免疫性肝纤维化大鼠结缔组织生长因子、转化生长因子β1基因相关表达及汉丹肝乐的影响

目的研究结缔组织生长因子(connective tissue growthfactor,CTGF)mRNA与转化生长因子β1(transform-ing growth factorβ1,TGFβ1)mRNA在免疫性大鼠肝纤维化中的表达状况及汉丹肝乐对其的影响作用.方法用猪血清腹腔内注射复制免疫损伤性肝纤维化模型,造模同时给予汉丹肝乐口服作为肝纤维化防治组;免疫攻击12周后处死动物.原位杂交方法检测肝内CTGFmRNA、TGFβ1mRNA表达.结果 12周后模型组大鼠形成典型的肝纤维化,肝内CTGFmRNA与TGFβ1mRNA表达均显著增强,同时二者阳性分布部位相近,表达程度呈正相关性;以汉丹肝乐防治的大鼠,肝纤维化程度明显减轻,CTGFmRNA和TGFβ1mRNA表达的阳性指数下降,且CTGFmRNA表达与组织病理上肝纤维化变化呈正相关性.结论 CTGF与TGFβ1基因的增高表达与肝纤维化形成有密切关系;汉丹肝乐能有效抑制CTGF与TGFβ1基因的表达.通过在转录环节上阻断肝纤维化相关的细胞内信号转导途径,可能是该药物作用的重要分子机制之一.     

免疫性肝纤维化大鼠结缔组织生长因子、转化生长因子β1基因相关表达及汉丹肝乐的影响

目的　研究结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)mRNA与转化生长因子β1(transform inggrowthfactorβ1,TGFβ1)mRNA在免疫性大鼠肝纤维化中的表达状况及汉丹肝乐对其的影响作用。方法　用猪血清腹腔内注射复制免疫损伤性肝纤维化模型,造模同时给予汉丹肝乐口服作为肝纤维化防治组;免疫攻击12周后处死动物。原位杂交方法检测肝内CTGFmRNA、TGFβ1mRNA表达。结果　12周后模型组大鼠形成典型的肝纤维化,肝内CTGFmRNA与TGFβ1mRNA表达均显著增强,同时二者阳性分布部位相近,表达程度呈正相关性;以汉丹肝乐防治的大鼠,肝纤维化程度明显减轻,CTGFmRNA和TGFβ1mRNA表达的阳性指数下降,且CTGFmRNA表达与组织病理上肝纤维化变化呈正相关性。结论　CTGF与TGFβ1基因的增高表达与肝纤维化形成有密切关系;汉丹肝乐能有效抑制CTGF与TGFβ1基因的表达。通过在转录环节上阻断肝纤维化相关的细胞内信号转导途径,可能是该药物作用的重要分子机制之一。     

猪血清免疫性肝纤维化大鼠细胞外基质变化及汉丹肝乐对其影响

目的研究汉丹肝乐抗大鼠免疫性肝纤维化的作用.方法猪血清腹腔内注射复制大鼠免疫损伤性肝纤维化模型,用汉丹肝乐治疗,研究肝脏细胞外基质的变化及中药汉丹肝乐对其的影响.结果模型组Ⅰ、Ⅲ型胶原及层粘蛋白的表达较正常组明显,汉丹肝乐治疗组Ⅰ、Ⅲ型胶原及层粘蛋白的表达明显较模型组轻,差异有显著性意义(P＜0.05).结论采用猪血清复制大鼠免疫性肝纤维化模型效果较为理想,汉丹肝乐能有效防治免疫损伤性肝纤维化.     

TGF-β1与肝纤维化

转化生长因子β1(transforming growth factor-β1)作为细胞因子TGF—β超家族的成员，调节多种靶基因的表达，在肝纤维化疾病发生发展中起重要作用，被认为是最重要的致纤维化因子，目前成为国内外研究热点。     

肝包虫囊壁及周围肝组织中CTGF与TGF-β1的表达

目的:探讨CTGF与TGF-β1在形成肝包虫囊肿周围纤维囊壁中的作用及其临床意义。方法:应用免疫组化技术检测结缔组织生长因子(CTGF)与转化生长因子-β1(TGF-β1)在45例肝包虫囊肿周围纤维囊壁及周围肝组织中的表达。结果:CTGF、TGF-β1在肝包虫囊肿周围纤维囊壁中呈现特异性分层表达,CTGF、TGF-β1的阳性率在外囊中的表达率分别为55.56%、42.22%。靠近肝实质侧的外膜中CTGF、TGF-β1的阳性细胞表达率分别为80.00%、88.89%。在2层中表达的差异均有显著意义(P<0.05,P<0.05)。结论:肝包虫周围纤维性囊壁可分为内层和外层,且各自形成机制不同;CTGF、TGF-β1与肝实质侧纤维囊壁的形成有密切关系。     

