利用异养型微藻生产DHA

本研究旨在筛选高产ＤＨＡ的异养型微藻种．以含有５ｇ／Ｌ葡萄糖的Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ培养基为初始培养基,对四株异养双鞭藻———Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍｃｏｈｎｉ进行摇床培养筛选．其中ＣｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍｃｏｈｎｉＡＴＣＣ３０５５６的比生长速率（０．０６７／ｈ）、生物量（２．０４６ｇ／Ｌ）以及ＤＨＡ产量（１５９ｍｇ／Ｌ）均为最高．筛选结果表明,该藻种具有进一步研究的意义及进行工业化生产的可能．     

生物反应器高密度异培养小球藻

首先用摇瓶实验确定异养流加分批培养小于藻中起始葡萄糖及ＫＮＯ３的适宜浓度与增加葡萄糖及ＫＮＯ３浓度的控制范围和补料中最适Ｃ／Ｎ值,培养其中起始添加１０ｇ．Ｌ＾－１葡萄糖和１．６ｇ．Ｌ＾－１ＫＮＯ３较适宜。在此前提下,流加分批培养时葡萄糖和ＮＯ＾－３质量浓度应分别控制在６．１７－２．４５ｇ．Ｌ＾－１和≤０．４４ｇ．Ｌ＾－１,补料液中最适Ｃ／Ｎ值为４１．２。据此结果,经５Ｌ通风搅拌反应器放大培养实验,     

四种植物生长激素对海带雌配子体克隆生长发育的影响

以海带雌配子体克隆ＬＨ１０品系为材料,用４种植物生长激素：三十烷醇（ＴＡ）、２,４－二氯苯氧乙酸（２,４－Ｄ）、吲哚乙酸（ＩＡＡ）和腐植酸钠加以处理,以 生长发育进行了研究。结果表明,它们的最佳生长浓度分别为：ＴＡ,０．０１ｍｇ／Ｌ;２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ;ＩＡＡ,０．５ｍｇ／Ｌ;腐植酸钠,０．５ｍｇ／Ｌ最佳发育浓度分别为：ＴＡ,０．０１ｍｇ／Ｌ;２,４－Ｄ,１ｍｇ／Ｌ;ＩＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＾－     

不同植物生长调节物质对华黄芪愈伤组织形成及器官发生的效应

以华黄芪（ＡｓｔｒａｇａｌｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓＬ．）为材料,ＭＳ为基本培养基,设计不同浓度的ＮＡＡ、２,４－Ｄ、６－ＢＡ、ＫＴ等单因子试验和不同比值的细胞分裂素／生长素组合试验,探讨植物生长调节物质对华黄芪愈伤组织形成及器官发生的效应．结果表明：在愈伤组织形成过程中,单因子试验以５．０ｍｇ／ＬＮＡＡ、０．５ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ、１．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ、２０ｍｇ／ＬＫＴ诱导效果较好,诱导频率可达１００％,且生长势好．组合试验比单因子试验能更有效地诱导愈伤组织形成．在器官发生过程中,单独使用生长素类有不定根形成,ＮＡＡ效果较好,２,４－Ｄ次之．单独使用细胞分裂素类有不定芽的形成,６－ＢＡ效果较好,ＫＴ次之．组合试验中,细胞分裂素／生长素比值大时有利于不定芽的形成,反之则有利于不定根的形成     

银杏愈伤组织的诱导与激素优化组合研究

通过实验,筛选出银杏愈组织的最佳培养基为Ｎ６＋ＮＡＡ３．０ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ,其次为ＭＳ＋ＮＡＡ３．０ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ,分别对ＮＡＡ、２,４－Ｄ、ＧＡ、ＢＡ和ＫＴ等在培养过程中的作用与浓度进行了探索,结果表明ＮＡＡ、ＢＡ结合使用,既适合诱导又利于继代培养,２,４－Ｄ适合诱导,ＧＡ不利于诱导,ＫＴ有利于分化。     

