用流式细胞术研究PKC及VRP，CsA对多药抗性细胞的调制与逆转

利用流式细胞术检测抗药性细胞内Ｒｈｏ－１２３的荧光强度作为检测抗性细胞抗性程度的指标，研究了蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂Ｈ７，肿瘤促进剂佛波酯（ＴＰＡ）对多药抗性细胞的调节；钙离子通道阻断剂维拉帕米（ＶＲＰ），免疫抑制剂（ＣｓＡ）对多药抗性的逆转作用．测定了抗性细胞细胞膜和胞浆ＰＫＣ活性水平，指出ＰＫＣ可能通过磷酸化细胞膜上的Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）来调节多药抗性细胞的抗性水平，并提供了一种筛选多药抗性逆转药物的简便方法．     

敏感和抗性的白血病HL60细胞对staurosporine诱导 …

用对蛋白激酶具有强烈抑制、作用广泛的抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（Ｓｔａ），研究敏感和抗三尖杉酯碱的人白血病ＨＬ６０细胞中凋亡和多药抗药性的关系。Ｓｔａ均能诱导２种细胞发生典型的凋亡，但抗性细胞发生凋亡需更长的时间、凋亡的细胞数减少。Ｓｔａ增加柔红霉素在抗性细胞内的积聚，说明其能逆转多药抗药性，在抗性细胞凋亡过程中，ｍｄｒｌ基因表达没有变化，ｃ－ｍｙｃ稍有增加，结果显示：Ｓｔａ能诱导敏感和抗三     

敏感和抗性的白血病HL60细胞对staurosporine诱导凋亡的不同反应(英)

用对蛋白激酶具有强烈抑制、作用广泛的抑制剂staurosporine（Sta）,研究敏感和抗三尖杉酯碱的人白血病HL60细胞中凋亡和多药抗药性的关系．Sta均能诱导2种细胞发生典型的凋亡,但抗性细胞发生凋亡需更长的时间,凋亡的细胞数减少．Sta增加柔红霉素在抗性细胞内的积聚,说明其能逆转多药抗药性．在抗性细胞凋亡过程中,mdrl基因表达没有变化,c-myc基因表达稍有增加．结果显示：Sta能诱导敏感和抗三尖杉酯碱的HL60细胞发生凋亡,mdrl基因表达与凋亡过程无关．     

抗三尖杉酯碱的HL60细胞蛋白质磷酸化

研究了抗三尖杉酯碱的ＨＬ６０细胞蛋白质磷酸化的变化。经差速离心得到纯膜蛋白，抗性细胞有一高度磷酸化的１１０ｋｕ的蛋白质存在，免疫沉淀ｃ－ＫＡＦ－１蛋白激酶，抗性细胞内ｃ－ＲＡＦ－１蛋白激酶磷酸化程度明显提高，其活性被蛋白激酶Ｃ抑制剂ＣａｌｐｈｏｓｔｉｎＣ明显地抑制。结果表明：ＨＬ６０细胞对三尖杉酯碱的抗药性与蛋白质高度磷酸化有关；抗性细胞内ｃ－ＲＡＦ－１蛋白激酶磷酸化程度明显提高，可能与多药抗药性和抗细胞调亡有关。     

HL-60多药抗性细胞抗HT诱导凋亡机制的研究

用1mg·L-1三尖杉酯碱(Harringtoning,HT)处理人早幼粒急性白血病HL-60细胞2h,诱导细胞出现明显的凋亡(Apoptosis,Apo)形态学和生化特征,包括染色质凝集、Caspase-3(天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白水解酶-3)活化、DNA断裂等.来自HL-60的多药抗性细胞HR20和HT9抗HT诱导的凋亡,一般认为是P-糖蛋白(P-GP-170)对药物的外排作用引起细胞对凋亡的抗性.但用2mg·L-1 CsA(Cysclosporine A)逆转抗性细胞对药物的外排作用,1mg·L-1 HT作用48h仍不能诱导HR20和HT9细胞凋亡,说明HR20和HT9多药抗性细胞抗HT诱导凋亡的机制不仅仅在于细胞膜上的P-糖蛋白对药物的外排作用,可能还有凋亡相关因子或其他因素参与作用.Caspase-3是细胞凋亡通路中的一个中心环节,HR20和HT9抗HT诱导的Caspase-3活化,这可能是HR20和HT9不能凋亡的一个重要原因.     