大鼠肝纤维化对TGF—β信号通路的影响

采用CCl4损伤性大鼠肝纤维化模型,观察肝纤维化对TGF—β信号通路的影响。方法20只雄性Wistar大鼠随机分为2组：一组作为正常组（C组,n=6）,另外一组为肝纤维化模型组（M组,n=14）。C组,饲普通饲料及自来水,每次腹腔注射2mL·kg^-1橄榄油,M组于实验第1天腹腔内注射50％CCl4（CCl4：橄榄油=1：1）诱导肝纤维化,每次2mL·kg^-1,每周3次,共6周。实验完备后称重、处死,并用分光光度计测定血清中的ALT和AsT活性,用RT—PCR技术检测：Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、Fibroneetion、PAI-1和TGF—β mRNA转录水平。结果：模型组与对照组相比较,ALT和AST活性显著升高（P〈0．05）,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、Fibronection、PAI-1、TGF—β转录水平同样显著升高（P〈0．05）。结论：大鼠肝纤雏化与TGF—β信号通路有直接的关系,而且在纤维化肝中表达量明显上调。     

康复新液对转化生长因子-β1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5纤维化模型的干预作用

为探讨康复新液对人胚肺成纤维细胞纤维化模型的干预作用,以转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5构建细胞纤维化模型,并运用CCK-8(cell counting kit-8)法检测康复新液对MRC-5细胞的毒性.以测得的最高不致死给药浓度(80倍稀释)的康复新液干预TGF-β1诱导的MRC-5细胞模型,进而通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(WB)检测细胞纤维化指标的mRNA及蛋白质表达水平变化.结果显示:10ng/mL TGF-β1可成功诱导MRC-5细胞发生纤维化,且细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、纤维连结蛋白(fibronectin,FN)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)的mRNA表达水平均显著升高;以80倍稀释的康复新液为最高不致死给药浓度,对MRC-5细胞纤维化模型进行干预,上述纤维化指标的mRNA及蛋白质表达水平均出现显著下降,与地塞米松(Dexamethasone,DXM)的干预效果相当.综上,康复新液可改善由TGF-β1诱导MRC-5细胞纤维化的表型,有望被应用于肺纤维化的治疗.     

维吾尔药小茴香对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1的影响

 观察维吾尔药小茴香对实验性大鼠肝纤维化转化生长因子-β1（TGF-β1）的影响,探讨其抗肝纤维化作用及其机制。选取健康Wistar大鼠48只,随机分为正常对照组、肝纤维化模型组、维吾尔药小茴香组、秋水仙碱组,共4组,每组12只。除正常对照组外,其他各组均腹腔注射40%的四氯化碳油造模剂2mL/kg,药物干预组造模,同时分别给予维吾尔药小茴香100mg/kg和秋水仙碱0.2mg/kg,持续6周。各组大鼠留取肝组织进行病理学观察和TGF-β1免疫组化染色。结果显示,小茴香可显著降低给药组大鼠TGF-β1表达水平（P<0.01）,小茴香组大鼠肝纤维化程度较模型组明显改善,表明维吾尔药小茴香具有明显的抗肝纤维化作用,并可降低实验性大鼠TGF-β1水平。     

TGF-β／Smad信号通路与肝纤维化研究进展

肝纤维化可由多种因素所致的慢性肝损伤引起,是继发于肝脏炎症或损伤后组织修复的代偿反应,最终导致肝硬化;其主要特征是以胶原为主的细胞外基质（excra cellular matfix,ECM）在肝内过度沉积。在致纤维化的细胞因子网络中,转化生长因子β1（TGF—β1）发挥重要作用。文章就该信号通路在肝纤维化中的作用及基于该机制的肝纤维化治疗策略作一综述。     

茵栀苦对大鼠实验性肝纤维化的治疗作用

研究复方茵栀苦对大鼠肝纤维化的作用机制.运用免疫组织化学和RT-PCR方法方法检测TGF-β1,MMP-13及TIMP-1在肝纤维化形成后的蛋白和mRNA的表达变化. 茵栀苦有效剂量对TGF-β1和TIMP-1 mRNA及蛋白表达有抑制作用,而对MMP-13 mRNA及蛋白表达有促进作用.复方茵栀苦有抑制或减轻肝纤维化的形成作用。     

