CNTF抑制外周神经损伤后运动神经元的凋亡

研究成年大鼠坐骨神经切断后睫状神经因子 (CNTF)对运动神经元的神经保护作用以及cas pase - 3mRNA与运动神经元凋亡的关系。方法取成年SD大鼠 32只随机分为CNTF组和生理盐水(NS)组。切断大鼠右侧坐骨神经后硅胶管套接神经近端 ,将CNTF和生理盐水分别注入管中。于术后 2 ,5 ,1 0 ,2 0d取L 4～ 6脊髓作原位杂交和TUNEL标记检测 ,切片作HE染色计算脊髓内神经元的数目。结果与NS组相比 ,CNTF组的神经元数目有明显的改善 ,caspase - 3mRNA的表达明显下降。结论CNTF具有抑制运动神经元的凋亡的作用 ,其作用可能是由caspase - 3介导的     

bFGF对大鼠脊髓前角运动神经元的保护作用

利用大鼠坐骨神经钳夹损伤模型,观察了碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对大鼠脊髓前角运动神经元的保护作用。ＳＤ成年大鼠４０只,分成实验组和对照组,钳夹损伤大鼠坐骨神经。在实验组损伤侧受损的神经周围放入浸有ｂＦＧＦ的明胶海绵,对照组则用生理盐水浸泡海绵置于受损神经处。以大鼠右侧坐骨神经为正常自身空白对照。术后隔日一次向损伤侧腓肠肌肌注ｂＦＧＦ,对照组注射等量生理盐水。术后２、３、４、５周分别对每只大鼠进行心脏灌注固定,切取脊髓腰４～６节段,恒冷箱冷冻切片,Ｎｉｓｌ染色,观察脊髓前角运动元的形态,计算其数目,将损伤侧与正常侧比较,将ｂＦＧＦ治疗组与非治疗组作比较,统计学处理。结果：术后３、４、５周治疗组的损伤侧脊髓前角运动神经元存活率均大于对照组,且统计差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５）。表明ｂＦＧＦ对坐骨神经钳夹损伤所导致的脊髓前角运动神经元胞体死亡有保护作用,也许可能成为运动神经元新的神经营养因子。     

降钙素基因相关肽在受损SD大鼠面神经运动神经元中的表达与定位

目的：研究降钙素基因相关肽（calcitonin gene—related peptide。CGRV）在面神经损伤后再生过程中面神经运动神经元中的表达变化．方法：健康SD大鼠分别行左侧面神经茎乳孔压榨术,术后饲养3、7、14、21、28、35d,取出脑干含面神经核团部分,用免疫组化及图像分析技术,观察面神经核中的CGRP在面神经再生中的变化．结果：CGRP分布于正常SD大鼠面神经各亚核。面神经损伤后3d。损伤侧的面神经核中CGRP比对照侧增强．图像分析CGRP灰度值与对照侧比较,差异显著（P〈0．05）;损伤后7d达最高峰（P〈0．05）,以后尽管显著表达但渐减．结论：损伤导致CGRP在面神经运动神经元中的表达增加,提示CGRP在面神经再生修复过程中发挥调理作用．     

大鼠坐骨神经切断后经皮低频高强度电刺激相应脊髓节段中GAP-43表达的变化

目的探讨成年Wister大鼠在坐骨神经切断后GAP-43于相应脊髓节段前角运动神经元内的表达变化.方法选取健康成年雄性Wister大鼠60只,将坐骨神经切断,随机分为实验组和对照组,实验组给予经皮低频高强度电刺激,分别于术后1,2,4,8,12,16周处死,取其L4~L6脊髓,利用免疫组织化学技术检测GAP-43在相应脊髓节段中的表达变化,并利用影像分析系统进行统计学分析.结果对照组:1周时前角细胞胞体内GAP-43有明显表达,4周时达到高峰,5~8周时逐渐下调,9~16周时GAP-43在前角细胞胞体内中仍有少量表达,并呈弱阳性.实验组:1周时前角细胞胞体内GAP-43有明显表达,2周时达到高峰,且在4~16周时在神经元中仍有表达,并呈阳性.结论坐骨神经切断可导致成年大鼠相应脊髓节段中前角运动神经元GAP-43表达明显增加,可证明在周围神经损伤后神经元的再生能力增强,但时效很短.而给予低频高强度电刺激疗法后,GAP-43的表达在时长和量上都有明显增加.     

