白花蛇舌草提取物体外抗肿瘤作用及机制研究

目的　研究中药白花蛇舌草提取物对Bel 7402细胞抗肿瘤作用及其作用机制.方法　采用MTT法和集落形成实验检测白花蛇舌草提取物对Bel 7402细胞生长的抑制作用;采用淋巴细胞转化实验检测白花蛇舌草提取物对小鼠脾脏T淋巴细胞增殖的刺激作用,并筛选出药物的安全剂量范围;采用透射电镜初步观察药物作用后Bel 7402细胞的形态变化.结果　1)MTT比色实验、集落形成实验的结果表明,白花蛇舌草提取物对Bel 7402细胞的生长具有明显的抑制作用,且这种作用是剂量依赖关系,IC50为1.6g/L;2)透射电镜观察表明,药物作用后的Bel 7402肿瘤细胞的体积变小,核分裂像显著减少,没有明显的凋亡现象;细胞核固缩,异染色质块状聚集浓染,线粒体变大变圆,基质变淡,线粒体嵴变短变少甚至消失,在极度肿胀时,线粒体转化为小空泡状结构,并有细胞膜破损现象.结论　1)白花蛇舌草提取物可能通过直接影响肿瘤细胞能量代谢,对Bel 7402细胞生长具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖关系;2)白花蛇舌草提取物具有促进小鼠脾淋巴细胞增殖的作用.     

维药异常黑胆质成熟剂的抗肿瘤作用及其对细胞迁移的影响

探讨维药异常黑胆质成熟剂(ASM)抗肿瘤作用及其对肿瘤细胞迁移的影响.体外培养人肝癌Bel-7402细胞株、人乳腺癌BCAP 细胞株、人宫颈癌 Hela 细胞株、人胃癌BGC-823细胞株,采用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay,MTT)法检测不同浓度ASM(1、2.5、5、10、15、20、50mg/mL)对人肝癌Bel-7402细胞株、人乳腺癌BCAP细胞株、人宫颈癌Hela细胞株、人胃癌BGC-823细胞株4种肿瘤细胞增殖的影响;选择人肝癌Bel-7402细胞株为研究对象,采用细胞划痕运动实验和扫描电镜技术,观察不同浓度ASM对肝癌细胞迁移的影响.MTT检测结果显示,ASM对人肝癌Bel-7402细胞株、人乳腺癌BCAP细胞株、人宫颈癌Hela细胞株、人胃癌BGC-823细胞株生长均有一定抑制作用,且在15～20mg/mL作用下最为明显,对不同肿瘤细胞株抑制作用不一;体外细胞划痕运动实验和扫描电镜结果显示,ASM对人肝癌Bel-7402细胞运动有一定抑制作用.由此推论,ASM对肿瘤细胞增殖和肿瘤细胞迁移有一定抑制作用.     

白花蛇舌草中多糖抑制骨肉瘤的作用机制

为探讨白花蛇舌草(Hedyotis diffusa)活性成分对骨肉瘤的作用及其机制,对白花蛇舌草中分别提取的黄酮类、三萜酸类、香豆素类和多糖类化合物,用噻唑蓝(MTT)法检测不同提取物对MG-63细胞活性的影响;同时建立裸鼠骨肉瘤移植瘤模型,观察不同提取物对移植瘤生长的抑制作用;并通过流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化,蛋白质免疫印记(Western blot)检测Bax及Bcl-2蛋白表达水平.结果显示:4种提取物都对MG-63细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈现明显的剂量依赖性,最优药物质量浓度为80μg/mL;在此质量浓度下4种提取物对裸鼠移植骨肉瘤均具有抑制作用,其中多糖类对MG-63细胞活性和移植瘤生长的抑制作用最强,明显促进MG-63细胞凋亡,阻滞细胞周期;Bax表达量在48h内随着白花蛇舌草多糖类提取物作用时间延长而增加,而Bcl-2表达量则降低.由上述结果可知,白花蛇舌草活性成分中多糖类的抗肿瘤活性最强,其作用机制可能是通过抑制骨肉瘤细胞增殖、促进细胞凋亡和阻滞细胞周期来达到抑瘤效果.     