2,4-D对玉米根氧化还原活性的影响及其与根生长和酶活性等的关系

将５ｍｍ长的玉米根尖与不同浓度的２,４二氯苯氧乙酸（２,４Ｄ）一起保温,在１０－１５ｍｏｌ／Ｌ至１０－９ｍｏｌ／Ｌ浓度范围内,根尖对铁氰化钾的还原活性随２,４Ｄ浓度升高而增加;当２,４Ｄ浓度超过１０－８ｍｏｌ／Ｌ时,还原活性受到抑制．根尖的生长与铁氰化钾还原速率具有很好的相关性,葡萄糖６磷酸（Ｇ６Ｐ）脱氢酶活性与铁氰化钾的还原和细胞内ＮＡＤＰＨ２水平相平行,ＡＴＰ酶活性也与上述变化相一致．在低浓度的２,４Ｄ处理下,介质ｐＨ下降,高浓度的２,４Ｄ则使介质碱化．上述结果表明２,４Ｄ对玉米根氧化还原活性和生长速率有显著影响,它的作用是通过活化质子分泌和它对代谢途径的调节实现的．     

盐生杜氏藻大量培养条件的研究

阐述了大量培养盐生杜氏藻的有关条件：在培养过程中需要间断地通过ＣＯ２１０ｍｌ／ｓ；加入３０μｍｏｌ／ＬＥＤＡＴ、５０μｍｏｌ／ＬＦｅ＾３＋，０．５ｍｍｏｌ／ＬＭｇ＾２＋均可提高藻体的生长，对β－胡萝卜素的积累有利；在培养过程中需加０．３ｍｍｏｌ／／的脲素作为氮源，也有利于藻体的生长。     

红豆杉愈伤组织的诱导和培养

研究了不同的基本培养基、不同的激素种类和不同的种植体对红豆杉愈伤组织诱导的影响。实验结果表明,在愈伤组织诱导中,２ｍｇ／Ｌ ２,４－Ｄ的诱导效果优于２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ,枝段的诱导率高于叶片。Ｂ５和ＨＥ培养基利于愈伤组织的诱导,Ｂ５和６,７－Ｖ培养基利于愈伤组织的生长,其平均生长速率分别为０．９９ｇ／（Ｌ·ｄ）和０．６０ｇ／（Ｌ·ｄ）。     

红豆杉离体胚培养快速育苗研究

采用Ｂ５和ＭＳ相组合的ＢＭ基本培养基和适宜浓度的激素（２,４－Ｄ,６－ＢＡ和ＧＡ３）能解除红豆杉种胚的休眠．单因子试验和不同组合的正交试验结果显示：单独使用２,４－Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ,６－ＢＡ２ｍｇ／Ｌ和ＧＡ３２ｍｇ／Ｌ均在一定程度上促使红豆杉种胚的萌发,萌发率分别为７０％,５５％和２８．６％;最佳正交组合为６－ＢＡ１ｍｇ／Ｌ＋２,４－Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＡＣ４ｇ／Ｌ,萌发率达８１％．     

转小鼠金属硫蛋白基因集胞藻6803及其野生藻培养

通过摇瓶培养考察转小鼠金属硫蛋白基因集胞藻６８０３及其野生藻的光合自养培养过程中碳源浓度、氮源浓度和光照度对这两种藻生长的影响。野生藻的最适生长碳源浓度（０．０５－０．５ｇ／Ｌ）比转基因藻的最适生长碳源浓度（０．０２－０．０５ｇ／Ｌ）高。氮源浓度对转基因藻和野生藻的影响趋势相同。在０．３－４．５ｇ／Ｌ范围内,随着氮源浓度的增高,藻体生长的最大细胞浓度降低。转基因藻生长的最佳光照度为１５００ｌｘ,野     

人肿瘤坏死因子α在鱼腥藻7120中的表达

通过三亲结合转移方式,将含人肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）ｃＤＮＡ和ｐｓｂＡ启动子的鱼腥藻－大肠杆菌穿梭质粒ＰＤＣ－ＴＮＦ导入单细胞丝状鱼腹藻７１２０中。     

异形胞发育的蓝细菌DnaA蛋白的表达研究

为了研究DNA复制与Anabaena sp. PCC7120异形胞发育之间的关系.构建了Anabaena PCC7120的复制起始蛋白DnaA的重组表达质粒,在Escherichia coli中诱导其超量表达,纯化后免疫家兔获得抗体,采用Western blotting检测DnaA在营养细胞和异形胞中的表达情况.结果显示,两种不同类型的细胞中都能够检测到DnaA的表达,而且在不同缺氮诱导时间,异形胞中DnaA的表达存在差异.这说明DNA复制起始与异形胞的发育可能存在着一定的关系.     