Tropic1808基因重组蛋白对损伤坐骨神经脊髓细胞凋亡的影响

探讨Tropic1808基因重组蛋白对损伤坐骨神经的新生大鼠脊髓细胞凋亡影响,将新生SD大鼠一侧坐骨神经切断后,用无菌止血海绵包裹断离的神经近侧端,海绵内加入Tropic1808基因重组蛋白,阳性用神经生长因子、阴性用生理盐水作为对照;术后3、6、12h经TUNEL法染色,在光镜、电镜和图像分析系统下,了解L4－L5段脊髓细胞凋亡情况。得到生理盐水组的脊髓出现大量绸亡细胞;Tropic1808基因重组蛋白组凋亡细胞数量较生理盐水组显减少;Tropic1808基因重组蛋白组与神经生长因子组之间凋亡细胞数量的差别无显性意义。说明Tropic1808基因重组蛋白有保护受损神经组织,减少细胞凋亡的作用。     

BMP7治疗大鼠脊髓损伤后NF200及GFAP表达的变化

目的探索BMP7促进大鼠急性脊髓损伤后运动功能恢复的作用,进一步研究BMP7对脊髓损伤处NF200及GFAP蛋白表达量的影响。方法实验用Wistar大鼠随机分为对照组和BMP7实验组,使用Allences's打击器建立大鼠T10节段脊髓损伤模型,BMP7实验组大鼠造模成功后连续7 d于脊髓损伤处注射50 ng BMP7,对照组造模成功后连续7 d于脊髓损伤处注射等体积的0.9%氯化钠注射液。2组大鼠分别于术后6 h、3 d、1 w、2 w、4 w、8 w进行BBB评分检测大鼠脊髓损伤后运动功能恢复情况,进行免疫组化实验检测损伤节段脊髓组织中NF200及GFAP蛋白表达量的变化。结果 BBB评分结果显示在1、2、4 w及8 w时BMP7实验组大鼠BBB评分均高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);免疫组化结果表明BMP7实验组大鼠脊髓损伤处NF200阳性表达细胞数在造模3 d后逐渐增多,至第4 w时达到高峰,且在1、2、4 w及8 w时均大于对照组,差异具有统计学意义;BMP7实验组及对照组GFAP阳性表达细胞数变化均不明显,两组间阳性细胞数差异不显著。结论 BMP7可以促进大鼠急性脊髓损伤后运动功能的恢复,BMP7可以上调脊髓损伤处NF200蛋白的表达量。     

同源盒基因Hox2.3在小鼠造血调控中的作用

同源盒基因在造血细胞系细胞中表达,它们的表达具有细胞类型特异性,为了阐明同源盒基因在小鼠造血调控过程中是否有决定性作用,我们采用反义脱氧寡聚核苷酸抑制试验和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)试验,证明小鼠同源盒基因(Hox2.3)对正常小鼠髓系血细胞的生长、发育调控起重要的作用。     

眼镜蛇毒神经生长因子对成年猫坐骨神经损伤治疗效果的实验室观察

目的 :探讨从眼镜蛇毒分离纯化出的神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)对成年猫坐骨经损伤后的影响。方法 :本实验制成成年猫坐骨神经损伤模型 ,损伤局部注射蛇毒NGF(2μg/kg/d) ,分别治疗10d和30d ,并与对照组(损伤坐骨神经 ,不给药物)比较。结果 :眼镜蛇毒NGF在神经损伤早期应用能减轻神经纤维发生的溃变 ,促进神经纤维再生。结论 :损伤局部长时间注射NGF会导致神经纤维增生过度 ,丧失传导功能     

大鼠急性脊髓损伤后肝癌衍生生长因子的表达

目的:观察大鼠受损伤脊髓组织中肝癌衍生生长因子(Hepatoma-derived growthfactor,HDGF)表达的变化.方法:将40只成年大白鼠随机分成对照组(A组)和脊髓损伤组(B组),每组20只.脊髓损伤组采用改良的Allen’s打靶法制备,并于术后24 h处死大鼠,取损伤脊髓节段进行免疫组织化学染色.观察HDGF在正常对照组以及脊髓损伤后表达情况.以表达指数作为统计学指标,采用X2检验分析各组间的变化.结果:HDGF主要表达在神经细胞核中.15例损伤脊髓标本表现为HDGF表达指数为Ⅱ组,对照组中表达指数为Ⅱ组仅4只(P<0.05).结论:HDGF高表达于损伤脊髓组织中,提示HDGF可能参与脊髓损伤的修复.     

骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤大鼠功能和结构修复的实验研究

观察骨髓间克质干细胞（MSC）移植对脊髓中度损伤大鼠运动功能的修复作用。方法：20只成年Sprague—Dawley（SD）大鼠随机移植组（n=10）和对照组（n=10）两组,均采用改良的A11en’s打击法遣成脊髓中度损伤（致伤冲量10g×4cm）。伤后1周,移植组于伤处移植大鼠MSC,而对照组仅注射等量PBS。分别于移植后1天,1周,2周,3周、4周用BBB评分观测大鼠的运动功能,并于移植后4周进行损伤脊髓的大体观察和组织学检测。结果：移植后1周两组动物运动功能恢复无明显差异。移植后2周、3周、4周,与对照组比较,移植组显著提高运动功能。移植后4周,移植组损伤脊髓的结构修复明显优于对照组。结论;脊髓损伤大鼠经MSC移植后能明显改善其运动功能和神经形态,MSC移植对脊髓损伤大鼠有治疗作用。     

全脑短暂性缺血后大鼠海马组织神经营养因子的时序性表达

探讨大鼠脑短暂性缺血后内源性神经营养因子NGF、BDNF和NT-3在海马组织中的变化规律,为神经损伤的修复治疗提供参考数据。本研究采用夹闭双侧颈总动脉的方法制作TGI大鼠模型,将大鼠随机分为术后3、7、14、21d以及假手术组5组,采用RT-PCR法检测大鼠海马组织中NGF、BDNF和NT-3mRNA表达水平的变化。研究结果表明3种神经营养因子在全脑短暂性缺血海马组织中出现表达下降趋势,其中以NGF mRNA的表达量下降最为显著(P<0.01)且具有快速恢复趋势,到损伤后21dNGF已上升至伤后3d水平。结果显示,这种变化规律提示短暂性脑缺血后3种神经营养因子表达水平的下降加剧了缺血再灌注对神经元的损害,其中NGF可能是脑缺血后发挥神经损伤修复的主要因子,有助于神经损伤的修复作用。     

免疫性肝纤维化大鼠结缔组织生长因子、转化生长因子β1基因相关表达及汉丹肝乐的影响

目的　研究结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)mRNA与转化生长因子β1(transform inggrowthfactorβ1,TGFβ1)mRNA在免疫性大鼠肝纤维化中的表达状况及汉丹肝乐对其的影响作用。方法　用猪血清腹腔内注射复制免疫损伤性肝纤维化模型,造模同时给予汉丹肝乐口服作为肝纤维化防治组;免疫攻击12周后处死动物。原位杂交方法检测肝内CTGFmRNA、TGFβ1mRNA表达。结果　12周后模型组大鼠形成典型的肝纤维化,肝内CTGFmRNA与TGFβ1mRNA表达均显著增强,同时二者阳性分布部位相近,表达程度呈正相关性;以汉丹肝乐防治的大鼠,肝纤维化程度明显减轻,CTGFmRNA和TGFβ1mRNA表达的阳性指数下降,且CTGFmRNA表达与组织病理上肝纤维化变化呈正相关性。结论　CTGF与TGFβ1基因的增高表达与肝纤维化形成有密切关系;汉丹肝乐能有效抑制CTGF与TGFβ1基因的表达。通过在转录环节上阻断肝纤维化相关的细胞内信号转导途径,可能是该药物作用的重要分子机制之一。     