白果提取物抗肿瘤作用的研究

为研究白果是否具有抗肿瘤作用,实验通过体外培养肝癌BEL7402细胞和胰腺癌PANC-1细胞,采用5-氟尿嘧啶(5-Fu)作为阳性对照药,评价白果提取物不同组分对肿瘤细胞生长的作用.在实验中,阳性对照药5-Fu具有较好的抗肿瘤作用,对肝癌BEL7402的IC50值为65.77μg/mL,对胰腺癌PANC-1细胞的IC50值为77.87μg/mL;白果提取物的正丁醇和水相组分能够抑制BEL7402细胞和PANC-1细胞生长,而多糖组分和乙酸乙酯组分有较弱的促进两种细胞生长作用.因此,银杏提取物水相和正丁醇组分对肝癌BEL7402细胞和胰腺癌PANC-1细胞具有抑制作用.     

三种抗癌中草药单一提剂及其组合剂抑瘤率比较研究

探讨并比较了苦参、半枝莲、白花蛇舌草的单一提剂水/醇提物及其组合剂对人结肠癌细胞株SW620生长的抑制作用.通过体外培养SW620细胞,加入终浓度分别为1、3、5mg.mL-1的单一提剂及其组合剂,采用MTT法测定药物对SW620的增殖抑制率(IR).结果表明单一提剂对SW620体外增殖均有抑制作用,且呈浓度剂量依赖性;中草药醇提剂抑瘤作用均强于水提剂.组合剂中,除半枝莲与白花蛇舌草水提组合剂比单一提剂作用弱外,其余组合剂均强于单一提剂的抑瘤率,且呈浓度剂量依赖性;中草药醇提液组合剂抑瘤作用均强于水提液.说明苦参、半枝莲、白花蛇舌草水/醇提取物对SW620细胞的生长均有抑制作用,醇提剂抗肿瘤有效成分多于水提剂;三种中草药组合剂抗肿瘤效果优于单一提剂(除半枝莲与白花蛇舌草水提组合剂外).     

亚砷酸诱导肝癌Bel-7402细胞分化的研究

目的:探讨亚砷酸诱导肝癌Bel-7402细胞的分化作用。方法:通过体外细胞培养,观察肿瘤的生长特点;用Giemsa染色法观察细胞的分化形态特点,比色法测定酪氨酸-α-酮戊二酸转氨酶(TAT)活性的改变。结果:在亚砷酸(0 25、0 5、1 0mol/L)作用下,肝癌Bel-7402细胞连续培养4d,细胞生长抑制作用较明显,并呈剂量依赖关系(P<0 05);培养到第5d,细胞形态和结构向成熟阶段分化;在连续培养4d以后,酪氨酸-α-酮戊二酸转氨酶的比活性升高并呈时间依赖关系(P<0 05)。结论:亚砷酸具有明显的诱导肝癌Bel-7402细胞分化作用。     

四种伏牛山原生药用植物的抗癌活性

基于伏牛山原生药用植物白花蛇舌草、淫羊藿、鱼腥草和冬凌草在肿瘤治疗中的临床应用,研究了该四种药物对食管癌和肝癌细胞中的抑制活性。通过萃取获得药物不同浓度的乙醇提取物后,使用噻唑蓝(MTT)法测定了EC109食管癌和HepG2肝癌细胞接受不同浓度不同时间药物刺激后的生长状况。其中,淫羊藿和鱼腥草的最低IC50仅为0.18 mg/mL和0.16 mg/mL,而白花蛇舌草和冬凌草的最低IC50分别达到0.52 mg/mL和0.66 mg/mL。此研究结果首次证明:白花蛇舌草、淫羊藿、鱼腥草和冬凌草对于食管癌EC109和肝癌HepG2细胞有浓度依赖和时间相关的体外生长抑制作用,为其临床应用和进一步研究奠定基础。     

四种伏牛山原生药用植物的抗癌活性

基于伏牛山原生药用植物白花蛇舌草、淫羊藿、鱼腥草和冬凌草在肿瘤治疗中的临床应用,研究了该四种药物对食管癌和肝癌细胞中的抑制活性。通过萃取获得药物不同浓度的乙醇提取物后,使用噻唑蓝(MTT)法测定了EC109食管癌和HepG2肝癌细胞接受不同浓度不同时间药物刺激后的生长状况。其中,淫羊藿和鱼腥草的最低IC50仅为0.18mg/mL和0.16mg/mL,而白花蛇舌草和冬凌草的最低IC50分别达到0.52mg/mL和0.66mg/mL。此研究结果首次证明:白花蛇舌草、淫羊藿、鱼腥草和冬凌草对于食管癌EC109和肝癌HepG2细胞有浓度依赖和时间相关的体外生长抑制作用,为其临床应用和进一步研究奠定基础。     

