将这两个关键氨基酸均改造为Gly,构建突变体ZFY.Discovery Studio3.5受体-配体相互作用力模块分析显示,突变体ZFY与IgG结合力降低到-61.68kcal/mol,仅为原相互作用力的10.69%;构建得到ZFY蛋白,经ITC测定,ZFY与兔IgG的亲和常数降低到1.2×104 M-1,仅为原亲和常数的0.39%,证明了ZFY是一种与IgG亲和力较弱的蛋白A衍生物,为实现新型蛋白A疫苗治疗金葡菌感染奠定基础.     

重组盐藻14-3-3蛋白基因的原核表达及分离纯化

根据克隆的杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因.经原核表达、Ni2+亲和层析法纯化,免疫动物制备抗体. 抗体蛋白质印迹分析检测结果表明抗体能特异结合盐藻细胞分子量为29 kD的多肽.     

静脉注射免疫丙种球蛋白柱层析分离的研究

用凝胶渗透谱色法(GPC)检测了柱层析分离纯化后所得的免疫丙种球蛋白(IgG)组分.结果表明,使用DEAE 阴离子交换纤维素-葡聚糖凝胶A-50柱层析法能从人血浆蛋白中分离出不含聚集体的纯IgG 单体.对肌注IgG 制剂使用葡聚糖凝胶Sephacryl S-200凝胶过滤法能除去IgG 中的聚集体,但却不能分离出存在于其中的小量血清白蛋白;但使用DEAE阴离子交换纤维素柱层析法效果却恰好相反.     

催化杀虫剂西维因水解的抗体酶制备(Ⅱ)多克隆催化抗体的制备、纯化及检测

以优选的合成抗原（Ｈ(ａｐ)－ＢＳＡ）免疫动物产生了滴度为１：５５０００（１号兔,Ｒｔ－１）的兔抗多克隆催化抗体．采用盐析和ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｘｏｓｅＣＬ４Ｂ亲和层析法,从兔抗血清中分离出了具有电泳纯度的多克隆催化抗体．经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测,ＩｇＧｓ相对分子质量为１４８０００．纯化后的多克隆抗体,经ＥＬＩＳＡ法测定,其最低检出活性为２×１０(－６)～４×１０(－６)ｇ／Ｌ．