CCI4肝纤维化大鼠TGF-β1表达的动态变化

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）在肝纤维化过程中的变化及其意义．方法40％CCI4-花生油溶液皮下注射法制备CCI4大鼠肝纤维化模型．第3、5、7、9、11、13周分批处死对照组和实验组大鼠各5只,剖取动物肝脏,HE染色、Masson染色和免疫组化染色,观察肝纤维化和TGF-β1在大鼠肝组织的表达．结果在大鼠CCI4肝纤维化形成过程中,TGF-β1的表达在肝损伤早期即明显增加,并随纤维化程度加重而逐步升高．结论TGF-β1表达与肝纤维化程度成正相关．     

感染日本血吸虫小鼠CD4~+,CD8~+T细胞凋亡相关基因转录水平

目的:探讨日本血吸虫感染过程中.宿主CD4~+和CD8~+T细胞凋亡的相关基因TGF—β(转化生长因子—β.Transforming growth factor—β)在转录水平上的变化.方法:用地高辛标记的探针作原位杂交.观察促凋亡基因TGF—β在CD4~+和CD8~+细胞的TGF—βmRNA的表达随感染时间的延长而升高,感染后第10周起CD4~+T细胞TGF—βmRNA的表达明显高于CD8~+T细胞,差异有显著性意义.结论:在日本血吸虫感染过程中,CD4~+细胞凋亡比率超过CD8~+细胞.提示CD4~+和CD8~+细胞t比值下降与TGF—β基因的活化有关.     

CTGF反义寡核苷酸对体外培养人晶状体上皮细胞转分化的影响

目的:研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)反义寡核苷酸对体外培养人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs)合成CTGF与а-SMA表达的影响。方法:测算CTGF反义寡核苷酸对体外培养HLECs的转染率;应用CTGF反义寡核苷酸直接转染第三代HLECs进行细胞生长曲线的测定;采用RT-PCR检测细胞CTGF和α-平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)mRNA水平。结果:直接导入法反义寡核苷酸进入较慢,但导入72h后未出现细胞毒性。CTGF反义寡核苷酸直接导入HLECs培养细胞72h后可见对细胞增殖的抑制作用。直接导入法处理48h后,TGF-β1能显著增加CTGF以及α-SMA mRNA的表达,但却可被CTGF反义寡核苷酸所抑制。而错义寡核苷酸却没有这种作用。结论:CTGF反义寡核苷酸直接转染HLECs能抑制TGF-β1诱导的CTGF与α-SMA表达上调,提示CTGF反义寡核苷酸可能为防治后发性白内障提供新途径。     

辛伐他汀对大鼠肝纤维化的影响及其作用机制

 观察辛伐他汀对大鼠肝纤维化的影响并探讨其机制。60只健康的睡眠剥夺（Sleep Deprivation,SD）大鼠随机分为对照组、模型组和药物组。模型组和药物组,大鼠皮下注射四氯化碳（CCl4）油溶液造模,药物组造模同时给予辛伐他汀灌胃（5mg·kg-1·d-1）至实验结束;对照组给予等量的橄榄油皮下注射。8周后处死所有动物,全自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天门冬氨酸转氨酶（AST）活性,苏木精-伊红染色观察肝组织病理学改变,免疫组织化学法检测各组肝组织中I、III型胶原及转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达情况。结果表明,与模型组相比,药物组大鼠肝脏炎症反应和纤维化较轻,I、III型胶原及TGF-β1的表达显著减少（P<0.05）,血清ALT、AST水平降低（P<0.05）。由此得出,辛伐他汀可以减轻肝纤维化程度,其机制可能与抑制TGF-β1和I、III型胶原表达有关。     

大鼠反义转化生长因子βRII /PCDNA3.1(+)真核细胞表达质粒的构建及鉴定

构建大鼠反义转化生长因子βRⅡ/PCDNA3.1（＋）真核细胞表达质粒.查阅文献,采用两对套式引物,运用逆转录巢式PCR技术扩增TGFβRⅡ片段并经测序鉴定,双酶切纯化PCR产物及PCDNA3.1（＋）,再将TGF β RⅡ反向插入PCDNA3.1（＋）线性质粒,即构建成TGF β RⅡ/PCDNA3.1（＋）真核细胞表达质粒.将反义质粒转染感受态细胞JM-109,筛选阳性克隆行双酶切鉴定及DNA测序分析证实反义TGF β RⅡ/PCDNA3.1（＋）真核细胞表达质粒构建成功.从而为下一步抗肝纤维化基因治疗研究奠定基础.     