免疫性肝纤维化大鼠结缔组织生长因子、转化生长因子β1基因相关表达及汉丹肝乐的影响

目的研究结缔组织生长因子(connective tissue growthfactor,CTGF)mRNA与转化生长因子β1(transform-ing growth factorβ1,TGFβ1)mRNA在免疫性大鼠肝纤维化中的表达状况及汉丹肝乐对其的影响作用.方法用猪血清腹腔内注射复制免疫损伤性肝纤维化模型,造模同时给予汉丹肝乐口服作为肝纤维化防治组;免疫攻击12周后处死动物.原位杂交方法检测肝内CTGFmRNA、TGFβ1mRNA表达.结果 12周后模型组大鼠形成典型的肝纤维化,肝内CTGFmRNA与TGFβ1mRNA表达均显著增强,同时二者阳性分布部位相近,表达程度呈正相关性;以汉丹肝乐防治的大鼠,肝纤维化程度明显减轻,CTGFmRNA和TGFβ1mRNA表达的阳性指数下降,且CTGFmRNA表达与组织病理上肝纤维化变化呈正相关性.结论 CTGF与TGFβ1基因的增高表达与肝纤维化形成有密切关系;汉丹肝乐能有效抑制CTGF与TGFβ1基因的表达.通过在转录环节上阻断肝纤维化相关的细胞内信号转导途径,可能是该药物作用的重要分子机制之一.     

电针对PCPA致失眠大鼠脾脏TLR7信号通路关键基因mRNA表达的影响

目的:观察电针对对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠大鼠脾脏Toll样受体7(TLR7)信号通路关键基因mRNA表达的影响,探讨电针治疗失眠的免疫学机制.方法:取健康SPF级Wistar雄性大鼠32只,随机分成空白组、模型组、电针组和安定组,每组8只.模型组以腹腔注射PCPA建立大鼠失眠模型,安定组给予腹腔注射安定,电针组给予电针神门(HT7)、三阴交(SP6)穴位,连续治疗5 d后用实时荧光定量PCR(RT-PCR)反应测定大鼠脾脏TLR7、髓样分化蛋白88(My D88),IL-1受体相关激酶4(IRAK4)、肿瘤坏死因子相关激酶6(TRAF6)、及核因子NF-κB(NF-κB)的mRNA表达.结果:与空白组对照,模型组TLR7、My D88、IRAK4及TRAF6的mRNA表达增加(P0.05);与模型组比较,电针组、安定组IRAK4、TRAF6及NF-k B的mRNA表达降低,电针组TLR7及My D88的mRNA表达降低(P0.05),但电针组与安定组比较,无统计学差异(P0.05).结论:失眠上调TLR7信号转导通路关键基因mRNA表达,TLR7可能参与免疫对睡眠的调节;电针可通过调节TLR7信号转导通路调控相关免疫物质的释放,改善睡眠及减轻失眠对机体带来的损伤.     

运动对心肌细胞中凋亡调控基因的影响

研究运动对心肌细胞中调控基因Bcl-2、Bax和p53的影响以探讨凋亡调控基因对运动引起心肌细胞凋亡的作用。以大鼠中等运动强度训练、一次性力竭运动和过度训练为运动模型，采用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术观察了大鼠心肌细胞中调控基因Bcl-2、Bax和p53mRNA的表达。长期中等强度的运动可造成大鼠心肌细胞中凋亡调控基冈Bcl-2mRNA表达明显增加，可抑制心肌细胞凋亡；而力竭运动和过度训练可引起心肌细胞中Bcl-2mRNA表达下降和调控基冈Bax、p53mRNA表达显著升高以及凋亡调控基因Bcl-2／Bax比值显著下降，可促进心肌细胞凋亡。心肌细胞中凋亡调控基冈Bcl-2、Bax和p53在不同运动后的不同表达对心肌细胞凋亡的发生有明显的调控作用。     

胰岛素样生长因子-2对大鼠坐骨神经横断性损伤后再生修复的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-2(IGF-2)对大鼠坐骨神经横断性损伤后再生修复的影响.方法 构建大鼠右侧坐骨神经横断损伤模型,并行手术修复损伤.将40只Wistar雄性成年大鼠随机分为空白组、生理盐水组、IGF-2组、地塞米松组,术后2、4、6、8、12周分别采用足印实验检测坐骨神经功能指数;术后12周进行大鼠手术侧肌肉湿质量比检测,截取缝合端坐骨神经,进行HE染色及组织形态学观察.结果 术后IGF-2组SFI值明显高于空白组和生理盐水组(P<0.05);术后2、4、6周,3个测定时间点IGF-2组SFI值低于地塞米松组(P<0.05),8、12周,两个测定时间点IGF-2组与地塞米松组SFI值差异无统计学意义(P>0.05).IGF-2组较空白组与生理盐水组肌湿质量比明显增高(P<0.05),IGF-2组与地塞米松组肌湿质量比差异无统计学意义(P>0.05).HE染色显示:IGF-2组较空白组及生理盐水组损伤修复后瘢痕组织少,神经鞘修复良好.结论 IGF-2对于大鼠坐骨神经横断性损伤后的再生与修复有一定的促进作用.     