鱼腥藻PCC 7120染色体上relBE同源基因的克隆及表达

为研究鱼腥藻PCC7120染色体上与relBE同源的基因asl4561和asl4562表达产物的毒素-抗毒素作用,从鱼腥藻细胞中提取总基因组DNA,设计特异引物PCR扩增目的基因asl4561和asl4562,与T载体连接后经XhoI和EcoR I双酶切并与表达载体pET28a（＋）连接,由IPTG诱导表达,并在IPTG浓度和诱导时间上对asl4561基因的表达条件进行了优化.琼脂糖凝胶电泳显示扩增出了264bp的asl4561基因和213bp的asl4562基因,SDS-PAGE检测表明成功表达出15.65kD和13.55kD的两蛋白,当诱导温度28℃、IPTG浓度0.4 mmol/L、诱导时间6h时,asl4561基因表达蛋白在细菌裂解液上清中表达量最大.     

An inducible CO2 concentrating mechanism in cyanobacteriumAnabaena sp. strain PCC7120

In order to define its characteristics of the photosynthetic utilization of CO2 and HCO3-when the ambient inorganic carbon changed, HCG (High-CO2-Growing Cells) of cyanobacteri-um Anabaena sp. strain PCC7120 were prepared. The growth rate of HCG was higher than that of LCG (low-CO2-growing cells, i.e. air-growing cells). When the HCG cells were transferred from 5% CO2 to air levels of CO2 ,a series of changes took place: its carbonic anhydrase activity as well as its photosynthetic affinity to the external inorganic carbon significantly increased; the number of the carboxysomes, which is one of the most important components of CCM in cyanobacteria also increased. These facts indicated that the CCM activity of Anabaena PCC 7120 was induced. When the pH in the medium increased from 6 to 9, the photosynthetic affinity to external inorganic carbon of both HCG and LCG declined, while the apparent photo-synthetic affinity to external CO2 increased. In the light of these findings, this inducible CCM in cyanobacteria provided a good model for the study of the photosynthetic Ci utilization in the pho-totrophic microoganisms.     

鱼腥藻铁吸收调节蛋白基因(alr0957)的克隆和表达

依据CyanoBase提供的鱼腥藻PCC7120 furC基因(alr0957)的序列信息设计了一对特异性引物,用Touch-down PCR的方法从基因组DNA中扩增得到大小约450bp的目的片段.通过TA克隆的方法将该片段连接到pMD18-T载体上筛选出重组质粒pMD18-T-fur,然后进行双酶切,纯化furC基因,再连接到原核表达载体pET-28a(+)上,转化表达菌株BL21(DE3).经PCR、双酶切和测序鉴定,对阳性菌株进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组蛋白.结果表明:在25℃条件下经1mmol/L IPTG诱导20h,融合蛋白被成功表达,其分子量约为19 000,为进一步纯化蛋白和对基因的调控功能方面研究奠定了基础.     

鱼腥藻铁调蛋白基因(alr0957)表达和Fe~(3+)对藻生长的影响

根据CyanoBase提供的鱼腥藻PCC7120 FurC基因(alr0957)序列信息设计特异性引物,用降落PCR法从染色体DNA中扩增得约450 bp目的片段.运用TA克隆将其连接到pMD18-T载体上,经筛选测序获得阳性重组质粒.再经过双酶切、纯化FurC基因,连接原核表达载体pET-28a(+),并转化表达菌株BL21和IPTG诱导表达.经测序鉴定的阳性菌株中的FurC,运用SDS-PAGE检测重组蛋白,并利用镍柱层析法纯化目的蛋白.由藻细胞密度、叶绿素a含量、可溶性糖含量等改变探讨不同Fe3+浓度对藻类生长的影响.结果表明:在37℃经1 mmol/L IPTG诱导18 h,成功表达了分子量约为19000的融合蛋白.小于0.5mg/L Fe3+促进藻生长,大于0.9 mg/L Fe3+抑制藻生长,最适藻生长Fe3+浓度为0.5⁰.9 mg/L.     