白花蛇舌草体外对人肝癌多药耐药细胞Bel-7402抗肿瘤活性的研究

目的探讨白花蛇舌草在体外对肝癌多药耐药细胞Bell-7402生长活性的抑制作用.方法 MTT法检测白花蛇舌草提取物对Bel-7402生长的抑制作用,有无逆转Bel-7402的多药耐药性;用淋巴细胞转化实验检测白花蛇舌草提取物能刺激T淋巴细胞增殖,并筛选出药物的安全剂量范围;集落形成实验观察体外抗癌药物的敏感性.结果白花蛇舌草提取物对肝癌多药耐药细胞Bel-7402的生长具有明显的抑制作用,且这种作用是剂量依赖关系.结论白花蛇舌草提取物在体外对人肝癌多药耐药细胞Be1-7402有抑制作用.     

流式细胞仪测定肿瘤细胞内柔红霉素的含量

用流式细胞仪技术测定了Ｋ５６２／Ａ０２多药耐药细胞系和Ｋ５６２／Ｓ药物敏感细胞系细胞内柔红霉素的含量，发现在２μｍｏｌ／Ｌ的ＤＮＲ孵育条件下，Ｋ５６２／Ａ０２细胞内ＤＮＲ平均道峰值为７２，Ｋ５６２／Ｓ细胞内ＤＮＲ平均道峰值为１１２，细胞人ＤＮＲ含量前都明显低于后。结果表明，流式细胞仪技术能较好地检测出细胞系对ＤＮＲ细胞内蓄积的差异，提示此技术可鉴别多药耐药肿瘤细胞和敏感细胞，可用于临床多药耐药肿     

抗B.t.制剂昆虫细胞品系的选择及其酯酶同工酶的初？…

逐代以９０％的选择压力选择对Ｂ．ｔ．抗性的昆虫细胞品系，结果表明：５Ｂ１细胞对Ｂ．ｔ．抗性的发展是相当缓慢的，第２３代选择细胞的抗性水平突然由原来的３倍上升到１０倍以上，此后抗性在８～１０倍间波动，一直到第３２代，被选择细胞（Ｒ５Ｂ１）和正常细胞（Ｓ５Ｂ１）酯酶同工酶的分析结果表明两种品系细胞有３条共同的酶带，另外，二者也分别拥有２条特异性酶带，被选择细胞（Ｒ５Ｂ１）的细胞酯酶同工酶有此酶带的活力     

红豆草抗赖氨酸加苏氨酸愈伤组织变异系的选择和分析

利用红豆草不胚轴诱导的胚性愈伤组织，经过化学诱变和筛选，得到一个抗赖氨酸加苏氨酸（ＬＴ）的愈伤组织变异系，ＬＴ抗性愈伤组织在脱离选择压６个月后，仍表现出１．５倍于野生型的抗性。ＬＴ抗性可通过再生植株传递到次级愈伤组织，抗性细胞中游 离赖氨酸、苏氨酸、蛋氨酸及异氨酸都有较大提高，分别为野生型细胞的５３、５４、１．３９和４．０７倍。抗性细胞和野生型细胞中天冬氨酸激酶的总活性相近，但前者对赖氨酸的反馈抑     

丙戊酸诱导多药耐药白血病细胞HL-60／ADR凋亡的研究

目的研究丙戊酸对多药耐药白血病细胞HL-60／ADR的抑制作用及其机制。方法采用MTT比色试验观察丙戊酸对多药耐药细胞HL-60／ADR的抑制作用。采用光镜技术观察细胞形态结构的改变,利用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果（1）丙戊酸能明显抑制HL-60／ADR细胞的生长,药物浓度相当于生药32．65mg／mL时,即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度0c．50）相当于生药66．44mg／mL。（2）形态学改变呈典型的凋亡特征。（3）丙戊酸能诱导多药耐药细胞HL-60／ADR凋亡,凋亡率也呈时间和剂量的依赖性。结论丙戊酸对多药耐药细胞HL-60／ADR的生长具有极强的抑制作用,诱导其凋亡是其机制之一。     