免疫性肝纤维化大鼠结缔组织生长因子、转化生长因子β1基因相关表达及汉丹肝乐的影响

目的：研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)mRNA与转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGFβ1)mRNA在免疫性大鼠肝纤维化中的表达状况及汉丹肝乐对其的影响作用。方法：用猪血清腹腔内注射复制免疫损伤性肝纤维化模型,造模同时给予汉丹肝乐口服作为肝纤维化防治组;免疫攻击12周后处死动物。原位杂交方法检测肝内CTGFmRNA、TGEβ1mRNA表达。结果：12周后模型组大鼠形成典型的肝纤维化,肝内CTGFmRNA与TGFβ1mRNA表达均显著增强,同时二者阳性分布部位相近,表达程度呈正相关性;以汉丹肝乐防治的大鼠,肝纤维化程度明显减轻,CTGFmRNA和TGFβ1mRNA表达的阳性指数下降,且CTGFmRNA表达与组织病理上肝纤维化变化呈正相关性。结论：CTGF与TGFβ1基因的增高表达与肝纤维化形成有密切关系;汉丹肝乐能有效抑制CTGF与TGFβ1基因的表达。通过在转录环节上阻断肝纤维化相关的细胞内信号转导途径,可能是该药物作用的重要分子机制之一。     

博莱霉素肺损伤大鼠细胞凋亡及bcl—2／bax基因的表达

目的：探讨细胞凋亡与博莱霉素诱导大鼠早期肺纤维化及bax,bcl-2对博莱霉素大鼠肺纤维化细胞凋亡的作用。方法：通过复制博莱霉素大鼠肺纤维化模型,采用TUNEL、免疫组织化学、原位杂交及透射电镜等技术,观察博莱霉素大鼠肺组织细胞凋亡的变化及bax,bcl-2,bcl-2mRNA和蛋白的表达。结果：博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化细胞凋亡明显增加,肺上皮细胞bax蛋白表达明显上调,bcl-2mRNA及蛋白表达明显减弱,间质细胞bcl-2mRNA及蛋白表达增加。结论：肺组织细胞凋亡及bcl-2表达下调可能参与博莱霉素诱导大鼠肺纤维化的发生,凋亡相关基因bax,bcl-2mRNA及蛋白参与博莱霉素诱导大鼠肺纤维化细胞凋亡的调控。     

大白鼠坐骨神经再生轴突可塑性的研究——辣根过氧化物酶(HRP)示踪观察

用HRP逆行示踪法,对成年大白鼠两侧坐骨神经端端吻合术后,再生轴突可塑性作了研究。术后1—12月不同时间内,在吻合端左侧0.8cm处,再横断坐骨神经,放入HRP,存活2天,取材观察。结果表明:所有动物脊髓腰骶段两侧前角均出现HRP标记细胞。标记细胞数量随吻合术后时间增长而增加。左侧前角较右侧前角标记细胞多。说明受损的坐骨神经轴突能再生,各自进入对侧的坐骨神经,向脊髓方向延伸。但是,仅部分再生轴突能延伸过缝合处的组织痂。本实验提示再生轴突的可塑性,它受环境因素的影响。     

大鼠脑损伤后海马GAP-43 mRNA水平的变化

以DIG（Digoxigenin）标记的GAP-43 cDNA片段为探针,使用原位杂交方法,检测了大鼠皮层硬性脑挫伤后GAP-43 mRNA水平的变化。结果表明：海马CA3、CA1和DG区的GAP-43 mRNA水平在损伤后48h明显升高,其中CA3区变化最甚,而且伤侧比对侧显著。1周和2周后表达仍维持较高水平,但不如48h的高,这显示表达的峰值在1周之内。上述结果为研究脑损伤后生理及机能代偿的修复机制提供了有意义的信息。