TGF-β和PCNA在肝、胰十二指肠联合切除后肝再生中的表达

目的：探讨肝脏、胰腺和十二指肠部分切除术后肝组织的再生反应。方法：在6只新西兰大白兔行60％肝叶的切除加50％胰腺切除和近端十二指肠切除术，采用组织化学分别在1，2，3，4d对术后肝组织的TGF—β（转化生长因子-β）和PCNA（核增殖抗原）进行检测。结果：联合切除术后1d，PCNA和TGF—β即在肝组织内表达，3d后表达逐渐下调。结论：肝脏、胰腺和十二指肠部分切除术后1d肝组织即出现再生反应，胰腺和十二指肠外分泌腺的多种因子可能促进肝细胞再生。     

TGFβ1 shRNA对293细胞合成TGFβ1的干扰作用

目的:探讨自行设计的TGFβ1shRNA对293细胞TGFβ1基因表达的干扰作用,为研究纤维化病变的基因治疗方法提供技术基础和依据.方法:针对大鼠TGFβ1基因mRNA序列,设计、合成携带3条TGFβ1 shRNA和TCFβ1基因的绿色荧光蛋白融合表达质粒载体,并设阴性质粒组和空质粒组为对照,通过脂质体包裹分别转染293细胞.转染后24、48和72 h收集细胞,在荧光显微镜下观察干扰效果,采用荧光定量PCR检测TGFβ1基因表达情况,并计算干扰效率.结果:荧光显微镜下观察,可见转染后24、48和72 h TGFβ1shRNA质粒组细胞绿色荧光强度均明显弱于阴性质粒组细胞,空质粒载体组未产生绿色荧光;荧光定量PCR检测转染后293细胞TGFβ1mRNA表达量,转染后24、48和72 h TCFβ1shRNA质粒组TCFβ1mRNA表达量均显著低于阴性质粒组(P<0.01),其基因干扰效率则依次递减,分别为97.2%、97.1%和67.7%.结论:本研究证明自行设计的TGFβ1shRNA转染293细胞后24、48和72 h TGFβ1shRNA均能够高效干扰TGFβ1基因的表达,其基因干扰效率呈现一定的时间依赖性.     

丹参酚酸B盐对人肝星状细胞内肌细胞增强因子2的影响

以分离和培养的人肝星状细胞（H—HSC）为研究对象,观察H—HSC是否表达肌细胞增强因子2（MEF2）且与转化生长因子B1（TGF—β1）之间的关系,进一步探讨丹参酚酸B盐（SA—B）抗肝纤维化的作用机制,分离H—HSC后,用TGF—β1刺激培养的H—HSC,通过免疫印迹分析及分别转染含有MEF2启动子和Ⅰ型胶原启动子的luciferase报道基因质粒入H—HSC,检测荧光素酶活性,观察经SA—B干预后MEF2,α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）及Ⅰ型胶原表达的变化．结果显示H—HSC能够表达MEF2,且随H—HSC的活化而增加;经TGF—β1刺激的H—HSC内α—SMA的表达、Ⅰ型胶原启动子的活性和Ⅰ型胶原蛋白的生成均明显增强,同时MEF2启动子的活性和MEF2A和MEF2C的蛋白表达也明显增强;SA—B对以上这些物质的表达均有明显的抑制作用．上述结果说明MEF2参与了肝纤维化的形成,SA—B抑制H—HSC活化的作用与其抑制TGF-B1在H—HSC内的信号传导与抑制转录因子MEF2A和MEF2C的表达有关．     

人转化生长因子β1在大肠杆菌RR1中的表达及产物纯化

目的：构建能高效表达人转化生长因子β1的基因工程菌,优化产物分离纯化的条件,方法：用PCR方法扩增人转化生长因子β1的cDNA,将该cDNA片段插入经改造的pBV220表达载体pBL2的表达框架中,构建了表达菌株RR1／pBL－2－TGF－β1．42℃温控诱导表达,采用谷胱甘肽法,对重组蛋白进行复性。通过阳性离子交换、变性分子筛层析纯化重组蛋白,用MTT法测定重组蛋白的活性。结果：所构建的表达菌株,其TGF－β1的表达量约为15％,重组蛋白的复性率达到30％,经纯化获得了银染一条带的重组蛋白,测活表明和理级具有较强的生物活性。结论：人转化生长因子β1在大肠杆菌RR1中实现了高效表达,获得了具有生物活性的重组TGF－β1。     

CCI_4肝纤维化大鼠TGF-β_1表达的动态变化

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在肝纤维化过程中的变化及其意义.方法40%CCl4-花生油溶液皮下注射法制备CCl4大鼠肝纤维化模型.第3、5、7、9、11、13周分批处死对照组和实验组大鼠各5只,剖取动物肝脏,HE染色、Masson染色和免疫组化染色,观察肝纤维化和TGF-β1在大鼠肝组织的表达.结果在大鼠CC14肝纤维化形成过程中,TGF-β1的表达在肝损伤早期即明显增加,并随纤维化程度加重而逐步升高.结论TGF-β1表达与肝纤维化程度成正相关.