丙戊酸诱导多药耐药白血病细胞HL-60/ADR凋亡的研究

目的 研究丙戊酸对多药耐药白血病细胞HL-60/ADR的抑制作用及其机制.方法 采用MTT比色试验观察丙戊酸对多药耐药细胞HL-60/ADR的抑制作用.采用光镜技术观察细胞形态结构的改变,利用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 (1)丙戊酸能明显抑制HL-60/ADR细胞的生长,药物浓度相当于生药32.65mg/mL时,即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)相当于生药66.44mg/mL.(2)形态学改变呈典型的凋亡特征.(3)丙戊酸能诱导多药耐药细胞HL-60/ADR凋亡,凋亡率也呈时间和剂量的依赖性.结论 丙戊酸对多药耐药细胞HL-60/ADR的生长具有极强的抑制作用,诱导其凋亡是其机制之一.     

BYDVCP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性愈伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病基因的质粒Ｐ＾ｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒Ｐ＾ＢｌＡｅｔＳＮ导入融合细胞中。经抗性筛选获得抗潮霉素的阳性克隆并再生植株。对再生植株作ＰＣＲ检测表明，     

GUS和HPT基因的基因枪法转化水稻

以水稻（丹粳－５号）愈伤组织为受体材料，采用基因枪法将含有ＧＵＳ和ＨＰＴ基因的ＣＭ２质粒导入水稻细胞．经过５０ｍｇ／Ｌ的潮霉素筛选，获得抗性愈伤组织，并在同样筛选压力下诱导分化成苗，获得抗性苗．共获得１７个抗性克隆．ＧＵＳ组织化学检测表明，有１２个克隆为ＧＵＳ阳性，ＧＵＳ和ＨＰＴ基因共表达率为７０％左右．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分子检测证明ＨＰＴ基因已整合到水稻基因组中．     

美洲大蠊多肽和顺铂联用对HepG2细胞凋亡及自噬的影响

采用MTT法检测美洲大蠊多肽（PAP-3）与不同浓度的顺铂（DDP）单用或联合使用对人肝癌HepG2细胞增殖的影响；采用流式细胞术检测PAP-3、DDP单独或联合给药干预对HepG2细胞凋亡的影响；Western Blot检测PAP-3、DDP单独或联合给药后HepG2细胞内自噬相关蛋白p62、LC3、Beclin-1、Atg5及PI3K的表达。实验结果显示，与DDP单独给药相比，PAP-3与DDP联合给药对HepG2的细胞的抑制作用更强；PAP-3与DDP联合给药组中细胞的凋亡率与DDP和PAP-3单独给药组相比均有升高（P ＜ 0.05)。与对照组相比，DDP组中，p62蛋白水平降低，LC3II蛋白水平升高，LC3II/I的比例也升高，表现出细胞自噬流的活化；与DDP组相比，联合给药组中p62蛋白水平回升，LC3II蛋白水平和LC3II/I的比例均有回落。且联合给药组中PI3K、Atg5、Beclin-1等自噬相关蛋白的量均较DDP组减少，而凋亡相关的Caspase-3蛋白的表达量则较DDP组增加。据此推测，PAP-3和DDP的联用可以通过抑制HepG2细胞自噬相关蛋白的表达水平，抑制DDP带来的细胞自噬水平的升高，增加细胞对DDP的敏感性，从而诱导HepG2细胞凋亡。     

耐长春新碱人卵巢癌细胞系的建立和耐药机制的研究

采用浓度递增和短期作用法,从人卵巢上皮癌细胞Ａ２７８０中筛选培养出对长春新碱（ＶＣＲ）耐药的细胞亚株（Ａ２７８０／ＶＣＲ）,并对其耐药指数、交叉耐药性,细胞内ＶＣＲ含量以及细胞多药耐药基因,谷胱甘肽Ｓ转移酶表达进行检测,结果：Ａ２７８０／ＶＣＲ对ＶＣＲ的耐药指数高达６１０００倍,并呈多药耐药性;Ａ２７８０经ＶＣＲ诱导耐药后,细胞内ＶＣＲ含量为０;耐药细胞内ＭＤＲ１表达呈阳性,而ＧＳＴ－π表达则为阴性。上述结果表明Ａ２７８０／ＶＣＲ为一获得性高耐受性细胞系,并呈多药耐药特征,其耐药机理与多药耐药基因表达有关。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合低剂量顺铂诱导多药耐药人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