鱼腥藻PCC7120α质粒上的parD/E同源基因all7155/asl7156的克隆及表达

为研究鱼腥藻PCC7120质粒上毒素抗毒素系统的蛋白质性质和相互作用,根据NCBI中PCC7120的α质粒上的all7155和asl7156基因数据,通过降落PCR克隆了目的基因(all7155/336 bp,asl7156/258 bp).将目的基因片段连接至p MD18-T构建了克隆载体,蓝白斑筛选了阳性克隆,经双酶切纯化后将目的基因连接至表达载体p ET30a(+),并转入表达菌BL21中,测序后证实构建成功,并利用IPTG诱导进行了表达.通过NCBI的BLAST蛋白比对,发现了all7155和asl7156与已知的Par D/E毒素抗毒素系统同源,可通过对此基因的克隆,表达和蛋白性质来进一步认识Par D/E系统.     

重组大肠杆菌利用醋酸及乳酸为碳源合成PHB

以廉价的工业副产物醋酸及乳酸为碳源,对产PHB重组大肠杆菌进行培养,考察醋酸及乳酸的添加对重组大肠杆菌生长及PHB产量的影响。将来自Cupriavidusnecator的PHB合成操纵子phaCAB基因簇克隆至pBAD载体,得到产PHB菌株BL21＿pBAD＿phaCAB,以阿拉伯糖为诱导剂,在大肠杆菌中进行重组表达。分别使用LB及M9培养基,对重组菌株BL21＿pBAD＿phaCAB进行培养,研究其生长速度及PHB产量,探索产PHB重组大肠杆菌最适培养基。以添加0.04 g/L乳酸、1.2 g/L乳酸、0.02 g/L醋酸、0.6 g/L醋酸、0.04 g/L乳酸+0.02g/L醋酸、1.2g/L乳酸+0.4g/L醋酸的M9培养基(均含2 g/L葡萄糖)为实验组,以M9培养基(含2g/L葡萄糖)为对照组,考察醋酸及乳酸的添加对重组大肠杆菌生长及PHB产量的影响。分别取第6,12,24和36小时的培养液,分析其葡萄糖、醋酸及乳酸含量的变化。结果表明,低氮型M9培养基更适合产PHB重组大肠杆菌在低糖培养环境中生长。在葡萄糖消耗殆尽后,大肠杆菌能够以醋酸及乳酸为碳源进行代谢,因此在培养基中...     

正交设计优化桑黄培养基的研究

通过研究不同种类碳源、氮源以及不同浓度的麸皮、葡萄糖、KH2PO4和MgSO4·7H2O对桑黄菌丝生长速度及生长势的影响,采用多因子正交试验确定了培养桑黄的最佳条件.结果表明:在10 g/L葡萄糖、30 g/L麸皮、1.0 g/L KH2PO4、1.0 g/L MgSO4·7H2O,温度26℃和培养时间为12 d的条件下,桑黄菌丝生长速度最大,生长势最好.     

封闭式光生物反应器集胞藻6803光自养和混合营养培养比较

采用封闭式光生物反应器进行了蓝藻基因工程常用宿主系统集胞藻Synechocystis sp. PCC 6803的混合营养培养,并与光自养培养进行了比较,在两种培养方式下,集胞藻6803的饱和光强基本相同,都为5000lx,当入射光强为5000lx,初始葡萄糖浓度为1．74g/L时,混合营养生长在葡萄糖消耗完（69．5h)时的藻细胞密度为1．36g/L,叶绿素浓度为20．08mg/L,能量得率为16．7％,分别为同期光自养生长的3．8倍,2．3倍和2．6倍,这表明封闭式光生物反应器混合营养培养方式在促进集胞藻6803生长和光合色素合成及提高培养过程能量得率等方面都有显著作用。