人酸性成纤维细胞生长因子的高效表达

构建能高效表达人酸性成纤维细胞生长因子（haFGF)的基因工程菌,优化产物分离纯化条件,并对纯化产物进行理化性质鉴定,采用PCR方法扩增haFGF cDNA,将该cDNA片段插入表达载体pET3c的表达框架中,筛选得到了重组质粒pET3c-haFGF,转化大肠杆菌BL21（DE3）,构建了表达菌件BL21（DE3）／pET3c-haFGF.IPTG诱导表达,通过离子交换,肝素亲和两步层析的方法分离纯化产物,用MTT法测定产物的活性,haFGF的表达量约为20％,经过两步层析纯化,获得了电泳纯的haFGF样品,纯化haFGF样品的比活性为ED50小于4.0ng/mL.BL21(DE3)/pET3c表达系统能高效表达haFGF,经过纯化得到了理化性质及生物活性与天然haFGF对照品一致的重组人酸性成纤维细胞生长因子。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子促进大鼠烫伤愈合的研究

目的:研究重组人酸性成纤维细胞生长因子(rh-aFGF)促进大鼠烫伤创面愈合的作用。方法:采用大鼠背部深II度烫伤模型,将3种不同浓度的rh-aFGF溶液隔日一次滴注于创面,观察伤后不同时间的创面面积变化和病理组织学改变。结果:rh-aFGF可明显加速大鼠皮肤创伤的愈合,使创面面积明显缩小(P<0 05)。病理组织学检查发现,rh-aFGF组创面伤后7d成纤维细胞生长活跃、数量多,其毛细血管胚芽与成纤维细胞数量显著多于溶媒对照组;伤后14d,创面收缩与再上皮化明显,新生上皮向创面中心爬行较快。结论:外用rh-aFGF对大鼠深II度烫伤创面有明显的促愈合作用。     

应用bFGF胶原缓释海绵修复髓室底穿孔的疗效

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)胶原缓释海绵消除髓室底炎症及修复髓室底穿孔的疗效。方法:实验组5 2例(5 7颗患牙)应用bFGF胶原缓释海绵作为内屏障材料充填穿孔周围,避免穿孔周围修补材料超充填,对照组4 0例(42颗患牙)使用聚梭酸锌粘固粉。对临床症状和X片随访观察6个月,结果进行统计学处理,评价bFGF胶原缓释海绵的治疗效果。结果:当穿孔大于3mm以上及有临床症状时,bFGF组成功率为80 % ,失败率为2 0 % ,两组差异有统计学意义(P <0 0 5 )。结论:bFGF胶原缓释海绵在消除髓室底炎症修复髓室底穿孔具有显著的疗效,是一种新型内屏障材料     

pH值对红细胞膜力学特性和胞内蛋白结构与功能的影响

利用快速显微动态图像分析技术和快速显微多道分光光度技术, 在无损、在位、实时的情况下, 同时从细胞内分子、细胞膜以及细胞形态3个水平上, 研究单个活态人红细胞的大小形态、膜弯曲弹性模量和血红蛋白的吸收光谱等在不同pH值下的自主变化情况, 表明了红细胞膜的力学特性和胞内血红蛋白分子结构与浓度随pH值发生自主变化及其相互之间的密切联系.     

环境温度对人红细胞膜形态和表面电荷的即时影响

利用显微图像分析技术和相分析电泳光散射技术,在无损、在位、实时的情况下,观察和测量了不同环境温度下活态人红细胞的形态、大小和表面电荷密度、Zeta电位的即时变化情况．结果发现随着环境温度的升高,人红细胞的大小逐渐减小,细胞形状指数增大,红细胞从双凹圆盘形向棘形转变,同时红细胞的表面电荷密度和Zeta电位的负值逐渐增大．表明人红细胞膜的形态结构、组成等与环境渝摩密切相关．     

超声波对碳酸钙积垢过程的影响

研究了超声波艰某些无机盐水溶液和含有蔗糖的无机盐水溶液的表面张力和电导率,以及对ＣｕＣＯ３积垢速率和性状的影响。结果表明,超声波作用可以明显降低换热器表面ＣａＣＯ３积垢速率,有效地减缓、ＣａＣＯ３积垢,最后探讨了超声波减缓ＣａＣＯ３积垢的机理。     