为研究卵巢癌多药耐药机制和逆转耐药,探讨在低剂量顺铂存在下,人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对多药耐药人卵巢癌细胞的杀伤增效作用及其可能存在的分子病理机制。用顺铂为诱导剂,逐步建立多药耐药人卵巢癌细胞株SKOV3/cDDP。(此细胞株经免疫组化检测P-gp高表达)。TRAIL、顺铂或两药联用12h,24h,48h,采用MTT法测试细胞毒作用,Hochest33258染色荧光显微镜下观察细胞形态学改变,透射电镜下观察亚细胞结构形态,通过流式细胞术检测细胞凋亡比例,Western blot分别检测在联用TRAIL作用前后cFLIP蛋白的表达情况。结果显示:1)单用100ng/mL TRAIL只能杀伤4.67%±0.26%的SKOV3/cDDP细胞,IC50>1000ng/mL。顺铂对SKOV3/cDDP细胞的作用存在剂量依赖性细胞毒效应,这种效应主要通过诱导细胞凋亡实现;2)亚毒性浓度TRAIL(100ng/mL)与亚毒性浓度DDP(1.0μg/mL)联用可杀死52.12%±2.84%的SKOV3/cDDP细胞。呈现出高效协同作用;3)流式细胞术分析、透射电镜观察及荧光显微镜证实其协同性杀伤作用主要通过促进诱导细胞凋亡实现;4)亚毒性浓度TRAIL(100ng/mL)与亚毒性浓度DDP(1.0μg/mL)联用,可使细胞cFLIP蛋白的表达下调,促进了细胞凋亡的发生。结论:TRAIL与亚毒性浓度顺铂联用表现出对多药耐药人卵巢癌细胞的高效杀伤作用,这种作用可能主要由促进细胞凋亡介导实现,cFLIP蛋白的表达减少可能参与这一过程。     

功劳木有效成分逆转肿瘤多药耐药研究

采用高内涵活细胞成像系统检测功劳木10种有效成分对肿瘤细胞K562/ADM细胞内罗丹明(rhodamine123,Rh123)蓄积的影响,结果发现化合物2-9可以不同程度地提高K562/ADM细胞中Rh123的荧光强度(给药浓度为10μmol/L时,Rh123荧光强度增长率分别为15.19%、24.01%、8.70%、73.17%、21.84%、76.98%、17.26%和23.29%).结果表明化合物2-9均具有逆转肿瘤多药耐药活性,其中化合物7的抗多药耐药活性最强.     

BYDV CP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性意伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病毒基因（ＢＹＤＶＣＹｇｅｎｅ）的质粒Ｐｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒严ＰＢｌＡｃｔＳＮ导入融合细胞中．经抗性筛选获得抗潮霉素（Ｈｍ）的阳性克隆并再生植株．对再生植株作ＰＣＲ检测表明，ＣＰ基因已整合到转化植株的基因组中并稳定表达．     

白喉毒素抗性突变型检测系统的建立

在离体培养的中国仓鼠V79细胞中,本研究应用白喉毒素抗性作为表型选择标记建立了一个突变型的检测系统。当细胞用间接诱变剂(环磷酰胺,黄曲霉毒素)和直接诱变剂(丝裂霉素C和乙基甲烷磺酸盐)处理24小时,经2、3天的表达时间后,置于含有0.1Lf/ml的白喉毒素选择培养液中10～14天,用甲醇冰醋酸固定后Giemsa染色,对突变型菌落进行计数,获得很好的剂量效应曲线。同时比较了白喉毒素抗性突变型和乌本苷抗性突变型的频率。此方法较为简便,重复性好,可广泛应用于环境致突变物和致癌物的检测研究。     

少花桂小孢子发生和雄配子体的发育过程

利用传统石蜡切片技术对少花桂（Cinnamomum paueiflorurn）小孢子发生和雄配子体发育过程进行了研究，结果表明，花药含4个小孢子囊，药壁发育为基本型，绒毡层属单型起源，细胞多具双核，于减数分裂时发生解体并流入花药腔内，至雄配子体早期，绒毡层细胞被发育的花粉吸收殆尽，属变形绒毡层.发育过程中药层内壁在内径向、切向壁上均发生U型或V型加厚，表皮细胞减缩退化，花粉母细胞经连续的胞质分裂后多形成左右对称形四分体，成熟花粉粒多为2-细胞花粉粒.