中药柴胡提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内VCR蓄积的影响

目的　测定中药柴胡(BupleurunChineseDC,BCDC)提取物对人肝癌细胞BEL 7402细胞内VCR蓄积的影响,以探索柴胡逆转BEL 7402细胞多药耐药的机制.方法　高效液相色谱法测定BCDC作用于BEL 7402后细胞内VCR蓄积情况的变化.结果　柴胡可使人肝癌细胞BEL 7402细胞内VCR浓度升高(P<0.01).结论　柴胡可以增加VCR在BEL 7402细胞内的积聚浓度,部分逆转BEL 7402细胞的MDR.     

白花蛇舌草乙醇提取物对人结肠癌HT-29细胞增殖及Hedgehog信号传导通路表达的影响

目的:观察白花蛇舌草乙醇提取物对人结肠癌HT-29细胞增殖及Hedgehog信号传导通路表达的影响.方法:采用人结肠癌细胞HT-29常规体外培养,随机设定空白组和不同浓度(1、3、5mg/mL)白花蛇舌草乙醇提取物组,干预24h,倒置显微镜观察细胞形态变化；MTT法测定不同浓度药物对HT-29细胞增殖的影响；RT-PCR检测药物作用后HT-29细胞Shh、Ptch、Smo和Gli-1mRNA的表达.结果:白花蛇舌草乙醇提取物干预后,能抑制HT-29细胞增殖,并呈现出量效作用；Shh、Ptch、Smo和Gli-1 mRNA 表达随药物浓度的增加而减少.结论:白花蛇舌草乙醇提取物能抑制HT-29细胞与其可抑制Shh、Ptch、Smo和Gli-1的表达有关.     

α-四（4-羧基苯氧基）酞菁锌的合成与抗肿瘤活性研究

通过2步合成了水溶性的α-四（4-羧基苯氧基）酞菁锌（Ⅱ）,采用UV-Vis、IR、元素分析、激光解吸电离飞行时间质谱（TOF-MS）对配合物进行了表征.在光诱导条件下,采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）,研究了此酞菁锌配合物对Bel-7402细胞抑制作用,考察了不同浓度的配合物对抑瘤效果的影响,当浓度为100 mg.L-1时对肿瘤的抑制率可达71%左右,并确定其细胞生长抑制50%时的药物浓度（即IC50值）为21 mg.L-1.结果发现：此酞菁锌是1种很有潜力的抗癌光敏剂,在光诱导条件下,适宜的浓度具有较高的抑制率,并探讨了其抑瘤机制.     

中药柴胡提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度的影响

目的测定中药柴胡(Bupleurun Chinese DC, BCDC)提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)的影响,以探索柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制.方法以Fura-2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计分别测定不同条件下的BEL-7402细胞内[Ca2 ]i.结果柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降(P<0.001).结论柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降,为一种钙离子通道阻滞剂(Calcium channel blocker, CCB),提示钙离子通道阻滞作用为柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制之一.     

冠突散囊菌与金黄色葡萄球菌混合发酵次级代谢产物及细胞毒活性

 为研究冠突散囊菌与金黄色葡萄球菌混合发酵次级代谢产物及细胞毒活性,采用硅胶柱、凝胶柱和高效液相色谱等方法进行分离纯化,并通过各种波谱技术进行结构鉴定,以4种肿瘤细胞A549、MCF-7、Bel-7402、Colo205为供试细胞株,采用MTT法对化合物进行细胞毒活性研究。从冠突散囊菌与金黄色葡萄球菌固体混合发酵提取物中分离鉴定了7个化合物,其中4个吲哚二酮哌嗪生物碱为echinulin(1)、cristatumin F(2)、neoechinulin A(3)、preechinulin(4),2个聚酮类化合物为flvoglaucin(5)、tetrahydroauroglaucine(6),1个nonadride类化合物为epiheveadride(7)。活性结果表明,化合物对4种肿瘤细胞株均具有不同程度的细胞毒活性,化合物3、5和7对肝癌Bel-7402细胞毒活性较强。     