人转化生长因子β1在大肠杆菌RR1中的表达及产物纯化

目的：构建能高效表达人转化生长因子β1的基因工程菌,优化产物分离纯化的条件,方法：用PCR方法扩增人转化生长因子β1的cDNA,将该cDNA片段插入经改造的pBV220表达载体pBL2的表达框架中,构建了表达菌株RR1／pBL－2－TGF－β1．42℃温控诱导表达,采用谷胱甘肽法,对重组蛋白进行复性。通过阳性离子交换、变性分子筛层析纯化重组蛋白,用MTT法测定重组蛋白的活性。结果：所构建的表达菌株,其TGF－β1的表达量约为15％,重组蛋白的复性率达到30％,经纯化获得了银染一条带的重组蛋白,测活表明和理级具有较强的生物活性。结论：人转化生长因子β1在大肠杆菌RR1中实现了高效表达,获得了具有生物活性的重组TGF－β1。     

基因重组牛碱性成纤维细胞生长因子促进创面愈合的临床研究

目的 :观察基因重组牛碱性成纤维细胞生长因子 (rbFGF)对急性创面和慢性创面愈合的促进作用。方法 :治疗组 (12 82例 )和对照组 (439例 )被分为深Ⅱ度烧伤、浅Ⅱ度烧伤、供皮区 (包括刃厚和中厚供皮区 )和慢性 (包括残余小创面和慢性溃疡 )创面 4大类。分别观察应用rbFGF后不同时间创面愈合面积的百分比、创面完全愈合时间 ,以及用药前后的全身情况和不良反应。结果 :浅Ⅱ度烧伤 8d愈合率和创面完全愈合时间 ,对照组为 5 1 7%± 2 6 4 %和 (12 6± 2 9)d(P <0 0 0 1) ,治疗组为 70 6 %± 2 5 0 %和 (10 5± 2 4 )d(P <0 0 0 1)。深Ⅱ度烧伤 15d愈合率和创面完全愈合时间 ,对照组为 5 3 3%± 2 5 4 %和 (2 1 9± 5 5 )d(P <0 0 0 1) ,治疗组为 6 9 7%± 2 7 0 %和 (18 5± 4 4 )d(P <0 0 0 1)。供皮区创面 8d愈合率和创面完全愈合时间 ,对照组为 5 7 6 %± 2 9 4 %和(11 4± 2 7)d(P <0 0 0 1) ,治疗组为 72 1%± 2 8 0 %和 (9 5± 2 4 )d(P <0 0 0 1)。慢性创面完全愈合时间 ,对照组为 (2 8 0± 18 0 )d ,治疗组 (2 2 1± 16 )d(P =0 0 6 8)。用药前后血常规、肝、肾功能无异常变化。结论 :基因重组牛碱性成纤维细胞生长因子能够显著地促进创面     

重组人酸性成纤维细胞生长因子的遗传毒性

目的:了解重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)皮肤外用的遗传毒性。方法:用CHL细胞染色体畸变试验、小鼠骨髓PCE微核试验和Am es试验方法对rhaFGF进行遗传毒性研究。结果:rhaFGF各剂量组和阴性对照组在加或不加S9情况下,其CHL染色体畸变率均<5%;各剂量组的骨髓细胞微核细胞率与阴性对照组比较均差异无显著性(P>0.05);rhaFGF各剂量组(0.5~5 000μg/皿)对TA97、TA98、TA100、TA102菌珠在加或不加S9混合液条件下均无致突变作用。结论:在所选试验和剂量范围内未见到rhaFGF具有遗传毒性。     

人酸性成纤维细胞生长因子突变体表达与修饰

采用聚合酶链式反应(PCR)法将人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)基因中编码第98位和第132位半胱氨酸(Cys)的密码子突变为编码丝氨酸(Ser)的密码子,构建重组质粒pET3c-haFGF Ser98,32,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达率达到23．48％．用MTT法测定产物的活性,发现haFGF Ser98,132突变体的比活与天然haFGF相似．采用单甲氧基聚乙二醇(mPEG)5000-马来酸酰亚胺酯定点修饰第31位Cys,修饰率达到30％以上,修饰产物的比活性保留55．53％．