OA对人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402增殖的影响和对细胞凋亡的诱导作用研究

 以人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402为研究对象,通过MTT法、细胞外部形态观察、Annexin V.FITC&;PI双染法及TUNEL法等方法,研究了腹泻性贝毒的主要组分大田软海绵酸（Okadaic acid, OA）对其增殖的影响及对细胞凋亡的诱导作用。结果表明：OA对人两株细胞的增殖均有显著的抑制作用,24 h IC₅₀分别为65 ng/mL和60 ng/mL,且这种抑制作用呈剂量依赖性。OA导致两株细胞的形态均发生明显变化：细胞变圆,脱壁,细胞膜形成泡状突起,最终形成膜包裹的凋亡小体。Annexin V.FITC和PI双染法及TUNEL法检测均发现：OA能够诱导两株细胞发生不同程度的凋亡,且凋亡细胞的比例与OA的浓度相关。以上结果表明：OA能够通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而对人肝细胞和肝癌细胞造成影响,且这种影响的程度与OA的浓度和作用时间密切相关。     

红树林内生真菌2524号中分离的新神经酰胺

红树林内生真菌2524号，采自香港红树Auicennia marina的种子中。从该菌的培养液提取物中分离得到两个新的神经酰胺：[2′，3′-dihydroxytetracosanolyamino]-1,3-dihydroxy-octadecane和[2′，3′-dihydroxydocosanoylami-no]-1,3-dihydroxy-octadecane，化合物的结构通过IR，1D和2DNMR，FAB-MS，ESI-MS^n等实验确定。这两个化合物对肿瘤细胞系Bel-7402，NCI-4460和人体正常细胞系L-02不显示有意义的细胞毒性。     

新型脱碳木脂素类化合物合成方法与肿瘤抑制活性研究

利用Mn(Ⅱ)/Co(Ⅱ)/PhP(O)HOR/O2新催化体系合成了一系列新型脱碳木脂素类化合物(2a～2g),并采用MTT比色实验法,研究了所合成化合物体外抗肿瘤抑制活性.分别对人乳腺癌细胞(MCF-7),人肝癌细胞(Bel-7402),人肺癌(A549)和人子宫颈癌细胞(Hela)进行检测.结果表明:化合物2a～2g对4种癌细胞均有较强的抑制作用,尤其是对人肝癌细胞Bel-7402的抑制效果明显,其中化合物2b显示出比相同条件下紫杉醇更好地抗癌抑制活性(IC50:18.9μg/mL),说明所合成的芳基烯二聚化合物2b具有更好的应用前景。     

Blood compatibility of nano-hydroxyapatite dispersed using various agents

Nano-hydroxyapatite (nHAP),dispersed with three kinds of dispersants (heparin sodium,polyacrylic sodium and wa-ter),reacted with red blood cell,Bel-7402 tumor cell,to compare their dispersing efficiency against nHAP from one another. The blood compatibility of nHAP is also determined by blood solubil-ity experiment so that the capability of different dispersant dis-persing against nHAP of different concentration and the relation between nHAP and blood compatibility have been determined. The inhibiting function of Bel-7402 against tumor cells is deter-mined with the MTT staining method. The study result shows that heparin sodium has the best dispersing efficiency for nHAP with-out the phenomenon of hemolysis.     

不同序贯的吉非替尼与化疗药物联合对人肝癌细胞Bel-7402增殖的抑制作用

应用MTT法检测了靶向性药物吉非替尼(gefitinib)分别与阿霉素(ADM)、氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)和紫杉醇(PTX)等4种化疗药物按照不同给药序贯联合作用对肝癌细胞Bel-7402增殖的影响.结果表明,吉非替尼与4种化疗药物联用对Bel-7402细胞增殖的抑制作用效果均要好于单药治疗,其对细胞的IC50较单独用药时明显较低.联合用药效果受到给药序贯的影响,用靶向性药物前先用化疗药物的效果要好于先用靶向性药物后用化疗药物.研究结果可供肝癌临床治疗参考,有助于临床降低用药剂量,减轻药物毒副作用.